70例嚴重少精癥和無精癥患者 Y染色體微缺失檢測

王喜良,郝冬梅,侯開波,張寧,閆素文

(中國人民解放軍第 202醫院全軍計劃生育優生優育技術研究所,遼寧 沈陽 110003)

嚴重少精癥和無精癥是男性不育的主要原因之一[1]。導致嚴重少精癥和無精癥的因素有很多,包括染色體數目和結構異常,微生物感染、藥物影響等。近年發現 Y染色體長臂存在微缺失現象,本文采用多重 PCR技術檢測染色體正常的嚴重少精癥和無精癥患者的 Y染色體微缺失,探討嚴重少精癥和無精癥與 Y染色體微缺失之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 70例嚴重少精癥和無精癥患者均來自本院 2009年1月至 12月不育門診就診患者。年齡 22～39歲,平均 30歲。按 WHO精液常規分析標準確定為嚴重少精癥或無精癥,其中嚴重少精癥 39例,無精癥 31例。對照組 20例為在本院就診,并經至少 1次精液常規分析滿足 WHO(精子密度正常)標準者。

1.2 方法 用血液 DNA提取試劑盒提取 DNA,運用多重 PCR技術檢測 Y染色體 AZF基因家族AZFa、AZFb、AZFc三個區域中的 6個序列標簽位點微缺失。每個樣品做 A組和 B組兩個多重 PCR反應,A組包括 sY 254、sY127、sY86三個位點,B組包括 sY134、sY84、sY255三個位點。每組設置一對擴增 SRY基因 (位于 Y染色體短臂上的性別決定基因)的引物,作為內對照。Y染色體微缺失試劑盒來自于透景生命科技有限公司。按照試劑盒操作說明擴增 DNA,擴增條件為:95℃ 3 min;95℃ 30 s,59℃ 30 s,72℃ 30 s,35個循環,最后 72℃延伸 10m in。產物經瓊脂糖凝膠電泳后,用凝膠成像系統觀察分析條帶。

2 結果

39例嚴重少精癥患者中發現 5例存在 Y染色體微缺失,均為 AZFc缺失,缺失率為 12.82%。31例無精癥患者中發現 6例存在Y染色體微缺失,其中 AZFb+AZFc缺失 2例,AZFb缺失 3例,AZFc缺失 1例,缺失率為 19.35%。70例嚴重少精癥和無精癥患者共檢出 11例 Y染色體微缺失,總缺失率為 15.71%。20例精液正?；颊?Y染色體均未發現微缺失。

3 討論

1976年,Tiepolo和 Zuifaidi首先提出 Y染色體上有多個基因參與生精過程[2],30多年來的研究發現男性特有的 Y染色體上面存在一個關鍵的與生育相關的因子的區域,稱為 AZF區。目前認為在 AZF區上存在三個精子發生亞區 (AZFa、AZFb、AZFc),各亞區包含的位點在男性生殖細胞發育的不同時期起著不同的作用,位點的缺失可致患者表現為少、弱精癥或無精癥從而引發不育。一般認為,Y染色體的近端缺失 (涉及 AZFa和 AZFb),表現以唯支持細胞綜合癥為主的嚴重生精障礙,Y染色體的遠端缺失 (涉及 AZFb遠段和 AZFc),可殘留島狀的生精正常區域[3]。

無精癥和少精癥 AZF總的缺失率不同實驗室報道差別很大 1%～55%[4],可能是選擇的對象不同導致結果不同。本文中選擇的病例是排除了染色體異常的患者后檢測的結果。31例無精癥患者中發現 6例存在 Y染色體微缺失,其中 AZFb+AZFc缺失 2例,AZFb缺失 3例,AZFc缺失 1例,缺失率為 19.35%,而 39例嚴重少精癥患者中發現 5例存在 Y染色體微缺失,均為 AZFc缺失,缺失率為 12.82%?？梢钥闯鰺o精癥患者的微缺失率高于嚴重少精癥,且缺失情況更嚴重。

Y染色體微缺失的檢測具有非常重要的意義,不同的位點缺失其治療方法是不一樣的,檢測的結果將指導臨床醫生決定是否采用供精人工授精或移植前遺產學診斷 (PGD)實施輔助生育。

AZFa,AZFb,AZFb+AZFc,AZFa+b+c這四種類型缺失的患者,一般表現為無精子癥。即使通過睪丸穿刺,獲得精子的機會也幾乎為零,故不建議進行穿刺手術和施行卵胞漿內單精子注射 ICSI。這類患者可以通過人類精子庫供精生育后代。

AZFc區域缺失的少精子癥患者,其精子數目有進行性下降的趨勢,部分患者最后發展為無精,所以應及早進行治療,對暫不需要后代的患者,可將其精液冷凍保存。

20世紀 90年代始,卵胞漿內單精子注射技術的應用使嚴重少精癥甚至無精癥不育男性實現了生育的可能。但無精癥和嚴重少精癥患者存在遺傳缺陷的幾率是很大的,Y染色體微缺失可通過輔助生殖技術傳給男性子代,子代有可能在成年后表現出與父親相同的異常缺陷,應建議患者實施移植前遺傳學診斷 (PGD)來獲得后代。因此嚴重少精癥和無精癥患者在進行輔助生育治療前應常規進行遺傳咨詢,并應把 Y染色體微缺失檢測應作為常規的檢查項目[5]。

開展 Y染色體微缺失檢測,可全面評價男性不育遺傳缺陷,從而更好的解釋發病原因,提供遺傳咨詢和指導臨床診療。

[1]Krausz C,Mc Elreavey K.Y chromosome and male infertility[J].Front Biosci,1999,15(4):1-8.

[2]Tiepolo L,Zuffardi O.Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm[J].Hum Genet,1976,34(2):119-124.

[3]Maurer B,Simoni M.Y chromosome m icrodeletion screening in infertilemen[J].JEndocrinol Invest,2000,23(10):664-670.

[4]Dada R,Gupta NP,Kucheria K.Yq microdeletions-azoospermia factor candidate genes and spermatogenic arrest[J].J Biomol Tech,2004,15(3):176-183.

[5]Liow SL,Yong EL,Ng SC.Prognostic value of Y deletion analysis:How reliable is the outcome of Y deletion analysis in providing a sound prognosis?[J].Hum Reprod,2001,16(1):9-12.