33例B細胞慢性淋巴細胞白血病免疫表型分析

夏樂敏,翁香琴

(1.上海市中醫醫院血液科 200071;2.上海瑞金醫院血液學研究所 200025)

33例B細胞慢性淋巴細胞白血病免疫表型分析

夏樂敏1,翁香琴2

(1.上海市中醫醫院血液科 200071;2.上海瑞金醫院血液學研究所 200025)

目的研究B細胞慢性淋巴細胞白血病(B-CLL)免疫表型特點。方法采用流式細胞術分析33例B-CLL的免疫表型。結果大部分 B-CLL 表達 CD20、CD19、CD23、CD5、CD11c,仍有部分表達 FMC7、CD22、CD43、CD38、κ輕鏈、λ輕鏈、ZAP-70。結論免疫表型分析是診斷慢性淋巴白血病(CLL)非常有用的依據。ZAP-70及CD38可以為B-CLL提供重要的預后信息,是兩個較新穎的免疫測定指標。

白血病,淋巴樣;免疫表型分型;流式細胞術

慢性淋巴細胞白血病(CLL)是一種淋巴細胞克隆性惡性增生性疾病,臨床上以外周血及骨髓中成熟的淋巴細胞增多為主要特點。B細胞慢性淋巴細胞白血病(B-CLL)起源于B淋巴細胞惡性轉化和克隆。免疫表型分析對CLL的診斷和鑒別診斷及預后判定有重要意義[1]。本研究通過流式細胞術對CLL常規免疫表型及ZAP-70、CD38的表達進行檢測,從而對B-CLL免疫表型進行深一步的研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年1月至2009年12月上海瑞金醫院已確診為 B-CLL的 33例患者,其中男 27例,女6例,年齡40～83歲,中位62.4歲。所有患者進行外周血常規、外周血涂片、骨髓細胞形態學檢查后進一步進行多參數流式細胞術免疫分型。診斷參照《血液病診斷及療效標準》[2]。

1.2 試劑與儀器 膜單克隆抗體(McAb)包括 CD5、CD10、CD20、CD19、CD22 、CD23、CD25 、CD43 、CD103 、CD11c、FMC7、CD38、κ輕鏈、λ輕鏈,均購自 Immunotech公司;ZAP-70單克隆抗體購自Caltag公司。流式細胞儀為Beckman-Coulter公司的Epics XL型(488 nm激發光源),采用 Expo32-ADC分析軟件。

1.3 常規免疫表型的檢測 取肝素抗凝的新鮮骨髓或外周血(6 h內),調整細胞數至(0.5～1)×106個/毫升,采用四色流式分析方案檢測胞膜抗原。每管取100 μ L樣本加不同組合抗體各20 μ L,同時做同型對照管,混勻,避光 20 min,溶血后上機檢測分析,每管獲取10 000個細胞,抗原表達在淋巴細胞中大于或等于20%為陽性。

1.4 ZAP-70蛋白的檢測 取100 μ L骨髓或外周血標本,加CD5-FITC、CD19-PC5 各 20 μ L,避光 15 min,加 Fix&Perm 試劑盒中A固定液100 μ L,避光 15 min,加磷酸鹽緩沖液(PBS)2 mL,1 000 r/min離心5 min,棄上清液,輕震細胞后,各管加100μ L B破膜劑5 min后加ZAP-70 5μ L,避光15 min,加PBS 2 mL,1 000 r/min離心5 min,棄上清液,1.5 mL PBS重懸,上機檢測至少10 000個細胞,同時做同型對照管。ZAP-70檢測流程利用正常 T淋巴細胞廣泛表達ZAP-70,在CD5和CD19雙參數圖上將提取CD5單陽細胞置于 CD5、ZAP-70雙參數圖上,作為ZAP-70活性的陽性控制,再提取CD5、CD19雙陽性細胞(B-CLL細胞)并分析ZAP-70的表達率,ZAP-70≥20%為陽性[3]。

2 結 果

33例患者全部表達成熟 B細胞相關抗原 CD20、CD19及CD22,陽性率均為100%,CD23的陽性率為97.0%,而FMC7的陽性率僅為27.3%。T系相關抗原CD5陽性率為90.9%,CD43陽性率為78.8%;大部分患者表達髓系抗原CD11c,陽性率為90.9%;早期造血標志CD38的陽性率為51.5%;κ輕鏈、λ輕鏈陽性率分別為78.8%和21.2%;ZAP-70陽性率為36.4%;所有的患者均不表達 CD10及 CD103,陽性率為0%,見表1。

表1 33例B-CLL患者免疫表型分析

表1(續) 33例B-CLL免疫表型分析

3 討 論

CLL在歐美為發病率最高的白血病,占總白血病的30%左右,而在亞洲國家相對少見,根據中國血液病研究所20世紀80年代的調查發現,CLL僅占慢性白血病的6%,近年來隨著檢測手段的進步患病率呈上升趨勢[4]。早期診斷CLL具有重要的臨床意義。近年來流式細胞術已成為診斷血液惡性腫瘤不可缺少的重要檢測手段[5]。

在CLL患者中,淋巴細胞具有特征性的免疫表型[6]。BCLL起源于B淋巴細胞惡性轉化和克隆,其主要的表型特點是CD5陽性的 B細胞,同時伴CD20、CD19、CD23表達,弱表達CD22,不表達CD10,呈κ或λ單克隆輕鏈型[7]。本研究中有30例(90.9%)為CD5陽性,與國外報道的 CD5在 B-CLL的陽性率為90%～95%相符[8];另有3例患者不表達CD5,1例患者不表達CD23,但此4例患者無1例出現CD5和CD23雙陰性,結合細胞形態學、遺傳學及臨床表現進一步診斷為不典型B-CLL。其他一些常規免疫表型主要用來與其他一些淋巴細胞白血病、幼淋巴細胞白血病、毛細胞白血病相鑒別。

近年來多位學者分別報道了IgVH是否發生突變是決定CLL不同預后的重要因素[9-11]。CD38是第1個表達在白血病淋巴細胞上的與IgVH突變相關的指標,是一種相對分子質量為45×103的單鏈Ⅱ型跨膜糖蛋白,其功能為調節細胞活化、增生和黏附[9]。最近有研究顯示CD38的表達在疾病的過程中隨著病情進展會發生相應變化,可以作為B-CLL病情進展的指標[10-12]。ZAP-70是一種相對分子質量為70×103的酪氨酸蛋白激酶,可以參與到 T細胞和 NK細胞信號傳導途徑中[13-14]。ZAP-70在外周血淋巴細胞的表達取決于細胞株在NK細胞、T細胞的表達水平最高,而在正常B細胞表達極低或不表達。有研究證實ZAP-70表達在CLL惡性轉化的B細胞表面,其作用為增強細胞信號傳導從而促進疾病的進展。Chen等[15]研究表明B-CLL腫瘤細胞的B細胞受體(BCR)水平低于正常B細胞,而ZAP-70在脾酪氨酸激酶(Syk)缺乏的B-CLL中可以替代Syk重新構建BCR信號傳導通路,從而高表達ZAP-70。ZAP-70的表達在整個疾病過程中是非常穩定的?？偟膩碚f,ZAP-70表達與IgVH基因突變具有很好的關聯性,與CLL預后相關[16]。本研究中 CD38和 ZAP-70的陽性率分別為51.5%、36.4%,可能對其預后有一定提示意義。

總之,免疫表型分析對于明確細胞起源、劃分分化發育階段及對B-CLL的診斷有重要意義,其中CD38和ZAP-70對患者的預后有一定提示作用,是兩個較新穎的免疫測定指標。

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Analysis the immunophenotyping of 33 chronic B lymphoid leukemia

Xia Lemin1,Weng Xiangqin2
(1.Departmentof Hematology,Shanghai Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200071,China;2.Institute of Hematology,Ruijin Hospital,Shanghai 200071,China)

ObjectiveTo investigate the immunophenotype characteristic of 33 B cell chronic lymphoid leukemia(B-CLL).MethodsFlow cytometry were used to analysis 33 cases of B-CLL.ResultsThe B-CLL typically display composite phenotypes:CD20,CD19,CD22,CD23,CD5,CD11c,but the FMC7,CD43,CD38,κlight strand,λlight strand,ZAP-70 were variable present in some BCLL cases.ConclusionImmunophenotypic analysis is an extremely useful adjunct in the diagnosis of chronic lymphoid leukemia.ZAP-70 and CD38 for B-CLL providing important prognostic information,are two relatively new immunoassay index.

leukemia,lymphoid;immunophenotyping;flow cytometry

10.3969/j.issn.1671-8348.2011.05.018

A

1671-8348(2011)05-0458-02

2010-06-09

2010-10-22)

·論 著·