益心酮抗心肌缺血作用的實驗研究

李洪斌，于 泓，楊世杰

(1.中國人民解放軍第208醫院，吉林 長春130062；2.吉林大學基礎醫學院，吉林 長春 130021)

益心酮抗心肌缺血作用的實驗研究

李洪斌1，于 泓1，楊世杰2

(1.中國人民解放軍第208醫院，吉林 長春130062；2.吉林大學基礎醫學院，吉林 長春 130021)

目的研究益心酮的抗心肌缺血作用。方法采用腹腔注射異丙腎上腺素造成大鼠心肌缺血模型，運用益心酮治療；采用皮下注射大劑量腎上腺素加寒冷刺激的方法復制大鼠急性血瘀模型，以觀察益心酮對血瘀大鼠血黏度的影響；觀察益心酮對大鼠血小板聚集率的影響；采用實驗性急性心肌梗死犬模型，觀察益心酮的抗心肌缺血作用。結果益心酮能夠降低心肌缺血大鼠心電圖中ST段位移，降低AST(天門冬氨酸氨基轉移酶)、CPK(肌酸磷酸激酶)、LDH(乳酸脫氫酶)等心肌酶的升高程度，降低血液黏度；益心酮能夠改善大鼠血瘀模型血液流變學，降低其血黏度；益心酮能夠降低大鼠血小板聚集率；④益心酮能夠降低心肌缺血程度(Σ-ST)，減少心肌缺血范圍(N-ST)，縮小心肌梗死面積(MST)，同時能夠降低血清中AST、CPK和LDH等心肌酶的升高程度。結論益心酮具有抗心肌缺血作用。

益心酮 ； 心肌缺血 ； 血液黏度； 血小板聚集 ； 心肌三酶

益心酮是中藥制劑，其主要成分是山楂總黃酮。臨床驗證能夠改善心肌缺血，目前已用于缺血性心臟病的治療。本實驗通過不同的模型，觀察了益心酮對心肌缺血、血液黏度、血小板聚集率的影響，探討其抗心肌缺血的作用機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 Wistar大鼠，體質量220～280 g，雌雄兼用，由吉林大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK (吉)2003-0001；健康成年雜種犬，體質量12～18 kg ，雌雄兼用，由吉林大學實驗動物中心提供，合格證號SYXK(吉)2002-0002。

1.2實驗藥品與試劑 益心酮原粉(長春三九生物制藥股份有限公司)；復方丹參片(四川升和制藥有限公司，批號081022)；鹽酸異丙腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司，批號080601)；鹽酸腎上腺素注射液(上海禾豐制藥有限公司，批號080801)。

1.3實驗器材 心電圖機6511(上海光電醫用電子儀器有限公司)；LBY-N6B自清洗旋轉式粘度計(北京普利生集團)；LBY-NJ全自動四通道血小板聚集儀(北京普利生集團)；LDZ5-2離心機(北京醫用離心機廠)；GF-D200型半自動生化分析儀(山東高密彩虹分析儀器有限公司)；RM-6000型多道生理記錄儀(日本光電)；SC-3型人工呼吸機(上海)。

1.4實驗方法

1.4.1對大鼠心肌缺血模型的影響[1～3]取Wistar大鼠36只，雌雄各半，體重220～280 g，隨機分為6組，每組6只：空白對照組，模型對照組，陽性對照組(復方丹參片0.84 g/kg)，益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)劑量組。各組每天灌胃給藥一次(空白對照組和模型對照組分別給予生理鹽水10 ml/kg)，連續5 d。除空白對照組外，其余各組均于第5天給藥后1 h記錄正常心電圖，然后腹腔注射異丙腎上腺素4 mg/kg，記錄給藥后30 min的心電圖，測量ST段偏移線的高度，以每組ST段偏移基線總和的mv數的均值作為心肌缺血損傷的指標。上述動物麻醉后腹主動脈取血，一部分血離心取血清，測AST(天門冬氨酸氨基轉移酶)、CPK(肌酸磷酸激酶)、LDH(乳酸脫氫酶)的含量，另一部分血肝素抗凝后，測量全血黏度。

1.4.2對急性大鼠血瘀模型的影響[4,5]取Wistar大鼠36只，雌雄各半，體重220～280 g，按體重隨機分為6組，每組6只，空白對照組、模型對照組、陽性對照組(復方丹參片0.84 g/kg)，益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)劑量組。每天灌胃給藥一次(空白對照組與模型對照組灌胃用生理鹽水10 ml/kg)，連續5 d。除空白對照組外，其余各組末次給藥后，造血瘀模型。造模方法是：皮下注射0.1%的腎上腺素0.07 ml/100 g體重，共2次，間隔4 h，并在此二次間(前后各2 h)將大鼠浸入冰水中5 min。然后動物禁食不禁水，次晨動物腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉，腹主動脈取血，肝素抗凝，置血液黏度計上測定不同切變率時全血黏度。

1.4.3對大鼠血小板聚集率的影響[6]取Wistar大鼠40只，雄性，體重220～280 g，隨機分為5組，每組8只：空白對照組(生理鹽水10 ml/kg)，陽性對照組(復方丹參片0.84 g/kg)，益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)劑量組。每天灌胃給藥1次，連續5 d，末次給藥后禁食(不禁水)12～18 h，腹腔注射水合氯醛350 mg/kg麻醉，腹主動脈取血注入枸櫞酸鈉溶液的硅化離心管中(枸櫞酸鈉與血比例1:9)抗凝，于血小板聚集儀上測定ADP誘導的血小板最大聚集率。

1.4.4對實驗性心肌梗死犬的影響[7]雜種犬30只，隨機分為5組，每組6只。模型對照組給予等容量注射用生理鹽水，陽性對照組(復方丹參片0.84 g/kg)，實驗組分為益心酮大、中、小(0.4、0.2、0.1 g/kg)劑量組,均采用灌胃給藥。將家犬用戊巴比妥鈉(30 mg/kg)靜脈注射麻醉。背位固定，切開頸部皮膚，氣管插管，連接人工呼吸機(SC-3)。于左側第四肋間施開胸術，暴露心臟，剪開心包，行心包術,分離冠狀動脈左前降支主干中下1/3交界處，穿線以備結扎，用多點濕布式吸附法標測EECG，標測點24個，分正常區(對照點)，梗死邊緣區和梗死中心區。術畢，穩定15 min。記錄各點心外膜心電圖(EECG),同時自股靜脈取血，測AST、CPK和LDH值，作為給藥前值。結扎冠狀動脈，制備實驗性急性心肌梗死模型。灌胃給予實驗藥物。記錄給藥前、結扎、給藥后15、30、45、60、90、120、150、180、240、360 minEECG,以ST段升高總mv數表示∑-ST，以ST段升高≥2 mv的導聯數為N-ST。記錄360 min后，第二次取靜脈血測心肌三酶。最后，取下心臟，稱全心重，沿冠狀溝剪去大血管根部和心房，稱左心室重。將左心室均勻地橫斷切成5片,置于硝基四氮唑蘭(N-BT)染液中,在37 ℃恒溫水浴箱中染色15 min。梗死區不著色，非梗死區被NBT染為藍色。剪去各心肌片被染色非梗死區心肌，把未染色的梗死心肌稱重，除以全心重和心室重分別得到梗死范圍占全心重和心室重的百分比(%)。

2 結果

2.1對大鼠心肌缺血模型的影響

2.1.1對大鼠心肌缺血模型ST段位移的影響 各組與模型對照組比較，陽性對照組、益心酮大、中劑量組均可使ST段偏移減小。結果見表1。

表1 益心酮對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血模型ST段位移的影響

注：1)P<0.05,與模型對照組比較。

2.1.2對大鼠心肌缺血模型血清酶的影響 模型對照組與空白對照組比較，血清心肌三酶的釋放量明顯增加。各給藥組與模型對照組比較，可見陽性對照組、益心酮大劑量組可顯著降低血清中心肌三酶的含量P<0.01，中劑量組也可有一定幅度的降低P<0.05。結果見表2。

2.1.3對大鼠心肌缺血模型血液黏度的影響 中、低切變率時，模型對照組與空白對照組比較全血黏度明顯升高，說明給予異丙腎上腺素后血液黏度增加。與模型對照組比較的結果表明：陽性對照組、益心酮大、中劑量組均能抑制異丙腎上腺素所致的大鼠血黏度的異常升高。結果見表3。

2.2對急性大鼠血瘀模型的影響 與空白對照組相比，模型對照組可見全血高中低切黏度均明顯增加(P<0.01)， 表明血瘀模型成立。益心酮大、中劑量、陽性對照組均可抑制全血黏度的異常變化，降低全血黏度。益心酮大劑量組的作用明顯強于陽性對照組的作用。結果見表4。

表2 益心酮對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血模型血清酶的影響

注：1)P<0.01與空白對照組比較；2)P<0.05，3)P<0.01,與模型對照組比較。

表3 益心酮對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血模型全血黏度的影響

注：1)P<0.01與空白對照組比較；2)P<0.05，3)P<0.01,與模型對照組比較。

表4 益心酮對血瘀大鼠全血黏度的影響

注：1)P<0.01與空白對照組比較；2)P<0.05，3)P<0.01,與模型對照組比較。

2.3對大鼠血小板聚集率的影響 與空白對照組比較，陽性對照組、益心酮大、中劑量組均能有效抑制血小板的聚集,結果見表5。

表5 益心酮對大鼠血小板聚集率的影響

注：1)P<0.01，2)P<0.001，與空白對照組比較。

2.4對實驗性心肌梗死犬的影響

2.4.1對心肌梗死犬心肌缺血程度(∑-ST)的影響 陽性對照組實測值在90 min作用明顯(P<0.05)；益心酮大劑量組實測值在45～180 min作用明顯(P<0.05)；益心酮中劑量組實測值在60～180 min作用明顯(P<0.05)；益心酮小劑量組實測值在120～150 min作用明顯(P<0.05)。 見表6。

2.4.2對心肌梗死犬心肌缺血范圍(N-ST)的影響 陽性對照組實測值在90～150 min作用明顯(P<0.05)；益心酮大劑量組實測值在45～180 min作用明顯(P<0.05)；益心酮中劑量組實測值在60～180 min作用明顯(P<0.05)；益心酮小劑量組實測值在120 min作用明顯(P<0.05)，見表7。

2.4.3對心肌梗死犬心肌缺血面積的影響 陽性對照組，益心酮大劑量組、中劑量組均可明顯減少梗死/全心及梗死/左心面積(P<0.05)，其它各組無顯著性差異，見表8。

表6 益心酮對心肌梗死犬缺血程度的影響

注：1)P<0.01，2)P<0.001，3)P<0.0001，與模型對照組比較。

表7 益心酮對心肌梗死犬缺血范圍的影響

注：1)P<0.01，與模型對照組比較。

表8 益心酮對心肌梗死犬心肌梗死面積的影響

1)P<0.01，2)P<0.001，與模型對照組比較。

2.4.4對心肌三酶(AST，CPK，LDH)的影響 陽性對照組，益心酮小、中、大劑量組，與模型對照組比較均可明顯降低血清實測值中AST的含量(P<0.05)；陽性對照組，益心酮中、大劑量組，與模型對照組比較均可明顯降低血清實測值中CK的含量(P<0.05)；益心酮大劑量組與模型對照組比較明顯降低血清實測值中LDH的含量(P<0.05)。結果見表9。

表9益心酮對心肌梗死犬血清中AST、CPK、LDH的影響

1)P<0.05,與模型對照組比較。

3 討論

本實驗主要采用了大鼠和犬作為實驗動物，這樣從不同種屬的動物制造模型觀察益心酮的抗心肌缺血的作用，從而使其藥理作用的研究更加完整、全面。

對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血模型，采用心電圖機描記心電圖，測量ST段偏移線的高度，從每組ST段偏移基線高度的總和的mv數均值作為心肌缺血程度的指標，可以更加直觀地獲得心肌缺血程度的情況，以評價藥物的作用，但麻醉劑水合氯醛對大鼠的心電情況有一定的影響，容易干擾心電圖，從而影響實驗結果的準確，這一點需進一步探討。

本實驗分別觀察了益心酮對異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血模型和急性大鼠血瘀模型血黏度的影響以及其對血小板聚集率的影響，發現益心酮均能降低大鼠的血黏度，改善其血液流變性，降低了血小板的聚集率，提示益心酮通過提高紅細胞、血小板的表面電荷，增加血液有形細胞之間斥力使電泳減少，加快紅細胞及血小板在血中流速，促進軸流，減少邊流和聚集粘附，從而達到活血化瘀，降低血液黏度，減少聚集的作用。由于血小板聚集減少，TXA2釋放將大為減少，cAMP破壞減少，大大緩解了冠狀動脈的痙攣，起到緩解、控制心絞痛的臨床效果。我們采用皮下注射大劑量腎上腺素加寒冷刺激的方法復制大鼠急性血瘀模型，使動物血液呈高黏、聚、凝狀態。以此觀察益心酮對血瘀模型大鼠的血液黏度的影響，結果顯示益心酮可抑制血瘀模型大鼠血液流變學的異常變化，降低全血黏度。

本實驗采用了目前應用最為廣泛的冠狀動脈結扎法，以研究益心酮對實驗性心肌梗死犬心外膜電圖(EECG)、心肌梗死面積(MIS)、心肌三酶的影響。實驗證明，益心酮能夠降低心肌梗死犬的心肌缺血程度(Σ-ST)，減少心肌缺血范圍(N-ST)，縮小心肌梗死面積(MIS)，降低其血清中天門冬氨酸氨基轉移酶 (AST) 、肌酸磷酸激酶(CPK)、乳酸脫氫酶(LDH)的含量，具有抗心肌缺血作用。

[1] 陳 修. 心血管藥物和藥理學研究進展與展望[J]. 中國藥理學與毒理學雜志，1995，9(3)：161.

[2] 張玉璽，姚曉穎，肖 艷，等.大根草提取物對模型大鼠心肌缺血的保護作用研究[J].中國藥房，2009，20(33)：2575.

[3] 樸晉華，董培智，高天紅，等.益心酮片對大鼠心肌缺血的保護作用[J]. 中國中藥雜志，2003，28(5)：442.

[4] 張鈞田.現代藥理實驗方法學[M].北京：北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1989:1153.

[5] 邱 全 ，王 輝 ，王海洋 ，等.水蛭顆粒對大鼠急性血瘀模型血液流變學、SOD、MDA的影響[J].實用中醫藥雜志，2008，24(11)：687.

[6] 徐叔云，卞如濂，陳 修. 藥理實驗方法學[M].第2版.北京：人民衛生出版社，1991:854.

[7] 李路江 ，吳子芳 ，呂文偉，等.紅花提取物對犬急性心肌缺血的保護作用[J].中草藥，2007，37(9)：1381.

2010-01-20

[修回日期] 2011-04-21

Experimentalstudyonanti-myocardialischemiaeffectofYixintong

LI Hong-bin1,YU Hong1,YANG Shi-jie2

(1.208th Hospital of PLA, Changchun 130062,China;2.School of Basic Medical Sciences，Jilin University，Changchun 130021，China)

ObjectiveTo study the anti-myocardial ischemia effect of Yixintong.MethodsThe rat myocardial ischemia model was caused by isoprenaline and the experiment myocardial infraction dogs were used to observe the effect of Yixintong. Blood stasis model was used to observe the effect of Yixintong on blood viscosity and platelet aggregation.ResultsYixintong (0.4 g/kg, 0.2 g/kg)could decrease ST length and rise serum enzyme(such as AST,CPK and LDH). Yixintong (0.4 g/kg,0.2 g/kg) could also lower the blood viscosity. Yixintong could improve hemorrheologic abnormality and lower the whole blood viscosity. Yixintong could inhibit platelet aggregation of rat. Yixintong could ameliorate the myocardial ischemia degree(Σ-ST) and decrease the myocardial ischemia coverage(N-ST). Yixintong could also decrease the rised serum enzyme(such as AST,CPK and LDH).ConclusionsYixintong had a protective and therapeutic action to the experimental myocardial ischemia．

Yinxintong；myocardial ischemia；blood viscosity；platelet aggregation；myocardia enzyme

李洪斌(1971-)，男，碩士，主管藥師.Tel：(0431)86988967，E-mail: mrlihongbin@hotmail.com.

R965

A

1006-0111(2011)03-0188-05