地瓜子醇提物鎮痛抗炎鎮咳活性及急性毒性研究

趙春梅 楊鷗 周理強 李旺 許國鳳 周銘濤

【摘?要】?目的：觀察地瓜子醇提物的鎮痛、抗炎、鎮咳作用及急性毒性研究。方法：采用小鼠醋酸扭體法、小鼠二甲苯耳廓腫脹試驗、小鼠氨水致咳試驗以及急性毒性試驗。結果：地瓜子醇提物能減少醋酸所致的小鼠扭體反應次數，降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，能減少濃氨水致小鼠咳嗽次數。地瓜子醇提物24 h內小鼠灌胃給藥LD₅₀為0.61 g/kg·bw（相當于生藥8.05 g/kg·bw）。結論：地瓜子醇提物具有明顯的鎮痛、抗炎、鎮咳作用但有毒。

【關鍵詞】?地瓜子醇提物；鎮痛；抗炎；鎮咳；急性毒性

【中圖分類號】R285.5???【文獻標志碼】 A????【文章編號】1007-8517（2024）03-0021-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.03.zgmzmjyyzz202403005

Study on Analgesic Effect，Anti-inflammatory Effect，Antitussive Effect and?Acute Toxicity Test of Alcohol Extract from Semen of Pachyrhizi erosi

ZHAO Chunmei?YANG Ou?ZHOU Liqiang?LI Wang?XU Guofeng?ZHOU Mingtao*

Yunnan Institute of Materia Medica/Innovative R & D Center of Yunnan Baiyao Group /Key Laboratory

of Yunnan Traditional Chinese Medicine and National Drug Innovation Enterprise， Kunming 650111，China

Abstract：Objective To observe the analgesic，anti-inflammatory， antitussive effect， and acute toxicity of alcohol extract from semen of Pachyrhizi erosi.Methods The experiments were conducted by mouse acetic acid writhing method，mouse xylene ear swelling，The antitussive effects of the drugs on mice were observed by the method of ammonia media cough．and acute toxicity test was observed.Results The ethanol extract from semen of Pachyrhizi erosi could decrease the number of writhing reaction induced by acetic acid，decrease the ear swelling of mice induced by xylene and reduce the number of cough in mice induced by ammonia.The LD₅₀was 0.61 g/kg·bw（equivalent to crude drug 8.05 g/kg·bw）.Conclusion The study presents alcoholic extract from Semen of Pachyrhizi erosi has obvious analgesic，anti-inflammatory and antitussive Effect，with high toxicity．

Keywords：Alcohol Extract From Semen of Pachyrhizi Erosi；Analgesic；Anti-inflammatory；Antitussive Effect；Acute Toxicity Test

地瓜子又名地蘿卜子、地瓜米，為豆科植物豆薯Pachyrhizus erosus（L.）Urban 的種子。外形很像普通豆莢，常被誤食而中毒。我國南方均有栽培，滋潤而甜。文獻中常有誤食地瓜子中毒的報道，而對地瓜子化學成分及藥理活性的現代研究報道較少^［1-10］。地瓜子和葉除含有魚藤酮外，還有其他有機化合物成分，如豆薯酮（Erosone）、豆薯素（Pachyerhizid）。其所含豆薯酮、魚藤酮等成分，統稱為類魚藤酮，它們對中樞神經系統，特別是對呼吸中樞有毒害作用。而魚藤酮是神經毒，主要興奮延髓中樞，中毒后能引起呼吸中樞興奮和驚厥。繼而發生呼吸中樞及血管運動中樞麻痹^［1］。文獻^［11］記載地瓜子具有止咳平喘、清火解毒、殺蟲的功效。為了證明其止咳清熱、清火解毒的功效，本文對其進行了鎮痛、抗炎、鎮咳藥理作用及初步安全性的實驗研究。

1?實驗材料

藥物復方甘草片（批號：110334-04）。阿司匹林腸溶片（100 mg/片，批號：BJ10778，Bayer Schering Pharma）。冰醋酸（批號：020112，天津市天達凈化材料精細化工廠）；二甲苯（批號：20090831，廣東省化學試劑工程技術研究開發中心）；氨水（批號：150324，四川西隴化工有限公司）。地瓜子采自建水縣，經云南省藥物研究所資源室鑒定，標本保存于本所資源室。

動物SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由廣東省醫學實驗動物中心提供。許可證號：SCXK（粵）2013-0002。小鼠分性別飼養于空調實驗室內，室溫（25±2）℃，相對濕度40％～70％，喂顆粒標準飼料，自由飲水和攝食。

2?方法

2.1?制備方法?地瓜子醇提取物，由本所天然藥化室提供，70%乙醇提取3次，減壓回收，干燥。黃色粉末，提取率為7.58%。使用時用純水配制。配制地瓜子醇提取物濃度為5 mg/mL及10 mg/mL供藥效試驗使用。藥效試驗給藥劑量以急性毒性試驗結果為依據確定。

2.2?鎮痛試驗^［12］?取小鼠48只，體重18～22 g，雌雄各半，隨機分為4組，每組雌雄各6只，組別及劑量如表1，按照表1劑量灌胃給藥，每日1次，連續3 d，給藥容積為20 mL/kg。末次給藥后45 min，小鼠腹腔注射0.62%冰醋酸0.1 mL/10 g/只，立即記錄15 min內的扭體反應（小鼠出現腹部內凹、軀干與后肢伸張，臀部抬起反應為準）次數，并計算其抑制率。

抑制率=（扭體次數（空白對照均數）－扭體次數（給藥均數））/扭體次數（空白對照均數） ×100%

2.3?抗炎試驗^［12］選用18～22 g小鼠48只，按體重隨機分為4組，每組雌雄各6只，分組及給藥情況見表2。各組均預先每日灌胃給藥1次，連續4 d，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20 mL/kg體重。末次給藥后30 min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂為對照。致炎后1 h脫頸椎處死動物，用直徑6 mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，取耳片稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。

抑制率=（耳腫脹度（空白對照均數）－耳腫脹度（給藥均數））/耳腫脹度（空白對照均數） ×100%

2.4?鎮咳作用研究^［13］選用18～22 g小鼠48只，按體重隨機分為4組：正常對照組、復方甘草片組、地瓜子醇提物低、高劑量組。分組情況見表3，每天灌胃給藥1次，連續給藥5 d，末次灌胃30 min后，將小鼠放入有0.15 mL濃氨水的500 mL的玻璃燒杯內，觀察并記錄開始注入濃氨水后動物在燒杯內第1次咳嗽出現的時間 （潛伏期） 及 2 min 內咳嗽的次數，以此評價藥物的止咳效果。

3?結果

3.1?鎮痛試驗?地瓜子醇提物以0.1 g/kg、0.2 g/kg（相當于生藥1.32 g/kg、2.64 g/kg）的劑量連續灌胃給藥3 d，兩組均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，抑制率分別為：13.32%、47.78%，0.2 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著差異（P＜0.01）。詳見表1。提示地瓜子醇提物具有鎮痛作用。

3.2?抗炎試驗?地瓜子醇提物以0.1 g/kg、0.2 g/kg（相當于生藥1.32 g/kg、2.64 g/kg）的劑量連續灌胃給藥4 d，能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，兩組抑制率分別為：23.11%、34.32%，0.2 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著差異（P＜0.05）。詳見表2。提示地瓜子醇提物具有抗炎作用。

3.3?鎮咳作用?地瓜子醇提物以0.1 g/kg、0.2 g/kg（相當于生藥1.32 g/kg、2.64 g/kg）的劑量灌胃給藥5 d，能減少小鼠咳嗽次數，抑制率分別為34.78%、48.22%，與空白對照組相比較差異顯著（P＜0.05，P＜0.01）。詳見表3。提示地瓜子醇提物具有鎮咳作用。

3.4?小鼠急性毒性實驗^［14］

3.4.1?正式實驗?根據預實驗的結果設地瓜子醇提物4個劑量組。將50只小鼠隨機分為5組，即溶媒對照組和1.13 g/kg·bw、0.84 g/kg·bw、0.63 g/kg·bw、0.47 g/kg·bw地瓜子醇提物劑量組，每組10只，雌雄各5只。禁食不禁水約6 h至6 h18 min后，各劑量組以40 mL/kg·bw給藥容量灌胃給予地瓜子醇提物不同濃度溶液1次，溶媒對照組同法給予純水。按40 mL/kg體重灌胃給予相應供試品1次，觀察其急性毒性反應和死亡情況，以后每天觀察1次，連續14 d；于給藥第3天、第7天、第14天稱量體重；觀察結束處死動物，大體解剖觀察各動物臟器、器官的體積、顏色、質地等有無明顯異常。

3.4.2?試驗結果與分析

3.4.2.1?毒性反應?小鼠灌胃給予供試品地瓜子醇提物后，在4 h內出現毒性反應，主要表現為驚厥、抽搐、俯臥、翻正反射消失、角弓反張、運動失調、尿失禁。存活動物至給藥第3天恢復。死亡動物解剖觀察，多數動物出現肺充血、眼球渾濁現象。給藥組動物的毒性反應見表4。

3.4.2.2?死亡情況?給藥當天連續觀察4 h動物死亡情況，以后每天觀察1次，連續14 d，1.13 g/kg·bw劑量組給藥當日出現動物死亡，給藥當日死亡10只動物，給藥后24 min出現動物死亡，共死亡10只動物；0.84 g/kg·bw劑量組給藥當天死亡7只動物，第2天死亡1只動物，共死亡8只動物；0.63 g/kg·bw地瓜子醇提物劑量組給藥當天死亡4只動物，第2天死亡2只動物，共死亡6只動物；0.47 g/kg·bw劑量組給藥第2天死亡2只動物，共死亡2只動物；動物死亡時間及死亡數顯示出隨劑量的降低而減慢和減少，顯示出劑量-反應關系。

3.4.2.3?體重?試驗期間，于給藥第3天、第7天、第14天對各劑量組存活動物稱重，存活小鼠體重均持續增長。

3.4.2.4?解剖觀察?對14 d結束后脫頸椎處死的動物進行大體解剖觀察，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔，各組織和器官的體積、顏色、質地等，地瓜子醇提物各劑量組、溶媒對照組各小鼠器官均無肉眼所見異常。

3.4.3?評價?在本實驗條件下，對地瓜子醇提物不同劑量進行24 h內小鼠單次灌胃給藥急性毒性試驗，可見動物于4 h內出現毒性反應，主要表現為驚厥、抽搐、俯臥、翻正反射消失、角弓反張、運動失調、尿失禁。存活動物至給藥第3天恢復。中毒癥狀和動物死亡數顯示出劑量-反應關系。死亡動物解剖觀察，多數動物出現肺充血、眼球渾濁現象。試驗結束對存活動物進行大體解剖觀察，各組動物臟器、器官的體積、顏色、質地等均未見明顯異常。用SPSS 16.0統計軟件中的Bliss法計算LD₅₀，地瓜子醇提物24 h內小鼠灌胃給藥LD₅₀為0.61 g/kg·bw（相當于生藥8.05 g/kg·bw），95%可信限為0.52～0.71 g/kg·bw（相當于生藥6.89～9.31 g/kg·bw）。提示毒性作用可能涉及中樞神經、神經肌肉、自主神經及眼毒性。

3?討論

地瓜子是云南民間常用藥。具有止咳平喘，清火解毒，殺蟲的功效。地瓜子藥理作用研究文獻報道幾乎沒有。為了探討和開發地瓜子的藥用價值，對地瓜子進行初步安全性研究及藥理研究。急性毒性實驗顯示，地瓜子醇提物24 h內小鼠灌胃給藥LD₅₀為0.61 g/kg·bw（相當于生藥8.05 g/kg·bw），95%可信限為0.52～0.71 g/kg·bw（相當于生藥6.89～9.31 g/kg·bw）。提示毒性作用可能涉及中樞神經、神經肌肉、自主神經及眼毒性。因地瓜子常被誤食而中毒，該結果也為地瓜子的毒性提供了依據。地瓜子能抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，能減少小鼠咳嗽次數。表明地瓜子具有鎮痛、抗炎、鎮咳作用且有毒。實驗結果為地瓜子將來產品研發和臨床應用提供了科學依據。

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（收稿日期：2023-05-05?編輯：劉?斌）

基金項目：云南省科技廳項目（2012CG003）。

作者簡介：趙春梅（1973—），女，漢族，碩士，高級工程師，研究方向為藥理研究。E-mail：zhaocm427@aliyun.com

通信作者：周銘濤（1982—），男，碩士，實驗師，研究方向為藥理研究。E-mail：369400761@qq.com