基于低壓靜電場技術(LVEF)對半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)的保鮮效果及微生物菌落影響分析*

楊莎莎 謝 超 林 琳 鄭 煒 朱亞猛 張海玲

基于低壓靜電場技術(LVEF)對半滑舌鰨()的保鮮效果及微生物菌落影響分析*

楊莎莎1謝 超1①林 琳1鄭 煒1朱亞猛1張海玲2

(1. 浙江省海產品健康危害因素關鍵技術研究重點實驗室 浙江海洋大學食品與藥學學院 浙江舟山 316022; 2. 舟山匯豐冷藏物流發展有限公司 浙江舟山 316002)

為研究低壓靜電場對半滑舌鰨()在貯藏過程中微生物群落特征, 采用高通量測序技術對貯藏至30 d半滑舌鰨的微生物群落堿基信息測序, 產生的堿基序列通過OTU聚類、多樣性分析、相關性分析等手段, 探討影響半滑舌鰨保鮮效果的微生物群落組成和發育信息。研究不同低壓靜電場(2 000、2 500 V/m)對半滑舌鰨貯藏期間微生物群落組成的影響。結果表明: 半滑舌鰨有效序列范圍為76 735～103 583, 平均長度為428.39～429.17 bp, OTU數目在45～218。貯藏期間樣品的微生物多樣性和相對豐度均有所下降。在門水平上共鑒定出四種微生物菌門, 分別為變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidota)和其他。在屬水平上鑒定出11種微生物菌屬, 分別為不動桿菌屬()、嗜冷桿菌屬()、希瓦氏菌屬()、環絲菌屬()、漫游菌屬()、發光桿菌屬()、和肉食桿菌屬()、假單胞菌屬()、無色桿菌屬()和其他。貯藏至30 d時, CK組優勢腐敗菌為環絲菌屬, LVEF-1 (2 000 V/m)和LVEF-2 (2 500 V/m)組樣品中環絲菌屬相對豐度顯著上升, 但是低于CK組, 且嗜冷桿菌屬和希瓦氏菌屬相對豐度仍然占據一定比例。由此推測LVEF能夠抑制半滑舌鰨優勢腐敗菌屬相對豐度的增加。研究結果為低壓靜電場保鮮貯藏半滑舌鰨微生物多樣性變化提供了理論基礎。

半滑舌鰨(); 低壓靜電場; 高通量測序; 微生物多樣性

半滑舌鰨()屬鰈形目(Pleuronectiformes), 舌鰨科(Cynoglossidae), 舌鰨屬(), 生長速度快, 適溫范圍廣, 有“皇帝魚”的美稱。以往研究在對比野生和養殖半滑舌鰨肌肉中營養成分時發現, 半滑舌鰨肌肉中不飽和脂肪酸在其肌肉脂肪酸中的占比分別高達41.25%和40.62% (馬愛軍等, 2006)。研究表明, 不飽和脂肪酸在預防心腦血管疾病(Shiels, 2022)、降血壓血脂(Cui, 2017)、抗衰老及促進兒童大腦發育(Ebrahimi, 2019)等方面具有一定功效。吳云輝等(2016)在研究中發現, 低溫環境下半滑舌鰨無水?；畹某苫盥瘦^高, 溫度越高半滑舌鰨無水保存成活時間越短。李敬等(2016)使用ε-聚賴氨酸、殼聚糖和乳酸鏈球菌素復合保鮮劑延長了半滑舌鰨貯藏時間, 提升了其貯藏期間的品質。

電場保鮮技術分為高壓靜電場技術(HVEF) (Zhao, 2023)和低壓靜電場技術(LVEF)。HVEF電場場強高于2 500 V/m, LVEF電場場強低于2 500 V/m。部分研究理論認為電場保鮮技術可以影響到細胞膜電位效用, 使細胞膜電位發生變化, 進而影響到生物體的生化反應(丹陽等, 2004); 靜電場可以與細胞內水分子產生共振, 改變水分子與酶的結合狀態, 進而影響到酶活性(Tao, 2015); 有研究認為, 在果蔬的貯藏過程中, 高壓電場能夠使空氣產生微量臭氧和負離子, 這些物質作用于果蔬可以抑制果蔬的呼吸(張敏歡等, 2019)。

研究表明, 一般水產品貯藏后期的優勢腐敗菌群僅有少數幾種, 它們參與了水產品劣化的過程, 是水產品品質腐敗的關鍵菌群(Li, 2022; Nian, 2022; Zhuang, 2023)。而諸如實時定量熒光聚合酶鏈式反應以及多重聚合酶鏈式反應等腐敗菌的其他分離培養鑒定方法(史恬恬等, 2022), 在檢測過程中極易受多重因素干擾, 從而得出偏差判定結論。少數優勢腐敗菌如、等僅憑傳統方法難以對其群落結構加以全面分析(章騫等, 2021)。

目前, 高通量測序技術可以對樣品中的微生物菌群分布加以準確反映, 并完成對微生物基因的序列測定, 能夠更加精準和全面鑒定樣品中微生物的單一或全面基因組, 因此在多學科領域均有所應用, 如畜產品腸道生長菌群研究、人類疾病與健康領域(陶飛燕等, 2021)。在食品領域, 高通量測序技術在發酵食品關鍵菌屬鑒定(Yu, 2022)、釀酒工程菌屬鑒定(Hansen, 2023)以及食品冷藏腐敗菌數鑒定(Zhang, 2023)等方面均有成功運用案例。除了關注水產品貯藏期間優勢腐敗菌, 引起食品安全問題的食源性微生物也是我們研究中重點關注的對象(鄭雙芝等, 2023)。本文基于高通量測序技術對貯藏至30 d半滑舌鰨的微生物群落堿基信息測序, 以期深入探討影響半滑舌鰨保鮮效果的微生物群落組成和發育基礎信息。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

半滑舌鰨()購于舟山市國際水產城, 平均體長為30 cm。購買后將其放入帶有冰袋的泡沫箱內, 30 min內運送至實驗室。平均分成三組, 均在–4 °C冰箱中貯藏, 每5 d測定其指標變化。

1.2 實驗試劑

實驗所需主要試劑包括Fast DNA? Spin Kit (美國MP Biomedicals公司), 瓊脂糖(西班牙Biowest公司), MiSeq Reagent Kit v3測序試劑(美國Illumina公司), AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(美國AXYGEN公司)。

1.3 實驗設備

實驗所用主要儀器設備包括測序儀Illumina Miseq (美國Illumina公司), 藍色熒光定量系統(美國Promega公司), 旋渦混合器QL-901 (海門其林貝爾儀器制造有限公司), 酶標儀BioTek ELx800 (美國Biotek公司), PCR儀ABI GeneAmp?9700型(美國ABI公司), 研磨儀TL-48R (上海萬柏生物科技有限公司)。

1.4 實驗處理與方法

1.4.1 樣品處理 選取個體大小相似的半滑舌鰨, 蒸餾水沖洗, 無菌棉擦拭表面水分, 分三組。其中對照(CK)組樣品為無電場組, 低壓靜電場-1 (LVEF-1)組樣品, 在其上方3 cm處放置放電板, 輸出電壓為2 000 V, 頻率100 Hz; 低壓靜電場-2 (LVEF-2)組樣品, 在其上方3 cm處放置放電板, 輸出電壓為2 500 V, 頻率為100 Hz。選取貯藏第0 (新鮮樣品)、15 d和30 d組樣品進行后續分析。

1.4.2 高通量測序分析

微生物提取 參考毛俊龍(2022)方法并略作改動。采取10 g半滑舌鰨肌肉, 混入9倍體積滅菌生理鹽水, 室溫下置于培養搖床(300 r/min)培養1 h, 無菌紗布過濾培養液并用無菌水淋洗樣品, 過濾液離心(1 200 r/min) 10 min, 所獲沉淀進行后續DNA抽提。

DNA抽提 參照試劑盒說明進行, 對基因組DNA進行抽提后, 采用凝膠電泳(1%瓊脂糖)對抽提基因組DNA完整性進行檢測, 確認樣品準確性。

PCR擴增 根據指定測序區域, 對帶有barcode特異引物進行合成后完成PCR擴增(樣品均進行3次重復實驗), 混合同樣本PCR產物并進行凝膠電泳檢測(2%瓊脂糖), 使用AxyPrepDNA凝膠回收試劑盒(AXYGEN公司)切膠回收PCR產物, Tris-HCl洗脫后以2%瓊脂糖電泳對回收PCR產物進行檢測。

熒光定量和Illumina文庫構建與測序 根據電泳初步定量結果, 將各組半滑舌鰨樣品的PCR產物用藍色熒光定量系統(Promega公司)進行檢測定量后根據樣本測序量要求, 進行混合。使用NEXTflexTM Rapid DNA-Seq Kit進行建庫。利用Illumina公司的Miseq PE300平臺進行測序。

生物多樣性分析 測序所得原始數據在Illumina平臺上進行分析。

1.4.3 菌落總數測定 菌落總數測定參考《食品微生物學檢驗—菌落總數的測定》(GB 4789.2-2016)。

1.4.4 感官評價 實驗選擇10名食品專業人員, 經培訓后對產品的色澤、形態、質地、滋味風味進行打分, 滿分為10分, 最終評分以評價人員的平均分為準。表1為感官評分表。

1.4.5 H.E染色觀察分析 選取0、15和30 d樣品進行分析, 樣品選取魚肉樣品中心部位, 切成1 cm×1 cm×0.5 cm小塊, 使用4%多聚甲醛固定液浸泡固定, 室溫下過夜, 蘇木精-伊紅常規染色后, 顯微鏡下觀察肌肉微觀結構。

表1 半滑舌鰨感官評分表

Tab.1 Sensory score of ready-to-eat C. semilaevis

1.5 數據分析

使用Usearch 11統計OTU數目, Qiime 1.9.1分析微生物豐度表, Mothur 1.30.2進行Alpha多樣性分析。

2 結果與分析

2.1 低壓靜電場對半滑舌鰨肌肉菌落總數影響

微生物生長與繁殖是影響半滑舌鰨貯藏期間肌肉品質的重要因素, 貯藏期間各組樣品肌肉中菌落總數變化情況如圖1所示。半滑舌鰨新鮮樣品肌肉中菌落總數為3.62 lg(CFU/g)。隨著貯藏時間的延長, 各組樣品肌肉中菌落總數呈逐漸上升趨勢。貯藏至第30 d時, CK組樣品肌肉中菌落總數上升至6.14 lg(CFU/g),表明此時CK組的半滑舌鰨已經腐敗變質, 失去其經濟價值。LVEF-1和LVEF-2組樣品肌肉中菌落總數分別為5.68和5.36 lg(CFU/g), 顯著低于CK組(<0.05), 表明LVEF對于微生物生長具有一定的抑制作用。貯藏前15 d時可以觀察到, 各組樣品肌肉中菌落總數上升速率較緩慢, 貯藏15 d后其菌落總數上升速率較快, 可能是因為貯藏中后期半滑舌鰨肌肉中蛋白質降解, 肌肉組織遭到破壞, 為微生物的生長和繁殖提供了大量營養物質, 致使微生物大量繁殖。此外, 貯藏前20 d時, LVEF-1和LVEF-2組樣品肌肉中菌落總數無顯著性差異, 說明貯藏前期兩種場強對微生物的抑制效果無較大差異。

2.2 低壓靜電場對半滑舌鰨肌肉感官影響

圖2為貯藏期間各組半滑舌鰨肌肉感官評分變化情況。貯藏前期, 各組樣品肌肉色澤、形態、質地和氣味評分較高。隨著貯藏時間延長, 各組樣品肌肉顏色逐漸劣化, 樣品肌肉表面光澤逐漸暗淡, 由于脂質氧化程度加深導致樣品肌肉逐漸發黃, 肌肉逐漸劣化。貯藏前期, 可以觀察到樣品肌肉硬度和彈性較好, 按壓后具有較好回復性, 貯藏末期, 樣品肌肉硬度顯著下降, 肌肉被按壓后無法恢復原狀, 此時樣品肌肉結構松散, 體表附有黏液并散發出水產品腐敗時特有不愉快氣味, 此時樣品整體可接受度較差, 已經失去經濟價值。貯藏至相同時間時, CK組相感官評分顯著低于LVEF-1和LVEF-2組(<0.05), 表明LVEF處理能夠延緩半滑舌鰨肌肉感官評分的下降。

圖1 低壓靜電場對半滑舌鰨肌肉菌落總數影響

圖2 低壓靜電場對半滑舌鰨肌肉感官評分影響

2.3 半滑舌鰨肌肉微觀結構觀察分析

圖3為貯藏期間各組半滑舌鰨H.E染色圖。如圖3所示, 新鮮樣品肌肉結構較為完整, 其肌肉纖維排列緊密, 細胞間隙較小或排列均勻。貯藏至30 d時, CK組樣品肌肉纖維松散, 細胞間隙明顯增大, 說明其樣品肌肉在貯藏后期遭到嚴重破壞, 可能是因為微生物的繁殖和蛋白質的降解所導致, 此外, 貯藏期間細胞中冰晶生成也會導致半滑舌鰨肌肉結構被破壞。與CK組相比, LVEF-1和LVEF-2組樣品肌肉結構維持相對較好。

2.4 測序信息統計

由表2可知, 貯藏0、15和30 d得各組樣品半滑舌鰨有效序列范圍為76 735～103 583, 平均長度為428.39～429.17 bp, OTU數目在45～218之間。在貯藏期間, 樣品得OTU數為68; 貯藏至第15 d時, CK、LVEF-1和LVEF-2組樣品肌肉中OTU數分別上升至135、94和82, 此時LVEF組樣品中的OTU數低于CK組, 說明LVEF對于貯藏期間微生物生長具有抑制作用。貯藏至第30 d時, 各組OTU數均有所下降且CK組OTU數高于其他兩組, 可能是因為貯藏后期, 樣品中的優勢腐菌占據較高豐度所致。

圖3 低壓靜電場對半滑舌鰨肌肉H.E染色圖影響

2.5 微生物Alpha多樣性分析

表3為貯藏期間半滑舌鰨不同樣本微生物Alpha多樣性分析表。如表所示, Shannon指數和Simpson指數表示貯藏期間半滑舌鰨樣品微生物多樣性變化; Ace指數和Chao指數表示貯藏期間半滑舌鰨樣品微生物豐度變化; Coverage指數表示樣品中低豐度OTU覆蓋率從而可以反映測序信息的準確性, 一般來說Coverage指數越高說明數據信息越準確。表3中, 新鮮樣品Shannon指數較高, 說明此時樣品中微生物多樣性較高, 貯藏第30 d時, CK組得Shannon指數僅為低于其他兩個實驗組, 說明此時CK組樣品微生物多樣性較低, 我們可以推測此時樣品由于腐敗變質, 主要微生物為其優勢腐敗菌。根據Ace指數和Chao指數可以了解到, 貯藏末期微生物豐度較高的是CK組。此外與貯藏15 d時樣品相比, 貯藏30 d的各組樣品Ace指數和Chao指數均有所下降, 可能是因為貯藏中期微生物多樣性和豐度均較高, 隨著貯藏時間得延長, 微生物結構發生顯著變化, 優勢腐敗菌逐漸占據菌群優勢, 其他菌種逐漸減少或消失, 從而引起了微生物多樣性和豐度得變化(吳雙慧等, 2023)。

表2 各組樣品有效序列與OTU數統計

Tab.2 Observed valid sequence and OTU numbers in different groups

表3 貯藏期間半滑舌鰨不同樣本微生物Alpha多樣性分析

Tab.3 Alpha diversity analysis of different samples of C. semilaevis during storage

2.6 微生物Shannon曲線和Rank-Abundance曲線分析

為了更直觀分析各組樣品貯藏期間微生物多樣性和豐度變化, 繪制了樣品微生物Shannon曲線和Rank-Abundance曲線。如圖4所示, 貯藏期間各組樣本Reads數量>10 000時, 樣本曲線接近于0, 說明了測序信息已覆蓋所有樣本微生物, 其結果較為真實準確(蔣慧麗等, 2021), 新鮮和貯藏15 d的LVEF樣品Shannon曲線較高, 貯藏第30 d的CK和LVEF Shannon曲線較高。結果較直觀地反映出了各組微生物多樣性變化。如圖5所示, Rank-Abundance曲線的橫坐標是OTU等級, 縱坐標是OTU中序列數的相對百分含量, 它可用來解釋多樣性的兩個方面, 即樣品中微生物豐度和微生物分布均勻度。在水平方向上, 曲線越寬表明微生物豐度越高, 反之說明微生物豐度越低, 此外曲線斜率越大說明微生物多樣性越高。如圖5所示, CK和貯藏第15 d的LVEF-1樣本豐度較高; 貯藏30 d時, CK和LVEF-1樣本斜率值較高, 水平曲線較小, 說明其多樣性和相對豐度較低。

2.7 貯藏期間半滑舌鰨門水平菌群結構分析

對各組半滑舌鰨肌肉微生物進行門水平注釋, 選取在門水平豐度>0.01的微生物菌門進行分析, 微生物豐度<0.01的微生物菌門歸屬為其他, 其結果如圖6所示。貯藏期間各組樣品微生物菌門共注釋到四種, 分別為變形菌門(Proteobacteria)、厚壁菌門(Firmicutes)、擬桿菌門(Bacteroidota)和其他。其中, 新鮮樣品肌肉中各微生物均門豐度分別為變形菌門83.74%、厚壁菌門13.28%、擬桿菌門2.44%和其他0.53%。貯藏第15 d時, 各組樣品中微生物在門水平豐度發生變化, 此時, CK組變形菌門相對豐度下降至45.51%, 厚壁菌門相對豐度上升至54.15%, 擬桿菌門未檢測出; LVEF-1組樣品變形菌門和擬桿菌門相對豐度分別下降至79.52%和2.44%, 厚壁菌門相對豐度上升至19.75%; LVEF-2組樣品變形菌門和擬桿菌門分別下降至79.52%和1.29%, 厚壁菌門相對豐度上升至26.61%, 由結果可知, 貯藏第15 d時各組樣品微生物在門水平豐度均有所變化, 可能是因為隨著貯藏時間的延長, 優勢腐敗菌相對豐度逐漸增大, 抑制了其他菌門的相對豐度。至貯藏第30 d時可以看出, 各組樣品微生物菌門結構發生較大改變, 其厚壁菌門相對豐度顯著增高, 變形菌門相對豐度顯著較少, 此時CK、LVEF-1和LVEF-2組樣品厚壁菌門相對豐度分別為92.07%、82.21%和60.23%, 變形菌門分別為7.72%、17.33%和38.96%。由結果可知, 貯藏30 d時, 半滑舌鰨優勢腐敗菌多為厚壁菌門, LVEF-2組樣品中變形菌門相對豐度高于其余兩組, 結合前文菌落總數分析說明其品質保鮮效果較好, 優勢腐敗菌的生長和繁殖尚未達到最高峰值。

圖4 貯藏期間半滑舌鰨微生物Shannon曲線

圖5 貯藏期間半滑舌鰨微生物Rank-Abundance曲線

圖6 貯藏期間半滑舌鰨微生物菌落組成(門水平)

2.8 貯藏期間半滑舌鰨門屬平菌群結構分析

對各組半滑舌鰨肌肉微生物進行屬水平注釋, 其結果如圖7所示。貯藏第0 d時, 新鮮樣品中的微生物多樣性較高, 共鑒定出9種微生物菌屬, 分別為不動桿菌屬() 49.25%、嗜冷桿菌屬() 19.81%、希瓦氏菌屬() 8.90%、環絲菌屬() 7.27%、漫游菌屬() 4.42%、發光桿菌屬() 2.34%、2.25%、肉食桿菌屬() 0.49%和其他。貯藏第15 d時, 各組樣品中微生物菌屬結構發生變化, 其中CK組樣品中環絲菌屬和嗜冷桿菌屬相對豐度分別上升至52.46%和28.22%, 不動桿菌屬下降至12.07%; LVEF-1組樣品中環絲菌屬和嗜冷桿菌屬相對豐度分別上升至18.86%和54.52%, 不動桿菌屬下降至12.07%; LVEF-2組樣品中環絲菌屬和嗜冷桿菌屬相對豐度分別上升至19.94%和46.94%, 不動桿菌屬下降至11.43%, 此外希瓦氏菌屬相對豐度有較低程度上升為10.99%; 貯藏至第30 d時, 可以觀察到CK組樣品環絲菌屬相對豐度最高為90.45%, 另外檢測到嗜冷桿菌屬和希瓦氏菌屬占有較低豐度, 從而可以推測貯藏末期, 半滑舌鰨肌肉中的優勢腐敗菌為環絲菌屬, LVEF-1和LVEF-2組樣品中環絲菌屬相對豐度同樣顯著上升但是低于CK組, 且嗜冷桿菌屬和希瓦氏菌屬相對豐度仍然占據一定比例。這說明LVEF抑制了貯藏期間半滑舌鰨優勢腐敗菌(環絲菌屬)的生長。水產品中微生物生長受溫度、濕度和營養物質等因素影響較大, 如嗜冷桿菌屬具有較好耐寒性, 在整體貯藏期間呈先上升后下降趨勢。有研究發現不動桿菌屬是水產品貯藏過程中影響其腐敗程度的一種菌屬(Wang, 2023), 然而在本研究中貯藏后期, 不動桿菌屬消失, 環絲菌屬顯著上升, 說明貯藏后期引起半滑舌鰨肌肉腐敗的主要菌屬為環絲菌屬。

圖7 貯藏期間半滑舌鰨微生物菌落組成(屬水平)

2.9 貯藏期間半滑舌鰨門微生物β多樣性分析

主坐標分析(principal component analysis, PCoA)是將樣本數據經過不同距離算法獲得樣本距離矩陣的投影, 在圖形中樣本點的距離等于距離矩陣中的差異數據距離; 也就是對樣本關系進行低維平面的投影, 可以用于研究樣本間的相關程度, 其中兩樣本之間距離越近表明樣本間的相似度越高, 反之則越低(Ding, 2022)。如圖8所示, 橫坐標PC1的貢獻率為73.25%, 縱坐標PC2的貢獻率為18.51%, 兩個坐標合計貢獻率為91.76%, 表明此PCoA圖可以反映出樣本微生物組成情況。其中, 新鮮組樣品距離其他各組較遠, 表明其樣品中的微生物組成與其他組別具有較大差異, 貯藏第15 d時兩個LVEF組樣品微生物組成相似度較高, 說明LVEF對半滑舌鰨樣品貯藏中期時的微生物具有一定影響。整體來看, 各組樣本之間存在較大距離, 說明了貯藏期間各組樣品微生物菌群均發生較大變化。

圖8 不同貯藏半滑舌鰨樣本間主坐標分析(PCoA)

3 結論

通過高通量測序技術對新鮮樣本及貯藏第15 d和30 d的CK、LVEF-1和LVEF-2組樣本微生物多樣性和相對豐度進行分析。結果顯示, 各組樣品半滑舌鰨有效序列范圍為76 735～103 583, 平均長度為428.39～429.17 bp, OTU數目在45～218之間。貯藏期間各組樣本的微生物多樣性和相對豐度均有所下降。在門水平上, 各組樣品共鑒定出四種微生物菌門, 分別為變形菌門、厚壁菌門、擬桿菌門和其他。其中, 新鮮樣品和貯藏15 d的各組樣品中變形菌門相對豐度較高, 貯藏第30 d時, 各組樣品中厚壁菌門相對豐度較高, 其中CK組厚壁菌門相對豐度達到92.07%, 說明貯藏末期半滑舌鰨優勢腐敗菌門為厚壁菌門。在屬水平上, 共鑒定出11中微生物菌屬, 分別為不動桿菌屬、嗜冷桿菌屬、希瓦氏菌屬、環絲菌屬、漫游菌屬、發光桿菌屬、、肉食桿菌屬、假單胞菌屬、無色桿菌屬和其他, 貯藏至30 d時, CK組優勢腐敗菌為環絲菌屬, LVEF-1和LVEF-2組樣品中環絲菌屬相對豐度同樣顯著上升但是低于CK組, 且嗜冷桿菌屬和希瓦氏菌屬相對豐度仍然占具一定比例。由此推測LVEF能夠抑制半滑舌鰨優勢腐敗菌屬相對豐度的增加。研究結果為低壓靜電場保鮮貯藏半滑舌鰨微生物多樣性變化提供了理論基礎。

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ANALYSIS OF EFFECT OF LOW VOLTAGE ELECTROSTATIC FIELD ON THE PRESERVATION AND MICROBIAL COMMUNITY STRUCTURE OF

YANG Sha-Sha1, XIE Chao1, LIN Lin1, ZHENG Wei1, ZHU Ya-Meng1, ZHANG Hai-Ling2

(1. Zhejiang Provincial Key Laboratory of Health Risk Factors for Seafood, College of Food and Medicine, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China; 2. Zhoushan HSBC Cold Storage Logistics Development Co. Ltd., Zhoushan 316002, China)

To investigate the effect of different low voltage electrostatic field (2 000 V/m, 2 500 V/m) on microbial changes ofduring storage. High-throughput sequencing techniques were used to determine and analyze samples offrom 0, 15, and 30 d storage. The results showed that the effective sequences of the samples ranged from 76 735～103 583 bp, with an average length of 428.39～429.17 bp and OTU numbers between 45～218. Microbial diversity and relative abundance decreased during storage for all groups of samples. At the phylum level, four microbial phyla were identified in each sample group, namely Proteobacteria, Firmicutes, Bacteroidota, and Others. 11 microbial genera were identified at the genus level. These were,,,,,,,,,, and Others. At 30 d of storage, the dominant spoilage organisms in the CK group were, while the relative abundance ofin samples from the LVEF-1 (2 000 V/m) and LVEF-2 (2 500 V/m) groups increased significantly but was lower than that of CK. The relative abundance of the CK group increased significantly, but was lower than that of the CK group, and the relative abundance ofandstill accounted for a certain proportion. It is assumed that the LVEF treatment was able to suppress the increase in the relative abundance of the dominant spoilage genera in the. The results provide a theoretical basis for the effects of LVEF on microbial diversity and abundance changes during storage of.

; low voltage electrostatic field (LVEF); high-throughput sequencing; bacterial diversity

* 水產品陸海聯動凍藏冷鏈物流貯運與品質監控關鍵技術及裝備研發項目; “十三五”國家重點研發計劃重點專項, 2019YFD0901604號。楊莎莎, 碩士研究生, E-mail: 2020033759@qq.com

謝 超, 博士, 副教授, E-mail: xc750205@163.com

2023-06-28,

2023-09-30

TS254; Q789

10.11693/hyhz20230600132