PAI-1、VEGF 及其受體flk-1 與IgAN 患者腎小管間質損害程度相關性分析

張儷緣

（南昌大學第一附屬醫院高新醫院檢驗科，江西 南昌330000 ）

IgA 腎?。↖gAN）是最為常見的一種原發性腎小球疾病，以腎小球系膜區以IgA 或IgA 沉積為特點[1]。腎小管間質損害（Tubulointerstitial lesions，TIL）為間質性腎炎，研究表明，TIL 程度已成為決定腎臟疾病的預后的重要指標[2]。早期判斷TIL 程度尤為重要，可以避免不必要的或過度的治療。近年來國內分子診斷技術飛速發展，纖溶酶原激活物抑制物-1（Plasminogen activator Inhibitor-1，PAI-1）是組織型纖溶酶原激活物和尿激酶型纖溶酶原激活物的主要抑制劑，可抑制組織和血漿纖維蛋白溶解[3]。血管內皮細胞生長因子（Vascular endothelium growth factor，VEGF）是一種對血管生長有強誘導作用并且能促進內皮細胞的增生、遷移的生長因子[4]。本研究就PAI-1、VEGF 及其受體VEGF-R2（flk-1）與IgAN 患者TIL 程度相關性進行分析，旨在為臨床診治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年8 月至2021 年9 月我院收治的IgAN 患者86 例，作為IgAN 組。其中男48 例，女38 例，年齡為38～64 歲，平均年齡（51.28±5.67）歲；根據Katafuchi 半定量積分[5]評估TIL 損傷程度，輕度損傷者31 例，中度損傷者25例，重度損傷者30 例。納入標準：滿足IgAN 診斷標準[6]；入組前未接受規范性治療；臨床資料完整無缺失。排除標準：伴有缺血性腎損傷；合并急性或慢性感染者；合并糖尿病、冠心病或（和）惡性腫瘤疾病者；繼發性IgAN 者。

同時以同期于我院疑似腎臟惡性腫瘤而進行病理活檢且結果正常的85 例對象作為對照組，男46 例，女39 例，年齡為36～63 歲，平均年齡（52.87±5.43）歲。IgAN 組與健康對照組性別、年齡比較無差異，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法 采用免疫組化染色法檢測兩組VEGF及其受體flk-1 的表達情況。詳細步驟為：取腎活檢組織制成的石蠟，按2 μm 切片、脫蠟。蒸餾水沖洗，PBS 浸泡5 分鐘。5%～10%正常山羊血清封閉，孵育。傾去血清后滴加稀釋的兔抗人VEGF 多抗（購自北京義翹神州科技股份有限公司）、鼠抗人flk-1 單抗（購自杭州聯科生物技術股份有限公司），37 ℃孵育1 h 或4 ℃過夜。PBS 沖洗，加稀釋的生物素標記二抗，37 ℃孵育30 mim；或滴加第二代生物素標記二抗工作液，37℃或室溫孵育30分鐘。PBS 沖洗，滴加適當比例稀釋的辣根酶標記鏈霉卵白素，37 ℃孵育30 min。PBS 沖洗，顯色劑顯色，沖洗、復染、封片。于400 倍視野下每例隨機選取10 個腎小球，分別計算VEGF、flk-1 陽性面積占腎小球面積的百分比，取其均值為最終表達量。

PAI-1：抽取所有研究對象肘靜脈血5 mL，離心提取血漿，采用酶聯免疫吸附測定法（ELISA）測定，人ELISA PAI-1 試劑盒購自北京義翹神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)，按照試劑盒說明書進行操作。

1.3 統計學方法 本研究數據均采用SPSS 18.0 軟件進行統計分析，計量資料采用（）描述，兩組間比較行t 檢驗，多組間比較行F 檢驗；相關性采用Pearson 相關性分析；P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同組別PAI-1、VEGF 及flk-1 表達的對比IgAN 患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達均高于對照組，比較有統計學意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同組別PAI-1、VEGF 及flk-1 表達的對比

2.2 不同TIL 損傷患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達的比較 在IgAN 患者中，以重度TIL 損傷組PAI-1、VEGF 及flk-1 最高，輕度TIL 損傷組PAI-1、VEGF 及flk-1 最低，各組間PAI-1、VEGF 及flk-1表達比較有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同TIL 損傷患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達對比

2.3 PAI-1、VEGF 及flk-1 與腎小管間質損害程度的相關性分析 PAI-1、VEGF 及flk-1 均與腎小管間質損害程度呈正相關性（P＜0.05），見表3、圖1-3。

圖1 PAI-1 與腎小管間質損害程度的相關性分析散點圖

圖2 VEGF 與腎小管間質損害程度的相關性分析散點圖

圖3 flk-1 與腎小管間質損害程度的相關性分析散點圖

表3 PAI-1、VEGF 及flk-1 與腎小管間質損害程度的相關性分析

3 討論

IgAN 常伴無癥狀性血尿及不同程度蛋白尿，隨著病情的發展最終可誘發終末期腎?。‥ndstage renal disease，ESRD）[7]。腎小管間質病變程度與IgAN 患者腎功能密切相關，是影響預后的病理組織學改變的因素之一。因此，準確判斷腎小管間質損傷程度有利于了解臨床診治療效及預測疾病發展。

PAI-1 即內皮細胞型纖溶酶原激活物抑制因子，屬于絲氨酸蛋白酶抑制物。腎小管間質損害與細胞外基質降解受到抑制有關，而在這一過程中，PAI-1 則其重要作用[8]。馬燕等[9]研究發現，血清PAI-1 水平在原發性IgA 腎病患者中隨病情程度加劇持續增高，血清PAI-1 水平有利于評估原發性IgA 腎病病情程度。本研究結果顯示，IgAN 患者PAI-1 表達高于對照組，隨著腎小管間質損害程度的加重，PAI-1 水平明顯升高。其原因是PAI-1 在高水平狀態下不僅可導致腎內腎小球血管硬化，同時還可促進腎小管間質纖維化，加速病變發展[10]。

VEGF 是一種選擇性的內皮有絲分裂原，其受體則屬于絡氨酸激酶c-fms 中的一種。本研究結果顯示，VEGF 及flk-1 均與腎小管間質損害程度呈正相關性，表明VEGF 及其受體參與IgAN 患者腎小管間質損害的進展。進一步分析其原因，VEGF對腎小球功能的影響基于刺激新生血管生成、刺激內皮細胞增殖與轉移以及免疫抑制作用等生物學功能[11]。此外，安麗麗等[12]研究指出，VEGF 與受體flk-1 結合后可促使下游炎性介質聚集，誘發炎性反應綜合征；而炎癥反應的爆發繼而可破壞腎小管上皮細胞完整性，刺激系膜細胞增生，改變細胞外基質?；谏鲜鲅芯?，我們認為PAI-1、VEGF及其受體flk-1 在IgAN 腎損傷發生發展中扮演重要角色，臨床可單獨或聯合檢測三者水平變化，及時評估臨床診治的進展。

綜上所述，PAI-1、VEGF 及其受體flk-1 與IgAN 患者腎小管間質損害程度顯著相關，監測各指標水平有利于判斷腎小管病理損害程度。