海螺望春花優株花蕾不同時期化學成分比較分析

駱緒美，韓文妍，程明偉，蘭偉，任杰

（1.安徽省林業科學研究院，安徽合肥 230088；2.阜陽師范大學生物與食品工程學院，安徽阜陽 236037；3.安徽省農業科學院農業工程研究所，安徽合肥 230031）

海螺望春花（Yulania denudatecv. Hailuo）原產安徽懷寧縣石鏡鄉鄧林村海螺山，為安徽省特有木蘭科玉蘭屬優良種質資源，其干蕾為藥用辛夷的一種。從16 世紀起，石鏡鄉就以采收海螺望春花花蕾作中藥而馳名國內外[1-2]。辛夷性溫味辛，歸肺胃經，具有抗炎、抗菌、抗過敏等作用，主治風寒頭痛、鼻塞、鼻淵和鼻流濁涕等病癥[3-11]。

辛夷現代研究多集中在揮發油和木蘭脂素等化學成分和藥理研究上，對其最佳采摘時間多以花蕾形態描述。如宋代《本草圖經》[12]和明代《本草品匯精要》[13]均記載：“花蕊縮者良，已開者劣，謝者不佳?！泵鞔侗静菥V目》[14]記載：“河尖銳儼如筆頭，重重有青黃茸毛順鋪?！薄吨袊幉膶W》[15]記載：“本品以完整未開花蕾，內瓣緊密，色綠，無枝梗，香氣濃郁為佳?！睂ζ浠ɡ俨烧獣r間描述上有2 個時間點，唐代《新修本草》記載：“正月、二月好采”，《吳普本草》和《名醫別錄》中記載：“九月采實，曝干?！辫b于各種說法不一，為摸清辛夷最佳采蕾期及優良單株間花蕾生長差異，筆者自海螺望春花當年花蕾花芽分化開始，每月定株定量采摘花蕾，直至翌年3 月花開止，對其花蕾的揮發油等主要化合物含量進行測定分析，旨在掌握花蕾內含物生長規律及其最佳采蕾期，為辛夷采摘時間提供基礎依據。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集與處理

試驗樣品采自懷寧縣石鏡鄉海螺山，為前期優選的望春花優良單株，樹齡均為100 年以上，樣品采集時間自2019 年10 月至2020 年3 月。每個樣品采集1 500 g 鮮蕾，將采回的樣品進行干燥處理，烘箱中65℃下烘干至恒重，粉碎機打碎后過80 目篩。并將粉末放入樣品瓶中置于3℃～4℃的低溫樣品保存柜中保存備用。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試驗儀器。液相色譜儀（Agilent 1260 高效液相色譜儀系統，安捷倫科技公司）；超聲波清洗器（KQ-500，江蘇昆山超聲儀器有限公司）；電子天平（FA1104，上海天平儀器廠）；低速離心機（SC-3610，安徽中科中佳科學儀器公司）；高速離心機（TG16-WS，長沙湘儀離心機儀器有限公司）；氮吹儀（EVAPTM112，美國Organomation Associates，Jnc.公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱（DHG-9070A，上海一恒科技有限公司）；1 000 mL 和100 mL 移液器（德國艾本德公司）；揮發油提取器（鄭州益康化工產品有限公司）；50 mL和15 mL 離心管，10 mL 容量瓶、100 mL 量筒、1 000 mL圓底燒瓶、進樣瓶等。

1.2.2 試驗試劑。α-蒎烯、桉葉油素（ACROS 公司）；β-蒎烯、月桂烯、樟腦（北京伊諾凱科技有限公司）；乙腈、甲醇（HPLC 級，美國TIDEA 公司）；乙酸乙酯（AR 級，西隴化工股份有限公司）；PSA（40～60 μm）為農殘級（北京艾杰爾科技有限公司）；C18為農殘級（北京艾杰爾科技有限公司）；GCB 為農殘級（Agela Technologies 公司）；超純水（UPT-II-10T 型，成都超純科技有限公司）。

1.3 揮發油的提取

采用《藥典》提供的水蒸餾提取法提取揮發油[4]。取50 g 干燥海螺望春花粉末置于容量1 000 mL 蒸餾燒瓶中，加入適量的去離子水與其混合均勻，并將其進行加熱回流。加熱至微沸時，保持5 h 的微沸狀態進行提取，蒸餾結束后關閉電源。冷卻1 h 后，讀取并收集所提取的揮發油，用無水硫酸鈉去水，避光封閉保存，放置過夜，濾除固體無水硫酸鈉后，稱重[16]。

1.4 揮發油中活性成分的GC-MS 測定

氣相色譜- 質譜分析：HP-GC-5890-5970BMSD 型色譜-質譜聯用儀；色譜柱：SE-54（25 m×0.25 mm，0.25 μm）彈性石英毛細管柱；色譜柱程序升溫條件：初始溫度80℃，保持8 min 后，以4℃/min 的速率升溫至220℃并保持15 min；載氣He，柱前壓為49 kPa，分流比為1∶50；進樣口溫度250℃，離子源溫度260℃；電離電壓70 eV；質量掃描范圍：30～400 amu。

1.5 活性成分的標準曲線

分別將1 000 mg/L 的α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、桉葉油素、樟腦標準溶液用色譜正己烷稀釋配得50、30、20、10、5 mg/L 等系列標準工作溶液，在上述氣相色譜-串聯質譜條件下進行測定，以5 種有效成分的質量（ng）與峰面積作標準曲線。其中y 為5 種有效成分峰面積，x 為有效成分濃度（mg/L）。由圖1 可知，5 種活性成分的樣量均在5～50 mg/L 范圍內線性關系良好。

圖1 揮發油活性成分的標準曲線與方程

2 結果與分析

2.1 優株花蕾不同時期總揮發油含量

對3 株優株不同時期的揮發油含量進行測定分析，得出（表1）：1～3 號優株干燥花蕾的揮發油凈提取率均在1%以上，符合《藥典》對于辛夷的質量標準要求。1 號優株不同時期的揮發油凈提取率介于3.31%～6.71%，其中翌年1、2 月（6.71%）最高，3 月（3.31%）最低。2 號和3 號優株的揮發油凈提取率較為相近；2 號優株揮發油凈提取率介于2.60%～3.96%，翌年2 月（3.96%）最高，3 月（2.60%）最低；3號優株揮發油凈提取率介于1.73%～3.37%，2 月（3.37%）最高，3 月（1.73%）最低。

表1 優株花蕾不同時期總揮發油含量

2.2 優株花蕾不同時期5 種有效成分含量

不同時間段（10 月、11 月、12 月、翌年1 月、2 月、3 月）對優株花蕾的α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、1，8-桉葉素、樟腦內含物含量進行測定分析得出（表2）：1 號優株α-蒎烯提取率介于0.11%～0.28%，最高為11 月（0.28%）；2 號優株α-蒎烯提取率介于0.06%～0.20%，最高為1 月（0.20%）；3 號優株α-蒎烯提取率介于0.04%～0.17%，最高為12 月（0.17%）。1 號優株β-蒎烯提取率介于0.30%～0.73%，最高為11 月（0.73%）；2號優株β-蒎烯提取率介于0.11%～0.46%，最高為2 月（0.46%）；3 號優株β-蒎烯提取率介于0.09%～0.47%，最高為12 月（0.47%）。1 號優株月桂烯提取率介于0.13%～0.40%，最高為11 月（0.40%）；2 號優株月桂烯提取率介于0.02%～0.88%，最高為11 月（0.88%）；3 號優株月桂烯提取率介于0.04%～0.17%，最高為3 月（0.17%）。1 號優株1，8-桉葉素提取率介于0.81%～1.83%，最高為11 月（1.83%）；2 號優株1，8-桉葉素提取率介于0.23%～0.80%，最高為1 月（0.80%）；3 號優株1，8-桉葉素提取率介于0.17%～0.45%，最高為12 月（0.45%）。樟腦的提取量較少，株間差距較大，僅1 號優株能提取，且各月份間差異不大。

表2 優株花蕾不同時期5 種有效成分的含量%

總體來看（圖2），1 號優株的5 種有效成分提取量均高于其他優株，最高提取量為11 月（3.25%）；2 號優株5種有效成分最高提取量為1 月（2.23%）；3 號優株的5 種有效成分最高提取量為12 月（1.22%）。

圖2 優株花蕾不同時期5 種有效成分含量總和變化

2.3 花蕾最佳采集時間和最佳優良單株

對3 株優株不同月份揮發油凈提率進行比較（圖3）可知，1 號優株的月揮發油提取率遠高于2 號、3 號優株，1號優株揮發油提取率最高為1—2 月，2 號、3 號優株揮發油提取率最高為2 月。3 種優株揮發油含量月變化規律較為一致，10 月至翌年1 月花蕾揮發油含量一直處于上升積累期，至2 月達最高值，3 月花即將開放時明顯下降，故2 月為其花蕾采集最佳時間。

圖3 優株花蕾不同時期揮發油提取率

海螺望春花優株10 月至次年3 月花干蕾揮發油含量月平均值及標準差（表3）結果顯示，1 號優株的揮發油月平均提取率（5.00%）高于2 號優株（2.99%）和3 號優株（2.55%），且具有顯著的差異性（P＜0.05）。

表3 優株花蕾揮發油提取率月平均值

海螺望春花優株從10 月至次年3 月花干蕾5 種有效成分總量平均值以及標準差（表4）的結果顯示，1 號優株的5 種有效成分總含量（2.3%）均高于2 號（1.2%）和3 號優株（0.07%），具有顯著的差異性（P＜0.05）。

表4 優株花蕾5 種有效成分總和的平均值

3 結論與討論

3.1 最佳優良單株選擇

海螺望春花干燥花蕾的揮發油凈提取率遠高于《藥典》中規定的辛夷質量標準（1%）。1 號優株不論是揮發油提取率還是5 種有效成分的總含量均顯著高于2 號和3號優株，其單株花蕾結實量大（前期研究基礎上），花蕾揮發油提取率最高，為6.71%，5 種共有成分總量也為最高（3.25%）；1 號優株的揮發油月平均提取率（5.0%）明顯高于2 號優株（2.99%）和3 號優株（2.55%），差異顯著。因此1 號優株為最佳藥用辛夷采蕾優良單株。

3.2 優株不同生長期揮發油提取的規律性

海螺望春花優株的揮發油提取率在不同的生長期內均呈拋物曲線變化，揮發油的提取率隨花蕾生長而增加，至翌年1、2 月相對較高，2 月達峰值，翌年3 月均明顯下降。這與徐植靈等[17]研究發現海螺望春花提取率在不同的生長期規律性較為一致。該研究結果表明，2 月為海螺望春花優株花蕾最佳采集時期。

3.3 優株不同生長期5 種有效成分提取的規律性

徐植靈等[17]曾對市面上9 種海螺望春花花蕾有效成分進行了對比，其中α-蒎烯、β-蒎烯、1，8-桉葉素、樟腦、α-松油醇等是辛夷揮發油所共有的化學成分。該試驗對選取的5 種有效成分進行分析發現，不同活性成分所表現出的高低規律有較大差異，無顯著相關性，1、2 號優株5種有效成分含量月變化規律較為一致。每種活性成分的最高值出現在不同的月份，故可針對性地在不同時間內提取，以獲取單種成分最高值。

海螺望春花優株花蕾活性成分在生長期內沒有呈現一致的規律性，可能有以下幾點原因：其一，花蕾生長至開花前，要褪去3 層苞片，部分月份在采摘花蕾時可能正在褪苞片，影響其當月試驗測定結果；其二，該試驗僅采集了3 株優株，數量較少，會對試驗數據造成較大的影響，故后期應加大試驗樣品的數量，重復驗證試驗結果。