牛巴氏桿菌病的實驗室診斷與防控措施有效總結

陳秀娟

牛巴氏桿菌病又稱牛出血性敗血病，是由多殺性巴氏桿菌引起的一種急性、熱性、敗血性傳染病。當前基層地區的很多養殖戶對巴氏桿菌病所造成的危害認知不足，并沒有掌握該種疾病的發生流行特點，疾病診斷不合理，藥物使用不規范，錯過了最佳的防治時機，針對這一現狀就需要不斷加強防治工作經驗的有效總結，明確巴氏桿菌病的防治要點，確保早發現早處理，在短時間內控制病情，避免造成更為嚴重的經濟損失。

一、流行病學

1、病原特征

牛巴氏桿菌在顯微鏡下呈桿狀，大小約為0.5～1.0μm×2～3μm。菌體革蘭氏染色陰性，菌體兩端鈍圓。在普通培養基上，菌落呈灰色、濕潤、邊緣不整。巴氏桿菌具有較強的環境適應性，能夠在多種環境中生存和繁殖。該菌對溫度、濕度、光照等條件具有較強的耐受性。在自然環境中，巴氏桿菌可以在牛的呼吸道、消化道、泌尿生殖道等部位生存。此外，該菌對干燥、低溫、高鹽等惡劣環境的抵抗力較強。該種病原對理化因素具有一定的抵抗力。例如，在60℃加熱30分鐘內，對該菌有殺滅作用；但在60℃加熱1小時以上，可有效滅活。巴氏桿菌對酸堿敏感，pH值4.5～6.5時生長最適宜。此外，該菌對許多抗生素敏感，如青霉素、鏈霉素、慶大霉素等。

2、致病機理

巴氏桿菌首先通過消化道黏膜或皮膚傷口進入牛體內。在消化道黏膜感染中，巴氏桿菌通過粘附和侵入黏膜表面的細胞，進入淋巴和血液系統。在皮膚感染中，巴氏桿菌侵入傷口或毛囊，通過淋巴道或血液傳播到其他部位。巴氏桿菌產生多種毒力因子。毒素由三個組分組成：保護性抗原、致溶素和水腫因子。毒素通過PA與細胞表面的受體結合，形成毒素復合物進入細胞內，LF和EF則發揮其毒性作用。LF破壞細胞信號傳導，導致細胞死亡，EF則增加細胞內環磷酸腺苷水平，引起水腫和組織損傷。巴氏桿菌特別喜歡富含氧氣的環境，它在體內定居于脾臟。一旦巴氏桿菌感染，它會產生大量毒素，破壞脾臟的結構和功能。這導致脾臟腫大、出血和壞死，進而影響免疫功能。另外，巴氏桿菌感染引發免疫反應，包括炎癥反應和免疫細胞的活化。炎癥反應導致局部組織炎癥、水腫和壞死。免疫細胞的活化會釋放多種細胞因子，增強炎癥反應，但也可能導致組織損傷。

3、流行特點

牛巴氏桿菌病的傳染源主要是患病牛和帶菌牛。病牛在發病期間，其分泌物、排泄物、血液等均含有大量病原體，可通過直接或間接接觸傳播給易感牛。帶菌牛在無明顯癥狀的情況下，仍可傳播病原體。病原的傳播途徑主要有直接接觸傳播、飛沫傳播和間接接觸傳播。直接接觸傳播是指病牛與易感牛直接接觸，導致病原體傳播。飛沫傳播是指病牛在咳嗽、打噴嚏、流涕等過程中，將病原體傳播給易感牛。間接接觸傳播是指病原體通過環境、用具、飼料等媒介傳播給易感牛。巴氏桿菌主要侵害牛，尤其是幼牛和抵抗力較低的牛。此外，水牛對該病的易感性較高。人工接種可導致其他動物感染，如貓、狗等。該種疾病一年四季均可發生，但以春、夏、秋三季較為多見。牛巴氏桿菌病的發病原因主要包括易感牛接觸到傳染源，感染病原體。牛只因營養不良、疾病、應激等因素導致免疫力下降，容易感染病原體。如飼養密度過大、衛生條件差、氣候惡劣等，也可能導致牛巴氏桿菌病的流行。

二、臨床癥狀

牛巴氏桿菌病的潛伏期通常為2～5天，但也有短至1天或長達7天的情況。潛伏期內，病?？赡軣o明顯癥狀，但已具有傳染性。牛巴氏桿菌病的發病癥狀可分為敗血型、浮腫型和肺炎型三種類型。敗血型病牛體溫升高至41～42℃，精神萎頓、食欲不振、心跳加快。病程較短，常在24小時內死亡。肺炎型最常見。病牛的脖子、胸部發生浮腫，造成呼吸困難，皮膚發紫，舌頭外翻，流淚，流涎，有痛性干咳，鼻流出無色或帶血泡沫。除呈現上述全身癥狀外，在咽喉、頸部皮下出現迅速擴展的水腫，最初發熱，疼痛，堅硬，之后逐漸變冷，疼痛減輕，患畜呼吸高度困難，皮膚黏膜發紺。有的病牛在發病過程中，還可能出現眼結膜充血、出血，黃疸，水腫等癥狀。

三、病理學變化

敗血型病理組織學變化主要表現為廣泛性的出血。內臟器官如心、肝、脾、肺、腎等出現明顯出血，尤以肺部和淋巴結出血嚴重。肺泡壁變薄，充滿血液，肺間質水腫。心臟擴張，心內膜出血。淋巴結水腫、出血。浮腫型病理組織學變化主要表現為皮下組織和淋巴結水腫。皮下組織水腫，內有大量炎性細胞浸潤。淋巴結水腫，濾泡破裂，細胞浸潤。此外，咽喉和肺部的病理變化與敗血型相似。肺炎型病理組織學變化主要表現為肺部炎癥。肺泡壁增厚，內有炎癥細胞浸潤。肺泡腔內有纖維蛋白血栓形成。支氣管和細支氣管內有大量炎癥細胞和膿性分泌物。胸膜黏連，胸腔內有纖維素性滲出物。

四、實驗室診斷

1、涂片染色

從病牛的病變部位（如肺部、淋巴結、心血等）采集病料。采集時，應盡量確保樣品的純凈，避免雜菌污染。將采集的病料放入無菌容器中，盡快送檢。將病料涂抹在載玻片上，涂抹均勻，厚度適中。隨后，將涂片放入酒精燈火焰中，進行固定。固定后的涂片應避免干燥，以免影響后續染色效果。將固定好的涂片放入革蘭氏染色液中。首先，將涂片放入稀碘液中，浸泡約30秒，然后用無菌水沖洗，以便去除多余的碘液。然后將涂片放入醇溶液中，浸泡約15秒，然后用無菌水沖洗，以固定菌體。涂片放入革蘭氏碘液中，浸泡約30秒，用無菌水沖洗。將涂片放入95%乙醇溶液中，浸泡約10秒，用無菌水沖洗，去除多余的乙醇。將染色后的涂片放入顯微鏡下，觀察細菌的形態和染色特征。多殺性巴氏桿菌為革蘭氏陰性桿菌，形態多為桿狀，兩端鈍圓。在染色鏡檢中，注意觀察菌體形態、排列和染色深度等特點，以判斷細菌的純度和活力。在革蘭氏染色鏡檢中，若觀察到大量呈藍紫色的革蘭氏陰性桿菌，可以初步判斷為牛巴氏桿菌病。為進一步確認，可以進行純培養和生化試驗等檢測。

2、病原分離培養

將從病牛病變部位（如肺部、淋巴結、心血等）采集的病料放入無菌容器中，盡快送檢。在實驗室中，將病料進行梯度稀釋，以便進行后續的接種培養。將稀釋后的病料接種到適宜的培養基上，如血平板培養基、麥康凱平板培養基等。接種時，應盡量確保菌液均勻分布，避免產生接種環。將接種好的培養基放入培養箱中，37℃恒溫培養18～24小時。在培養過程中，注意觀察培養基上菌落的生長情況。培養結束后，觀察菌落形態特征，如顏色、形狀、邊緣、光澤等。多殺性巴氏桿菌在血平板培養基上形成的菌落呈灰色或白色，表面光滑，邊緣整齊。在麥康凱平板培養基上，菌落呈紅色，表面光滑。將具有典型菌落形態的菌落進行純化培養，進一步觀察其生長特性。純化后的菌落應具有相同的形態特征，以保證菌種的純度。對純化培養得到的菌落進行生化試驗，如氧化酶試驗、氣泡試驗、硫化氫試驗等。多殺性巴氏桿菌生化試驗結果為：氧化酶陽性、氣泡陽性、硫化氫陰性。根據菌落形態、生化試驗結果等特征，對分離得到的菌株進行鑒定。多殺性巴氏桿菌的菌落呈灰色或白色，表面光滑，邊緣整齊；生化試驗結果為氧化酶陽性、氣泡陽性、硫化氫陰性。

五、治療措施

牛巴氏桿菌病治療中，磺胺類藥物作為一種抗菌藥物，具有一定的療效。推薦使用磺胺間甲氧嘧啶，使用劑量為70～100mg/體重kg，每天2次，肌肉注射?；蛘呤褂没前粪奏?，使用劑量為50～70mg/體重kg，每天3次，口服?；蛘呤褂没前范籽踵奏?，使用劑量為50～70mg/體重kg，每天2～3次，肌肉注射?；前奉愃幬锶菀滓鸾Y晶尿和腎損害，因此需密切觀察病牛的尿量和腎功能。為預防尿酸鹽沉積，在應用磺胺類藥物進行治療的同時，搭配使用5%的碳酸氫鈉注射液，每頭牛使用200～300mL，每天使用1次，連續使用2～3天。

六、預防措施

1、加強疫苗免疫接種

目前我國使用的牛巴氏桿菌病疫苗主要有牛巴氏桿菌病氫氧化鋁膠疫苗和牛巴氏桿菌病滅活疫苗?？筛鶕數匾卟×餍星闆r和疫苗供應情況選擇合適的疫苗。對于未接種過牛巴氏桿菌病疫苗的牛只，首次免疫應在6～8周齡進行，使用劑量為每頭牛4mL（體重100kg以下）或6mL（體重100kg以上），皮下或肌內注射。在首次免疫的基礎上，每隔6個月進行一次加強免疫，使用劑量與首次免疫相同。對于妊娠后期的母牛，應在產前2～3個月進行一次免疫，以提高母牛的免疫力和減少犢牛感染的風險。在免疫接種過程中要注意疫苗應在有效期內使用，并嚴格按照說明書進行操作。免疫接種前后10天內，避免使用抗生素、抗病毒藥物等可能影響免疫效果的藥物。對于已感染牛巴氏桿菌病的牛只，應在治愈后進行免疫接種，以提高其免疫力。在長途運輸前，應隨時加強免疫1次，以降低運輸過程中的感染風險。在免疫接種后21天，對牛只進行血清學檢測，觀察抗體水平是否達到保護水平。如抗體水平不足，應考慮進行補免。

2、加強引種管理和飼養隔離

①引種檢疫

牛引種檢疫是指對從外地引入的牛只進行疫病檢查和監測，以確保引入的牛只不會傳播疫病，保障養殖業的健康發展。在我國，牛引種檢疫需執行《動物防疫法》、《動物檢疫管理辦法》、《畜禽遺傳資源進出境檢疫管理辦法》。引入牛只的養殖場（戶）應在引進前向所在地縣級動物衛生監督所申報，并提供以下資料：養殖場（戶）資質證明、引進牛只來源地動物衛生監督機構出具的檢疫合格證明、動物疫病檢測報告等?？h級動物衛生監督所收到申報資料后，對申報材料進行審核。審核合格后，發放《動物檢疫合格證明》。檢疫人員對引進的牛只進行現場檢疫，檢查牛只的健康狀況、標識是否符合要求、相關疫病檢測結果等。檢疫合格的牛只，檢疫人員會在《動物檢疫合格證明》上簽字蓋章。對于檢疫不合格的牛只，檢疫人員會依法進行處理，如隔離、撲殺、無害化處理等。同時，對引進牛只的養殖場（戶）進行監管，確保疫病不擴散。檢疫人員應對檢疫過程進行記錄，建立檢疫檔案，包括檢疫申報資料、檢疫記錄、檢疫結果等。

②強優到場隔離觀察

引種牛群到場隔離觀察制度是為了確保引入的牛只健康無病，防止疫病傳播，保障養殖場的安全。選擇距離養殖場主產區較遠、地勢較高、排水良好、交通便利的場地作為隔離場地。隔離場地應具備一定的規模，能夠滿足引入牛只的飼養需求。提前對隔離場地進行消毒處理，確保環境衛生。引種牛群到場后，應進行至少1個月的隔離觀察。在隔離觀察期間，密切監測牛只的健康狀況，包括體溫、食欲、精神狀況、排泄情況等。在隔離觀察期間，對牛只進行疫病檢疫，包括巴氏桿菌病等。如有必要，可進行血清學檢測或PCR檢測，確保牛只健康。根據當地疫病流行情況和牛只健康狀況，制定疫苗接種計劃。在疫苗接種后，觀察牛只的免疫反應，確保疫苗接種安全有效。在隔離期間，確保牛只飼養管理到位。提供充足的飼料和飲水，保持圈舍清潔衛生，防止疫病發生。同時，觀察牛只的采食、排泄等行為，確保其適應新環境。對牛只進行定期消毒，密切監測牛只健康狀況，發現異常情況及時報告并采取相應措施。在隔離觀察期滿后，如牛只健康狀況良好，無疫病癥狀，可進行轉群。在轉群前，對養殖場進行消毒處理。轉群后，繼續觀察牛只健康狀況，確保其適應新環境。在合群前，可進行一次全面疫病檢測，確保合群安全。對隔離觀察期間的牛只信息、檢疫檢測結果、疫苗接種情況等數據進行記錄，建立檔案。以便于日后查詢和管理。

3、加強環境調控

①牛舍環境溫度、濕度調控

牛巴氏桿菌病防控期間，保持牛舍內適宜的溫度和濕度對于牛只的健康和疫病防控至關重要。根據不同年齡和品種的牛只需求，牛舍內的溫度應保持在合理范圍。一般犢牛15～25℃；成牛10～20℃。的濕度應保持在50%～70%之間。過低或過高的濕度都可能對牛只的健康產生不良影響。在冬季或寒冷地區，應采取保溫措施，如搭建保溫棚、使用草墊等。夏季或炎熱地區則需采取散熱措施，如設置遮陽網、安裝風扇等。保持牛舍內良好的通風換氣，有利于降低濕度、排除有毒有害氣體，提高空氣質量?？稍谂Ｉ醿蓚仍O置窗戶或采用機械通風系統。保持牛舍地面清潔、干燥，避免污水積聚?？刹捎盟?、沙子等材料鋪設地面，并每周進行1～2次消毒處理。提供充足的清潔飲水，避免牛只飲用污染的水源。合理搭配飼料，保證牛只營養需求，增強免疫力。每天監測牛舍內的溫度和濕度，根據實際情況進行調整。在氣候變化較大的季節，應特別注意監測和調控牛舍環境。

②嚴格衛生消毒

每天清理牛舍糞便和垃圾，保持舍內衛生；每周對牛舍進行徹底清掃，清理舍內墻壁、地面、料槽等處的雜物；每周清洗飲水器、料槽等設備，確保清潔無污垢。常用消毒藥劑包括了2%的氫氧化鈉、5%的硫酸銅、0.1%的過氧乙酸、碘伏。氫氧化鈉（NaOH）具有廣譜殺菌作用，對細菌、病毒均有較強的殺滅效果。硫酸銅（CuSO4）對細菌、病毒、真菌等有較好的殺滅效果。過氧乙酸高效消毒劑，對細菌、病毒、真菌等均有較好的殺滅效果。碘伏廣譜殺菌劑，對細菌、病毒等有較強的殺滅效果。在消毒處理過程中可以將消毒藥劑溶于水后，均勻噴灑在牛舍的墻壁、地面、料槽等處；或者使用消毒藥劑浸泡的毛巾或拖把，對牛舍內的設備、墻壁等進行擦拭。常規消毒每周進行至少1次全面消毒；疫病防控期間每周進行2～3次全面消毒，發病牛只所在區域每天進行1次消毒。

綜上所述，牛巴氏桿菌病對牛只健康和養殖業造成嚴重危害，病原具有多種傳播渠道，再加上當前的病原耐藥性逐漸增強，很多藥物的防控效果逐漸變差。新時期為更好地推動牛養殖業的高質量發展，就需要將關注重點放置在巴氏桿菌病的針對性診斷與防治方面，持續加強流行病學調查，明確該種疾病的發生流行特點和流行趨勢，總結防治工作經驗，將巴氏桿菌病的發生流行率降低到最小程度。