胃癌組織GLDC蛋白表達及其與根治術后復發的關系探討

祝孟川,馮文婷,余強

(信陽市中心醫院1.普外二科,2.急診外科, 河南 信陽 464000)

胃癌是常見的惡性腫瘤之一,在國內發病率約為0.431‰,死亡率約為0.296‰[1]。目前,根治術仍是胃癌治療的“金標準”[2],雖有較好的臨床療效,但術后復發風險極高。術后復發是胃癌患者術后死亡的主要因素,為改善患者術后生存率,篩選胃癌根治術后復發的危險因素非常必要。甘氨酸脫羧酶(GLDC)在甘氨酸裂解過程中發揮關鍵作用,Chen等[3-4]發現在腎細胞癌組織中GLDC可發揮一定抑癌作用,其表達水平與癌癥的預后有一定的相關性。Min等[5]發現,GLDC在胃癌細胞系中也可發揮抑癌功效,但癌組織中GLDC蛋白水平是否與胃癌患者根治術后復發有關尚需深入探討。鑒于此,本研究選取106例行根治術治療的胃癌患者,探究其胃癌組織GLDC蛋白表達水平與術后復發的關系,以期為胃癌患者臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經倫理委員會批準后,選取2016年3月至2019年3月在本院行根治術治療的胃癌患者106例,男75例,女31例;年齡29～81歲,中位年齡62歲;TNM分期Ⅰ期31例,Ⅱ期58例,Ⅲ期17例;腫瘤最大直徑2.4～7.5(4.39±0.78)cm。納入標準:(1) 均行組織病理學分析確診為胃癌;(2) 均為原發胃癌,滿足根治術指征并接受根治術;(3) 術前未行放化療且無遠處轉移;(4) 均對本研究知情同意。排除標準:(1) 合并其他腫瘤;(2) 圍術期內死亡;(3) 治療前3個月內經歷過其它手術或創傷;(4) 合并嚴重的肝、腎等臟器病變;(5) 合并傳染病、血液疾病、免疫疾病。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法檢測胃癌組織及切緣正常組織GLDC蛋白表達水平 將癌組織或切緣正常組織制成蠟塊,依次進行切片、脫蠟、水化、抗原修復、孵育、顯色、蘇木素復染、脫水、封片、顯微鏡下觀察。依據染色強度評分×陽性細胞百分比評分對蛋白表達行半定量分析,染色強度評分:無著色0分,淡黃色1分,棕黃色2分,棕褐色3分;陽性細胞百分比評分:陽性細胞占比≤5% 記0分,6%～25%記1分,26%～50%記2分,51%～75%記3分;>75%記4分;二者乘積<4分為低表達,≥4分為高表達[6]。

1.2.2 術后復發的判斷 術后通過電話隨訪和門診復診觀察復發情況,術后復診前2年每3個月1次,隨后每6個月1次,結合癥狀、體征和組織病理學綜合診斷。

1.2.3 胃癌根治術后復發的影響因素分析 統計患者年齡、性別、腫瘤大小、病灶部位、lauren分型、T和N分期、分化程度、術后輔助化療、癌組織GLDC蛋白表達水平等,將其記為自變量,將胃癌根治術后是否復發記為因變量,分析自變量與因變量之間的關系。

1.3 統計學處理

采用SPSS 25.0統計軟件處理數據,計數資料以例表示,行χ2檢驗,若任一理論頻數>1且<5需對檢驗校正;采用Cox回歸分析術后復發影響因素;采用Kaplan-Meier生存曲線分析不同GLDC蛋白水平患者術后3年的復發率。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 胃癌組織與切緣正常組織GLDC蛋白表達水平比較

胃癌組織中GLDC蛋白低表達率(48.11%)高于切緣正常組織(3.77%)(P<0.05),見圖1。

A.胃癌組織;B.切緣正常組織圖1 胃癌組織與切緣正常組織GLDC蛋白表達(×400)Fig 1 GLDC protein expression in gastric cancer tissue and normal tissue at the incisal edge(×400)

2.2 不同臨床特征患者胃癌組織GLDC蛋白表達水平比較

腫瘤直徑≥5 cm、lauren分型為彌漫型、T3～T4分期 、N1～N3分期胃癌患者胃癌組織GLDC蛋白低表達占比均高于腫瘤直徑<5 cm、lauren分型為腸型或混合型、T1～T2分期 、N0分期胃癌患者(P<0.05),見表1。

表1 不同臨床特征患者胃癌組織GLDC蛋白表達水平比較 例Tab 1 Comparison of GLDC protein expression level in gastric cancer tissues of patients with different clinical characteristics cases

2.3 胃癌根治術后復發率及復發組與未復發組胃癌組織GLDC蛋白表達水平比較

106例胃癌患者根治術后隨訪3年,失訪3例(GLDC低表達2例,高表達1例),余103例,復發67例(GLDC低表達39例),未復發36例(GLDC低表達10例),復發率為65.05%(67/103)。復發組胃癌組織GLDC蛋白低表達占比高于未復發組(χ2=8.695,P=0.003)。

2.4 胃癌患者根治術后復發的影響因素分析

復發組腫瘤直徑≥5 cm、T3～T4分期、N1～N3分期占比均高于未復發組(P<0.05),行術后輔助化療占比低于未復發組(P<0.05),見表2。

表2 胃癌患者根治術后復發與臨床病理特征的關系 例Tab 2 Relationship between recurrence and clinicopathological characteristics of patients with gastric cancer after radical surgery cases

Cox分析結果顯示,腫瘤大小、T分期、N分期是胃癌患者根治術后復發的危險因素(P<0.05),術后輔助化療、胃癌組織GLDC蛋白高表達水平是其保護因素(P<0.05),見表3。

表3 Cox回歸分析Tab 3 Cox regression analysis

2.5 胃癌組織GLDC蛋白不同表達患者根治后3年復發的Kaplan-Meier曲線

GLDC蛋白低表達的胃癌患者根治術后3年復發率明顯高于GLDC蛋白高表達患者(Log-rank檢驗χ2=10.801,P=0.001),見圖2。

圖2 GLDC蛋白高表達組與低表達組生存曲線Fig 2 Survival curve of GLDC protein high expression group and low expression group

3 討 論

胃癌是消化系統常見的惡性腫瘤,手術是目前公認唯一能治愈胃癌的方法[7],但即使行根治術治療,術后2年內復發率仍超過40%,而復發正是胃癌患者病死率高的重要原因[8],故分析胃癌根治術后復發的影響因素非常必要。

本研究表明,胃癌組織GLDC蛋白低表達率高于切緣正常組織,表明胃癌組織中GLDC會異常低表達。GLDC是一種甘氨酸代謝酶,其基因在胃癌發生、發展過程中突變,啟動子脫氧核糖核酸發生了高度甲基化,抑制信使核糖核酸的轉錄,影響了基因表達與蛋白的合成,故胃癌組織中GLDC蛋白的表達水平下調,本研究結果與Min等[5]報道的一致,證實了胃癌組織中GLDC蛋白低表達。李哲豐等[9-10]發現在卵巢癌細胞、前列腺癌組織中,GLDC呈現高表達,發揮促癌功效,與在胃癌組織中的表達水平和作用相反,可能與GLDC在不同類型的癌癥中的作用機制不同有關,有待深入探討。

本研究顯示,胃癌組織GLDC蛋白表達水平與腫瘤大小、lauren分型、T分期、N分期相關,且復發組癌組織GLDC蛋白低表達率高于未復發組,Cox分析顯示GLDC蛋白高表達是胃癌患者根治術后復發的保護因素。GLDC基因在胃癌細胞中發揮抑癌基因功效,其GLDC基因組不僅參與細胞的增殖與分化、誘導細胞G1-S-G2分裂期阻滯,還可通過增強絲切蛋白的泛素化影響細胞骨架重塑,通過降低機體活性氧自由基的水平增強細胞的自噬能力發揮抑癌功效[11],且GLDC蛋白能抑制癌細胞的增殖、遷徙、浸潤等行為,促進癌細胞的凋亡,削弱癌細胞的擴散、轉移能力,進而抑制腫瘤進展,降低復發風險[12]。本研究Kaplan-Meier生存曲線分析結果顯示,胃癌組織GLDC 蛋白低表達患者的復發率明顯高于高表達患者,進一步證實了胃癌組織GDCL蛋白的表達水平與患者行根治術后復發的相關性。此外,Cox多因素分析結果顯示,腫瘤大小、T分期、N分期均是胃癌患者根治術后復發的危險因素,術后輔助化療是保護因素。腫瘤直徑越大,浸潤的范圍越廣,T分期級別越高,浸潤的程度越深;N分期越高,淋巴結轉移數目越多,侵犯程度越大,越容易導致術后復發;術后輔助化療可更徹底清掃手術時可能殘存的癌組織,提升根治切除率,與既往研究[13-15]結果一致。

綜上所述,GDCL蛋白在胃癌患者癌組織中表達水平下調,在根治術后復發的胃癌患者癌組織中表達水平更低,GDCL蛋白表達水平、腫瘤大小、T分期、N分期、術后輔助化療均是胃癌患者根治術后復發的影響因素。建議臨床增加對胃癌組織GDCL蛋白低表達患者術后隨訪頻率,結合腫瘤直徑和T、N分期給予合理輔助化療方案,以降低復發風險,改善患者預后。