HAART聯合康愛保生濃縮丸對HIV病毒載量被有效抑制后的HIV/AIDS患者的NK細胞的干預作用*

溫 敏， 李艷萍， 何 鵬， 趙 遠

(1.成都中醫藥大學，四川 成都 611137； 2.云南省中醫中藥研究院， 云南 昆明 650223；3.云南省騰沖縣人民醫院， 云南 騰沖 679100)

目前艾滋病流行態勢依然嚴峻，截至2011年底，估計中國存活HIV感染者和AIDS患者(PLHIV)78萬人，其中艾滋病(AIDS)患者15.4萬人，云南省是中國艾滋病流行最嚴重的地區之一[1]。HAART是艾滋病治療的主要手段，能顯著降艾滋病患者的HIV病毒載量和增加CD4+T細胞數量[2～3]，臨床實踐表明中醫藥在改善艾滋病患者的臨床癥狀和改善患者生存質量方面效果明確。那么在HAART聯合中藥對HIV病毒載量被有效抑制的HIV/AIDS患者的NK細胞的變化趨勢有何干預作用？因此本文將通過臨床隨機雙盲試驗研究，觀察HAART聯合中藥對HIV-1病毒載量被有效抑制后的NK細胞的動態變化，初步闡釋HAART聯合中藥治療HIV/AIDS的優勢和可能作用靶點。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 126名HIV/AIDS患者來自云南省騰沖、祥云縣人民醫院國家免費艾滋病抗病毒治療時間至少6個月以上，進行HAART聯合康愛保生濃縮丸治療前HIV-1病毒載量均低于檢測限(50拷貝/mL)。遵循臨床隨機雙盲試驗原則將126名符合入組條件的HIV/AIDS患者分為HAART+中藥(康愛保生濃縮丸)組和HAART+中藥組。

1.2 試驗用藥物 HAART藥物為國家免費艾滋病抗病毒藥物。中藥為康愛保生丸濃縮丸，系云南省中醫中藥研究院附屬醫院制劑，并用于云南省中醫藥治療艾滋病試點項目的中藥院內制劑(批準文號為滇藥制字Z20090006A)。該劑處方由紫花地丁、黃芩、桑白皮、人參組成。具有解毒清熱，活血祛濕，養陰益氣等功效。服用方法：6 g/次，1日4次，有效期36個月。由云南省中醫中藥研究院提供。

1.3 隨訪時間 2010年4月～2011年5月，在臨床隨機雙盲試驗的0、3、6、9、12月進行隨訪，檢測NK細胞。

1.4 NK細胞計數 用FC500流式細胞分析儀進行熒光抗體標記檢測。所用單克隆抗體及其組合為：CD3/CD16±56/。加入20 μL試劑和100 μL Flow-Count 熒光微球至管底，加入100 μL混合均勻的受試對象抗凝全血至管底，輕柔振蕩混勻后室溫避光孵育15 min，加入450 μL FACS Lysing solution溶解紅細胞，室溫溶血6～12 min。1700 r/min離心5 min，倒掉上清，用1%小牛血清洗液2 mL洗滌，1700 r/min離心5 min后，倒掉上清，加入600 μL 1%多聚甲醛固定液，上機檢測。

1.5 統計學方法 用SPSS 15.0軟件包處理所有的數據，CD4+T細胞基線、CD8+T細胞基線、入組時年齡、HAART持續時間、NK細胞絕對計數用中位數(四分衛數)表示。分組比較用Mann-Whitney U檢驗。雙側有顯著性差異(P<0.05)。

2 結果

2.1 入組HIV/AIDS患者一般人口學資料 126例HIV-1AIDS的一般人口學資料見表1。按照入組時隨機雙盲原則進行分組，分別給予HAART聯合中藥(康愛保生濃縮丸)、HAART+安慰劑兩種不同干預措施，兩組各因素的差異沒有顯著性意義(P>0.05)，見表1。

表1 126例AIDS患者分組的一般人口學資料

2.2 HAART聯合康愛保生濃縮丸對NK細胞的干預作用 在0月時HAART+康愛保生濃縮丸組和HAART+安慰劑組的NK細胞相對計數的差異有顯著性意義(P=0.012)，經過12月的治療，兩組在各隨訪點的NK細胞絕對計數總體逐漸增長，從第9個月開始HAART+中藥組的NK細胞絕對計數大于HAART+安慰劑組，在12月時兩組的NK細胞絕對計數細胞的差異有顯著性意義(P=0.032)，結果見表2。

表2 HAART聯合康愛保生濃縮丸對HIV-1病毒載量有效抑制下的NK細胞的干預作用研究

注：2組比較，*P<0.05

根據入組時CD4+T細胞數量將HAART+康愛保生濃縮丸組和HAART+安慰劑組分為CD4+T細胞基線<200個/μL和CD4+T細胞基線≥200個/μL兩層進行統計分析。

CD4+T細胞基線≥200個/μL層：在各隨訪時間點HAART+安慰劑組和HAART+康愛保生濃縮丸組的NK細胞絕對計數分別為：0月，194個/μL(128～320個/μL)，173個/μL(118～282個/μL)；3月，163個/μL(125～265個/μL)，210個/μL(174～328個/μL)；6月，214個/μL(130～409個/μL)，234個/μL(154～380個/μL)；9月，335個/μL(203～424個/μL)，292個/μL(218～367個/μL)；12月，385個/μL(266～704個/μL)，475(266～574個/μL)。

CD4+T細胞基線<200個/μL層：在各隨訪時間點HAART+安慰劑組和HAART+康愛保生濃縮丸組的NK細胞絕對計數分別為：0月，157個/μL(106～210個/μL)，138個/μL(94～309)個/μL；3月，163個/μL(125～265個/μL)，210個/μL(174～328個/μL)；6月，172個/μL(122～437個/μL)，214個/μL(130～409個/μL)；9月，250個/μL(180～384個/μL)，292個/μL(200～345個/μL)；12月，372個/μL(189～574個/μL)，469個/μL(230～604個/μL)。結果顯示入組CD4+T細胞基線<200個/μL的HIV/AIDS患者在12個月的隨訪過程中HAART聯合康愛保生濃縮丸組的NK細胞絕對計數增長趨勢比HAART+安慰劑組的明顯(圖1)。

圖1 入組CD4+T細胞基線<200個/μL層的HAART聯合中藥和HAART+安慰劑組的CD4+T細胞變化趨勢

3 討論

從2004年全國開始實行中醫藥治療艾滋病試點項目以來，對全國9000多例臨床資料總結可以明確中醫藥可以明顯減輕發熱、乏力、氣短、咳嗽、腹瀉、皮疹等癥狀，增加患者體重，恢復部分患者的勞動能力，提高患者的生存質量。但中醫藥治療HIV/AIDS研究仍有局限性，主要體現在(1)中醫藥治療HIV/AIDS效果緩慢、效果不穩定；(2)中醫藥治療HIV/AIDS靶點不明確，對其作用機制的研究較少。那么中醫藥除改善臨床癥狀外介入艾滋病治療的切入點何在，有何優勢？HAART聯合中藥是否對NK細胞有干預作用？

NK細胞(natural killer cell，自然殺傷細胞)是天然免疫系統中一個重要的組成部分，是一類來源于骨髓的大顆粒淋巴細胞，在正常外周血中大約占單個核細胞成分的10%～15%，是免疫防御的第一道防線，NK細胞在抗病毒、抗腫瘤中發揮著極其重要的作用[4]。NK細胞分為三個亞群，即：CD56dimCD16+、CD56briCD16+/-和CD56-CD16+NK細胞。CD56dimCD16+NK細胞占外周血NK細胞的80～90%，通過與細胞直接結合或者通過抗體依賴的細胞介導的細胞毒效應發揮細胞殺傷功能；CD56briCD16+/-NK細胞占外周血NK細胞的2～10%，主要通過分泌IFN-γ、TNF、IL-2等細胞因子發揮免疫調節功能；CD56-CD16+NK細胞的比例不足10%，是一群具有較低殺傷能力的未成熟的NK細胞[5]。國內外研究表明HIV感染者和發病者的具有細胞毒活性的CD56dimCD16+細胞百分比明顯低于HIV抗體陰性健康對照，而殺傷功能較弱的CD56-CD16+NK細胞百分比明顯高于HIV抗體陰性[6～7]。

我國學者對HAART持續超過1年的HIV/AIDS患者的NK細胞亞群研究發現HAART對NK細胞亞群構成的恢復有一定作用，特別是發揮主要功能的CD56dimCD16+細胞亞群的恢復[7]。筆者研究發現經過12個月的治療HAART聯合康愛保生濃縮丸對HIV病毒載量被有效抑制至檢測限下的HIV/AIDS患者的NK細胞絕對計數和HAART+安慰劑的差異有顯著性差異(P<0.05)。根據隨機雙盲試驗入組時CD4+T細胞基線分層統計后發現入組時CD4+T細胞基線<200個/μL層的HIV/AIDS患者HAART聯合康愛保生濃縮丸組在12個月的隨訪過程中NK細胞絕對計數的增長趨勢好于HAART+安慰機組的。結果提示HAART聯合康愛保生濃縮丸可能提高HIV/AIDS患者的NK細胞絕對計數，提高NK細胞數量可能是HAART聯合中藥或中藥治療艾滋病臨床有效的一個作用靶點，同時也是HAART持續治療過程中中藥介入艾滋病治療的一個切入點和優勢。HAART聯合中藥或中藥對NK細胞的作用需進一步通過規范的隨機雙盲試驗和擴大病例數、延長觀察時間進一步確定。同時應考察HAART、HAART聯合中藥或中藥不同治療措施對NK細胞的三個亞群：CD56dimCD16+、CD56briCD16+/-和CD56-CD16+NK細胞的干預作用，從而發現不同治療措施下NK細胞亞群的變化趨勢，為發揮不同治療措施的優勢和特點提供科學依據。

[1]中國人民共和國衛生部，聯合國艾滋病規劃署，世界衛生組織2011年中國艾滋病評估報告[EB/OL].http：//www.moh.gov.cn/publicfiles/business/htmlfiles/mohjbyfkzj/s3586/201201/53957.htm.

[2]Torre D，Speranza F，Martegani R．Impact of highly active antiretroviral therapy[J]HIV Med，2005，6(2)：66～78.

[3]Wensing A，VijverDvd，Asjo B，et al．Prevalence of transmitted drug resistance in Europe is largely influenced by the presence of non-B sequences：analysis of 1400 patients from 16 countries：the CATCH-Study[J].Anti vir Ther，2003，8(suppl1)：S131．.

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[7]陳歡，何磊，張子寧，等.HIV 感染者、發病者及 HAART 治療者 NK 細胞亞群變化研究[J].免疫學雜志，2010，26(7)：557～560.