PCNA及 PTEN在子宮內膜異位癥中的表達及意義

余繁榮,胡玉紅,陳鳳云,盧北燕,楊 微

(佳木斯大學附屬第一醫院婦產科,黑龍江 佳木斯 154003)

子宮內膜異位癥(endometriosis,EMS)是婦科常見病和多發病,其發病率有逐漸上升的趨勢,其雖是良性病變,但具有惡性病變的生物學行為。近年來,細胞的增殖與凋亡失衡學說已成為人們研究的熱點。PCN A是一種細胞周期增生核抗原,能客觀的反映細胞的增殖能力,是目前應用比較廣泛的細胞增殖標記之一。PTEN是一種抑癌基因,在細胞增殖周期中,主要參與細胞周期的調控,發揮抑制細胞過度增殖和促進凋亡的作用。本實驗通過檢測 PCN A及 PTEN在EM S組織中的表達,探討 EM S的發病機制及二者在 EM S發展中的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2007— 12～ 2009— 11在佳木斯大學附屬第一醫院行手術治療的 EMS患者的異位內膜48例,EM S患者的在位內膜36例,通過開腹手術取得異位病灶組織及其在位內膜。取正常的子宮內膜組織 30例作為對照內膜?；颊吣挲g 28～ 55歲,平均 (32.8±5.6)歲 ,月經周期規律,無其他內科疾病,術前半年均未使用激素類藥物治療。所有診斷均經術后病理證實,內膜分期依據月經周期的時間結合病理切片確定。

1.2 試劑

鼠抗人 PCNA單克隆抗體、兔抗人 PTEN多克隆抗體、S-P試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 方法

采用免疫組化染色(SP法):標本經10%甲醛固定,石蠟包埋,5μm厚連續切片,實驗步驟嚴格按試劑盒說明書進行。

1.4 結果判定標準

光學顯微鏡下 PCN A和 PTEN的染色陽性信號均為細胞內出現棕黃色或棕褐色顆粒,在10× 40高倍視野下,隨機選10個視野,依陽性細胞數占觀察同類細胞數的百分比分為4級。無陽性細胞為陰性(-),陽性細胞數≤50%為弱陽性(+ ),陽性細胞數＞ 50%為陽性(++ ),陽性細胞數≥75%為強陽性(+++)。

1.5 統計學方法

SPSS13統計軟件分析 ,采用 i2檢驗、Fisher’s精確檢驗及 Spearman等級相關分析,P＜0.05為有統計學意義。

2 結果

2.1 PCN A與 PTEN在異位子宮內膜與正常內膜中的表達

見表 1。PCNA、PTEN主要表達分別定位于子宮內膜細胞的胞核與胞漿中。在子宮內膜異位癥的異位內膜,在位內膜及正常內膜的陽性表達依次減弱,分別為93.8%,63.9%,26.7%,兩兩之間的差異有統計學意義 (P ＜0.05)。PTEN在異位內膜中的陽性表達率明顯降低為10.4%,在正常內膜中的陽性表達率為76.7%,在位內膜中的陽性表達介于兩者之間為47.2%,有統計學意義 (P＜0.05)。

表1 PCNA與 PTEN在異位子宮內膜與對照子宮內膜中的表達

2.2 PCNA與 PTEN子宮內膜中增生期及分泌期的表達

見表2。PCN A在子宮內膜的增生期的表達顯著高于分泌期的表達,而 PTEN在子宮內膜中的表達分泌期高于增生期,兩者在 EMS患者的異位內膜的增生期及分泌期中的表達均無統計學意義 (P＞ 0.05)而在 EM S患者的在位內膜及正常內膜的增生期與分泌期中的表達有統計學意義(P ＜ 0.05)。

表2 PCN A與 PTEN子宮內膜中增生期及分泌期的表達

3 討論

細胞內的增殖和凋亡過程幾乎涉及所有的病理生理過程,二者的失衡可導致細胞異常增殖。EM S的異位內膜的持續存在不僅與其內膜細胞的凋亡能力降低有關,也與異位細胞增殖能力改變有關[1]。PCNA是 DNA復制時所必需的調節蛋白,其表達在 G1期開始增高,S期達到高峰,G2期和 M期明顯下降[2]。PCNA的陽性程度可直接反應出 DNA復制的活躍程度,反映了細胞的增殖情況。本研究發現,EMS在位內膜 PCNA表達百分數明顯高于正常內膜,而異位內膜PCN A表達百分數又高于在位內膜。說明 EM S的發生與細胞增殖活性增強有關。本實驗的結果與 Nakayama等[3]研究一致,顯示:EM S異位內膜中 PCN A陽性細胞數量明顯高于在位內膜。PCN A在 EMS中的異位內膜的增生期和分泌期的陽性表達率分別為96.4%,90.0%,其差異無統計學意義(P＞0.05),在在位內膜的增生期與分泌期的表達差異有統計學意義 (i2= 5.063,P＞ 0.05),PCN A在正常子宮內膜組織中的增生期和分泌期的陽性表達率分別為44.4%,0%,其差別有統計學意義 (P＜0.01),此結果與 Fujishita A等[4]的研究相一致。表明 EM S患者內膜細胞增殖數量增加,這些增殖能力升高的內膜有利于在異位灶種植、生長。研究表明 PTEN通過作用于 PKB信號傳導通路的中心環節,使細胞周期阻斷在 G1期或促使細胞凋亡[5],從而影響細胞的增殖、分化、轉移。本試驗中 PTEN在 EM S異位內膜的陽性表達率低為10.4%,而在正常內膜中的表達較高為76.7%,差異有統計學意義 (P＜0.05),本試驗結果與 Mutter等[6]試驗結果大致相同。PTEN在 EM S的異位內膜的增生期與分泌期的表達無統計學意義 (P＞ 0.05),但在在位內膜及正常內膜中的增生期與分泌期的表達均有統計學意義(P＜0.05,P ＜0.05)。本研究結果同時顯示,PCN A與PTEN之間存在負相關,提示二者之間可能以負反饋調節方式參與 EM S的發生發展。

綜上所述,EM S中的 PCNA的上調,使異位內膜細胞的增殖能力增強 ,而 PTEN在 EM S中的缺失,促凋亡能力減弱從而使細胞增生和凋亡之間的平衡破壞,導致這些細胞的種植、生長,促發 EMS。通過檢測 EM S患者中的 PCNA及PTEN的表達水平,為其診斷、治療及其預后提供一種新的思維方法。

[1]Beliard A,Noel A,Foidart JM.Reduction of apoptosis and proliferation in Endometriosis[J].Fertil Setril,2004,82(l):80-85

[2]Taftachi R,Ayhan A,Ekici S,et al.Proliferating-cell nuclear anti-gen(PCN A)as an independent prog nostic marker in patients after prostatectomy:a comparison of PCNA and Ki67[J].BJU Int,2005,95(4):650-654

[3]LiSF,Nakayama K,Masuazawa H,et al.The number of proliferating cell nuclear Natigen Positive cells in endometriotic lesions differs from that in the Nedometium.Analysis of PCNA positive cells during the menstrual cycle and in post一menopause[J].Virchows Arch A Pathol Anat H istopathol,1993,423(4):257-263

[4]Fujishita A,H asuo A,Khan KN,et al.Immunohistochemical study of angiogenic factorsin endometrium and endometriosis[J].Gynecol Obstet Invest,1999,48:36-44

[5]YamadaKM,Araki M.Tumor suppressor PTEN:modulator of cell signaling,g rowth,Migration and apoptosis[J].J Cell Sci,2001,114(13):2375-2382

[6]M utter GL,Ming CL,Fitzg erald JT,et al.Changes in endometrial PTEN expression throughout the human menstrual cycle[J].Clin Endocrinol Metab,2000,85:2334-2338