老年子宮內膜癌患者HER2、P53及DNA錯配修復蛋白表達特點和臨床意義

李會敏 井水 李媛媛 吳玲玲

(宿州市立醫院婦科,安徽 宿州 234000)

子宮內膜癌的發病率僅次于宮頸癌和卵巢癌,多發于圍絕經期和絕經后的中老年女性〔1〕。相關研究顯示,高齡是子宮內膜癌患者預后的獨立影響因素,老年患者的復發率和死亡率明顯高于中年患者〔2〕。隨著治療技術的進步,子宮內膜癌的治愈率和生存時間明顯提升,但仍存在一定的轉移和復發風險,是患者死亡的主要原因〔3〕。準確預測子宮內膜癌患者的生存情況對治療方案的個體化制定具有重要意義。人表皮生長因子受體(HER)2的研究多集中在乳腺癌,其過表達不但促進乳腺癌的發生與發展,而且是靶向治療的一個重要靶點〔4〕,但其在子宮內膜癌中作用的研究十分少見。抑癌基因P53能夠編碼一種分子量為43.7 kD的蛋白質,低表達會失去對細胞增殖的控制,導致細胞癌變〔5〕。DNA錯配修復蛋白包括MSH2、MLH1、PMS2,能夠糾正堿基錯配,修復DNA復制過程中的堿基對錯誤,維持基因組穩定性〔6〕。本研究探討預后較差的老年子宮內膜癌患者HER2、P53及DNA錯配修復蛋白的表達特點和臨床意義。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2019年1月至2020年6月安徽省宿州市立醫院收治的老年子宮內膜癌患者50例。年齡60～78歲,平均年齡(69.15±6.39)歲。國際婦產科聯盟(FIGO)分期:Ⅰ期20例,Ⅱ期15例,Ⅲ期13例,Ⅳ期2例;分化程度:高分化18例,中分化24例,低分化8例;肌層浸潤:無9例,<1/2肌層23例,≥1/2肌層18例;淋巴結轉移15例。收集同期行刮宮術的22例子宮內膜癌患者正常增生期子宮內膜標本。年齡60～75歲,平均(68.41±5.80)歲。兩組年齡差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究符合本院倫理委員會相關要求,患者均簽署知情同意書。

1.2納入及排除標準 納入標準:①年齡≥60歲,符合2015年FIGO子宮內膜癌診治指南〔7〕中的診斷標準;②行子宮內膜癌手術治療,并經術后病理檢查確診;③認知功能正常,完成2年隨訪且資料完整。排除標準:①術前有放療、化療、激素類藥物治療史;②凝血功能異常;③合并免疫系統疾病,嚴重感染。

1.3免疫組化法檢測HER2、P53及DNA錯配修復蛋白表達 取子宮內膜癌組織標本和正常增生期子宮內膜標本,使用石蠟包埋,5～6 μm連續切片,轉移到預先清洗過的載玻片上,常規脫蠟至水,微波法修復抗原約20 min,靜置到溫度恢復至室溫,使用磷酸緩沖液去除內源性過氧化物酶,加入1∶20倍稀釋的正常兔血清封閉。清除血清后滴加兔抗人HER2單克隆抗體(1∶500倍稀釋),兔抗人P53單克隆抗體(1∶300倍稀釋),鼠抗人MSH2單克隆抗體(1∶1 000倍稀釋),鼠抗人MLH1單克隆抗體(1∶500倍稀釋),鼠抗人PMS2單克隆抗體(1∶1 000倍稀釋),放入4 ℃冰箱中過夜,次日取出后室溫下復溫約15 min,滴加山羊抗兔IgG、山羊抗鼠IgG,均為1∶2 000倍稀釋,放入37 ℃保溫箱中40 min,滴加二氨基聯苯胺(DAB)顯色液后顯微鏡下觀察顯色情況,蘇木素復染后封片。

1.4結果判斷 將切片放于顯微鏡下,隨機選擇4個視野觀察,計數100個子宮內膜癌細胞。根據染色強度和陽性細胞比例進行判斷。其中無染色0分、淺黃色1分、黃色或棕黃色2分、深棕黃色3分;陽性細胞比例<25%為1分、25%～49%為2分、50%～74%為3分、75%～100%為4分。二者乘積0～4分為陰性,5～12分為陽性。

1.5資料收集與隨訪 收集患者年齡、FIGO分期、分化程度、肌層浸潤、淋巴結轉移。術后對老年子宮內膜癌患者進行2年的隨訪,采用電話、門診復查、家訪相結合的方式進行,記錄生存情況。

1.6統計學分析 采用SPSS25.0軟件進行LSD-t檢驗、χ2檢驗、Kaplan-Meier曲線分析及受試者工作特征(ROC)曲線分析。

2 結 果

2.1不同組織中HER2、P53及DNA錯配修復蛋白表達 HER2、MSH2、MLH1、PMS2蛋白陽性表達于子宮內膜癌組織中的腫瘤細胞膜和細胞質中,呈散在、彌漫性兩種分布形式;P53陽性表達于細胞核。子宮內膜癌組織中HER2陽性表達率明顯高于子宮內膜正常組織,P53、MSH2、MLH1、PMS2陽性表達率明顯低于子宮內膜正常組織(P<0.01)。見圖1、表1。

表1 不同組織中HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2蛋白陽性表達比較〔n(%)〕

圖1 免疫組化檢測不同組織中HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2蛋白表達(×200)

2.2不同臨床病理特征子宮內膜癌HER2、P53陽性表達 HER2、P53陽性表達率在不同FIGO分期、分化程度、肌層浸潤、淋巴結轉移的子宮內膜癌患者間比較,差異均有統計學意義(P<0.05);其中隨著FIGO分期、肌層浸潤程度的增加,分化程度降低,HER2陽性表達率逐漸升高,P53陽性表達率逐漸降低;有淋巴結轉移患者HER2陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移的患者,P53陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移的患者(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征子宮內膜癌HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2陽性表達率比較〔n(%)〕

2.3不同臨床病理特征子宮內膜癌MSH2、MLH1、PMS2陽性表達 MSH2、MLH1、PMS2陽性表達率在不同FIGO分期、分化程度、肌層浸潤、淋巴結轉移的子宮內膜癌患者間比較,差異均有統計學意義(P<0.05);其中隨著FIGO分期、肌層浸潤程度的增加、分化程度的降低,MSH2、MLH1、PMS2陽性表達率逐漸降低;有淋巴結轉移患者MSH2、MLH1、PMS2陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移的患者(P<0.05)。見表2。

2.4不同HER2、P53及DNA錯配修復蛋白表達老年子宮內膜癌患者生存分析 Kaplan-Meier生存曲線分析顯示,HER2陽性表達的老年子宮內膜癌患者生存率明顯低于HER2陰性表達患者(Log-rankχ2=16.528,P=0.000)。P53、MSH2、MLH1、PMS2陰性表達的老年子宮內膜癌患者生存率明顯低于P53、MSH2、MLH1、PMS2陽性表達者(Log-rankχ2值分別為19.708、21.094、15.831、24.655,均P=0.000)。見圖2。

圖2 不同HER2、P53及DNA錯配修復蛋白表達的子宮內膜癌患者Kaplan-Meier生存曲線

2.5HER2、P53及DNA錯配修復蛋白對老年子宮內膜癌患者生存的預測價值 ROC曲線顯示,HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2單獨和聯合檢測對老年子宮內膜癌患者生存情況均具有較高的預測價值(P<0.05);其中HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2聯合檢測的預測價值最高,特異度和陽性預測值明顯高于各指標單獨檢測(P<0.05)。見圖3、表3。

表3 HER2、P53及DNA錯配修復蛋白對老年子宮內膜癌患者生存的預測價值

圖3 HER2、P53及DNA錯配修復蛋白對老年子宮內膜癌患者生存預測的ROC曲線

3 討 論

目前子宮內膜癌的病因仍未明確,無法做到準確預防,對其治療預后的評估也較為困難。探尋能夠預測和評估子宮內膜癌患者病情的分子標志物對改善預后、延長生存時間具有重要意義。HER2是一種原癌基因,能夠調節細胞生長、增殖及分化〔8〕。正常生理狀態下 HER2表達于人體胚胎發育期,與人體中多個組織器官的生長發育密切相關〔9〕。成年人體內正常組織器官中,HER2呈單拷貝形式存在,表達水平較低〔10〕。相關研究顯示,HER2基因癌變的機制較為復雜,先通過蛋白過表達和基因擴增激活酪氨酸激酶,增強蛋白酪氨酸激酶參與調控的信號通路,通過經典信號通路磷脂酰激酶-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)激活核轉錄因子(NF)-κB信號,刺激細胞無限制的生長和增殖,誘發正常細胞癌變〔11〕。P53基因是人體的抑癌基因,分為野生型和突變型,野生型能夠抑制細胞癌變,促進腫瘤細胞凋亡,修復有缺陷的細胞基因;突變型則會促進細胞發生癌變〔12〕。研究發現,P53基因主要通過干擾細胞周期G/S轉化,抑制細胞增殖,激活凋亡相關DNA表達,誘導細胞凋亡;當P53基因發生突變后,其抑癌作用消失,促使細胞惡性病變〔13〕。

相關研究顯示,乳腺癌、卵巢癌等多種實體瘤中HER2基因呈過表達,P53基因呈低表達,其中卵巢癌中HER2基因的過表達率分別為25%、30%,P53基因的低表達率分別為28%、42%〔14〕。結合本研究結果,子宮內膜癌患者中HER2高表達、P53低表達,且與病理指標密切相關,可反映患者的病情嚴重程度。研究發現,攜帶DNA錯配修復基因突變的女性患子宮內膜癌的風險約為70%,普通人群中僅為3%〔15〕。DNA錯配修復蛋白以配對組成異物二聚體發揮作用,可通過修復DNA復制過程中產生的錯誤堿基對,維持基因組的完整性和穩定性,避免突變和惡性腫瘤的發生〔16〕。國外研究報道顯示,子宮內膜癌患者中MSH2基因突變率為52%～65%,MLH1基因突變率為37%～48%,PMS2基因突變率為20%～40%〔17〕;目前國內相關研究報道仍十分少見。

本研究提示,MSH2、MLH1、PMS2在子宮內膜癌患者中表達缺失,且與患者病理改變嚴重程度密切相關。Kaplan-Meier生存曲線提示,臨床中可將HER2、P53、MSH2、MLH1、PMS2聯合檢測,不僅能夠準確評估患者的病情嚴重程度,還能夠預測患者生存情況,指導個體化治療方案的制定。