不同產地野菊花的質量分析

匡秀華,姜亞潔,2,張彩燕,3,谷亞慧,張 琪,樊克鋒,李利紅

(1.河南牧業經濟學院 動物醫藥學院,河南 鄭州 450046; 2.河北工程大學 生命科學與食品工程學院,河北 邯鄲 056038; 3.江蘇沙鋼集團有限公司,江蘇 張家港 215625)

野菊花是菊科植物野菊的頭狀花序。野菊花味苦、辛、微寒,歸肝、心經,具有清熱解毒、瀉火平肝的功效[1]?，F代藥理和中藥歸經理論的研究表明,野菊花中主要含有黃酮類(如槲皮素、木犀草素、蒙花苷等)、揮發油、多糖等成分,具有抗菌、抗炎、鎮痛和抗氧化活性等作用[2-5]?！吨腥A人民共和國獸藥典》(2020版)[1]和《中華人民共和國藥典》(2020版)[6]均收錄了野菊花,表明了其較高的藥用價值。

隨著我國施行“獸用抗菌藥使用減量化行動”,農業農村部頒布的第194號 “退出除中藥外的所有促生長類藥物飼料添加劑品種”公告。2013年農業農村部第2038號公告將野菊花作為天然植物飼料原料收錄于《天然植物飼料原料目錄》,2018年我國頒布了《天然植物飼料原料通用要求國家標準(GB/T 19424—2018)》[7]文件,中獸藥在臨床養殖中的應用受到重視。野菊花作為天然植物飼料原料,其開發和利用也備受關注。但野菊花產地廣泛,質量參差不齊,進行野菊的質量分析和鑒別工作是當前的迫切需求。本試驗從野菊花的外觀與性狀、顯微鑒別與薄層鑒別、水分、總灰分與酸不溶性灰分、蒙花苷含量測定等方面進行分析,為天然植物飼料原料的質控方法提供技術參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

分析天平(BSA224S- CW,賽多利斯科學儀器(北京)有限公司);生物顯微鏡(BX43,奧林巴斯(中國)有限公司);薄層色譜成像系統(GoodLook-1000,上?？普苌萍加邢薰?;高效液相色譜儀(Ultimate-300,賽默飛世爾科技有限公司);野菊花對照藥材(AP80511,中國食品藥品檢定研究院);蒙花苷對照品(B20860-20 mg,中國食品藥品檢定研究院。)

按照北京中獸藥聯盟制定的《天然植物飼料原料團體標準制定樣品規范》,征集13批次不同產地天然植物飼料原料野菊花,經中獸藥教研室鑒定為正品。野菊花樣品詳細信息見表1。

表1 13批野菊花樣品來源信息

1.2 試驗方法

1.2.1 外觀與性狀

依照《天然植物飼料原料通用要求國家標準(GB/T 19424—2018)》[7]的要求,從形狀、大小、表面、斷面、氣味等方面進行觀察,同時要求藥材和飲片外觀不得有蟲蛀、發霉、其他物質污染等異?，F象。

1.2.2 顯微鑒別與薄層鑒別

參照2020版《中華人民共和國獸藥典》[1]進行顯微鑒別。參照2020版《中華人民共和國藥典》[6]進行薄層鑒別。

1.2.3 水分

參照GB/T 6435《飼料中水分的測定》[8],采用直接干燥法測定樣品水分。

1.2.4 總灰分與酸不溶性灰分

參照2020版《中華人民共和國獸藥典》[1]進行操作和檢測。

1.2.5 蒙花苷含量測定

參照2020版《中華人民共和國獸藥典》[1],采用高效液相色譜法(HPLC)測定蒙花苷含量。

2 結果與分析

2.1 不同產地野菊花的外觀與性狀

不同產地的13批野菊花樣品粉碎前(圖1)與粉碎后(圖2)的外觀性狀差異較大。圖1為13批樣品粉碎前,形狀為類球型舌狀花,各樣品無明顯差異。質地干燥易碎?；ò鸀辄S色至棕黃色,皺縮卷曲;有4～5個苞片,外苞片呈長條形,外表面有白毛。內苞片橢圓形、無毛,芽底有殘梗。直徑約0.3～1 cm,3、6、11、13號樣品直徑較大,約0.5～1 cm,其余樣品直徑約0.3～0.5 cm。斷面有明顯紋理及光澤度。氣味芳香、略帶苦味。眼觀3、6、10、11、13號樣品有較多雜質。所有樣品粉碎前無蟲蛀、無發霉、無污染。圖2為13批樣品粉碎后,黃棕色和黃白色,雖不同產地有明顯的外觀、色澤差異,但外觀、色澤與2020版《中國藥典》和2020版《中國獸藥典》要求基本一致。

圖1 不同產地13批野菊花樣品粉碎前外觀與性狀

圖2 不同產地13批野菊花樣品粉碎后外觀與性狀

2.2 不同產地野菊花的顯微鑒別

粉碎后的13批野菊花樣品顯微特征如下:花粉粒呈黃色、類球形,直徑20～33 μm(圖3A)。腺毛頭部鞋底形,4～8個細胞,兩面相對排列(圖3B)。T型毛很多,但大部分已斷。臂一長一短,是單細胞。壁稍厚或一側稍厚,密集分布在莖、莖葉表面(圖3C)。分泌道含黃色分泌物,直徑9～34 μm,周圍有一組導管,多見于花柱中部(花柱分叉以下)、藥隔中心和苞片(圖3D)。

2.3 不同產地野菊花薄層鑒別

蒙花苷對照品在紫外光燈(365 nm)下檢視出現一個點(圖4),1～13號野菊花樣品中,3、6、10、13號樣品在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上顯示的熒光斑點顏色較淡,11號樣品無熒光斑點;其中4號樣品在展開時,斑點擴散,樣品3號受影響。

RM:蒙花苷對照品、RCD:野菊花對照藥材、1～13:13批不同產地的野菊花樣品圖4 不同產地野菊花樣品薄層圖譜

2.4 不同產地野菊花的水分測定

經檢測可得(表2),13批不同產地野菊花樣品水分范圍在8.2%～10.7%,平均值為9.7%,其中6號樣品水分最大,12號樣品水分最小;以GB/T 6435《飼料中水分的測定》為標準,13批樣品中6號和10號樣品水分超過10%。

表2 不同產地野菊花的水分檢測 %

2.5 不同產地野菊花的總灰分與酸不溶性灰分檢測

經檢測(表3),13批不同產地野菊花樣品的總灰分范圍6.78%～8.90%,平均值為7.95%,其中1號最小,13號最大;酸不溶性灰分范圍0.27%～1.98%,平均值為0.96%,其中7號最小,11號最大。

表3 野菊花總灰分與酸不溶性灰分檢測結果 %

2.6 不同產地野菊花蒙花苷含量檢測

由圖5可知,蒙花苷對照品的保留時間約為13.3 min,13批樣品中有11批樣品在保留時間上出現蒙花苷的特征性峰(圖6)。

圖5 蒙花苷對照品HPLC圖譜

圖6 13批野菊花樣品HPLC疊圖

由表4可以看出13批樣品蒙花苷含量范圍為0.000%～2.1492%,平均值為0.9424%。13批樣品中有7批樣品蒙花苷含量超過0.80%,3、6、8、10、11、13號樣品的蒙花苷含量未超過0.80%,其中3號、11號樣品未檢測到蒙花苷。

表4 不同產地野菊花樣品中蒙花苷含量檢測 %

3 討論

本試驗對不同產地的13批野菊花樣品進行質量分析,結果顯示,所有樣品的外觀與性狀與《中華人民共和國獸藥典》(2020版)標準基本一致。13批不同產地野菊花大小、顏色存在差異,可能受地域、海拔等多方面因素影響。自然條件下,植物生長發育、器官形成及次生代謝產物積累與生態因子密切相關[9]。野生菊花在海拔18 m～1083 m內皆有分布,但植株形態差異較大[10],產區集中分布在大別山、伏牛山和秦嶺南部山脈的低海拔山區,不同產地及海拔的自然環境的野菊花化學成分含量差異較大[11]。

蒙花苷的薄層鑒別過程中,因《中華人民共和國獸藥典》中使用的展開劑部分成分毒性較大,借鑒和采用《中華人民共和國藥典》中用乙酸丁酯-甲酸-水(2∶1∶1)的上層溶液為展開劑。研究表明,點樣量為1～5 μL時顯色效果較好,斑點清晰可見[12]。而本試驗中,點樣量需增加至21 μL時熒光斑點清晰、易于觀察。因此,蒙花苷的薄層鑒別中點樣量需因樣品不同而調整。

毛佩芝[13]運用烘干法測定144批野菊花水分含量范圍為7.41%～15.9%。本試驗中13批野菊花樣品的水分范圍在8.2%～10.7%,平均值為9.7%,與其檢測結果相一致。此外,有研究報道52批野菊花的總灰分含量范圍為6.38%～8.00%,平均含量為7.23%,酸不溶性灰分含量為0.72%～1.76%,平均含量為1.22%[14]。本試驗中13批不同產地野菊花樣品的總灰分含量范圍6.78%～8.90%,平均值為7.95%;酸不溶性灰分含量范圍0.27%～1.98%,平均值為0.96%,與文獻報道略有差異,可能是由于樣品批次較少,樣品產地不同及樣品品種差異等。

李浩文等[15]采用流動相為0.05%磷酸溶液-乙腈,波長為334 nm,測得不同批次野菊花中蒙花苷含量范圍為0.417%～1.507%。武秀麗等[16]采用流動相為乙腈-0. 02% 磷酸溶液,檢測波長為326 nm,檢測到39批次野生野菊花中蒙花苷的含量為0～15.40 mg/g。許雷等[17]以甲醇-水-冰醋酸(26:23:1)為流動相,檢測波長為334 nm,檢測到50個野菊花樣品中蒙花苷含量在0～3.83%,合格率為56%。本試驗中采用的流動相和檢測波長同2020版《中國獸藥典》,測得13批野菊花樣品中蒙花苷平均含量為0～2.15%,與文獻報道類似。此外,在檢測蒙花苷的過程中,在水相中加入少量的磷酸,可以改善峰形,減少拖尾等問題;若同時升高柱溫、降低體積流量可以使相鄰色譜峰分離更好[18]。

2020版《中國獸藥典》和《中國藥典》中,以蒙花苷為定量定性的標志物。對39批次野生野菊花按照2020版《中國藥典》進行檢測,其中有9份樣品未檢測到蒙花苷[16]。本試驗中也有2批樣品未檢測到蒙花苷,但用HPLC指紋圖譜法對29批野菊花樣品進行檢測,檢測出綠原酸、咖啡酸和蒙花苷等7個化合物[19]。這提示,僅以蒙花苷含量來判定野菊花質量不夠全面。運用灰色關聯度分析和Pearson相關分析,發現蒙花苷含量受年均氣溫、年均降水量、緯度與海拔等影響[20]。因此,建立合理、有效的質量標準是評價野菊花作為天然植物飼料原料的重要前提之一。