氣相色譜法（GC）測定瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉暮?/h1>
2012-01-26 07:17楊曉穎
當代醫學 2012年24期
楊曉穎
氣相色譜法（GC）測定瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉暮?/p>
楊曉穎
目的 建立氣相色譜法測定瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜己康姆椒?。方法 Agilent DB-1701毛細管柱（30mm×0.32mm(內徑)×0.25μm），流量2.0mL/min；進樣口溫度280℃；檢測器溫度320℃；升溫程序為70℃保持1.5min，以20℃/min-1升溫至230℃保持2min，10℃/min升溫至280℃保持8min。結果 在0.009625～0.09625mg/mL范圍內，呈現良好線性關系（r＝0.9998），平均回收率為99.97%，RSD為1.09%。結論 本法簡便可行、重復性好、靈敏度高，適用于瓜蔞子的質量控制。
瓜蔞子；氣相色譜法；3,29-二苯甲?；闃侨嗜?/p>
瓜蔞子為葫蘆科(Cucurbitaceae)植物瓜萎和雙邊瓜蔞的干燥成熟種子，具有潤肺化痰、滑腸通便之功效[1]。先期的研究表明，瓜蔞子種子含有括樓仁二醇、3,29-二苯甲?；闃侨嗜?、異括樓仁二醇等多種五環三萜化合物[2]，并有部分學者應用HPLC法對3,29-二苯甲酞基括樓仁三醇進行了測定[3]。本文著重研究氣相色譜測定3,29-二苯甲酞基括樓仁三醇的含量，為瓜蔞子質量評價和品質控制提供可量化的新的技術參數。
1 資料與方法
1.1 儀器與試藥 Agilent 6890N氣相色譜儀，Agilent G1888A頂空自動進樣器 (Agilent公司，美國)；Mettler Toledo AG135型萬分之一電子分析天平（瑞士）。
水為超純水（屈臣氏雙蒸水），其余試劑均為分析純。3,29-二苯甲酞基括樓仁三醇對照品（批號20100913，純度 99.5%）、內標物質膽固醇（批號20100621，純度：99.7%）均購自中國藥品生物制品檢定所。
瓜蔞子藥材采集于信陽、焦作、駐馬店，經專家鑒定為葫蘆科(Cucurbitaceae)植物瓜萎（Trichosanthes kirilowii Maxim）干燥成熟種子。取藥材粉碎，過40目篩，制成粗粉，40℃恒溫干燥6h，得藥材樣品。
1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent DB-1701毛細管柱（30mm×0.32mm(內徑)×0.25μm）；流量2.0mL/min；進樣口溫度280℃；檢測器溫度320℃；升溫程序為70℃保持1.5min,以20℃/min升溫至230℃保持2min,10℃/min升溫至280℃保持8min;載氣為氮氣；進樣量1.0μl。色譜圖見圖1。
1.3 溶液的制備
1.3.1 內標溶液的制備 精密稱膽固醇適量，加氯仿溶解并稀釋成1mL含1.4895mg的溶液，搖勻，作為內標溶液。
1.3.2 對照品標準溶液 精確稱取3,29-二苯甲?；闃侨嗜紝φ掌?.4475mg，置25mL的量瓶中，加入內標溶液5mL，氯仿定容，得濃度為0.2979mg/mL的標準品溶液。
1.3.3 供試品溶液 精確稱取干燥的瓜蔞子粉末1g于索氏抽提器中，氯仿100mL，內標溶液1mL，熱回流提取2h，提取2次，提取液過濾后，濃縮定容至50mL，得3,29-二苯甲?；闃侨嗜继崛∥?。
2 結果
2.1 線性關系考察 精確稱取3,29-二苯甲?；闃侨嗜紝φ掌?.85mg，置20mL的量瓶中，加入內標溶液1mL，氯仿溶解并定容，搖勻分別精密吸取3,29-二苯甲?；闃侨嗜紝φ掌穬湟?、2、3、5、7、10mL于20mL量瓶中，加氯仿稀釋至相應的刻度，搖勻，得到不同濃度系列溶液。按照2.1項色譜條件進行測定。以3,29-二苯甲?；闃侨嗜紳舛龋╔）為橫坐標，3,29-二苯甲?；闃侨嗜挤迕娣e與膽固醇峰面積的比值（Y）為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Y=2987.36X－239（r=0.9998）。結果表明，3,29-二苯甲?；闃侨嗜荚?.009625～0.09625mg/mL范圍內同其與相應膽固醇峰面積的比值呈現良好線性關系。
2.2 穩定性試驗 取同一樣品粉末約1.0g，精密秤定。按2.2.3項下方法制備供試品溶液，分別于0、2、5、10、15、24h精密吸取供試品溶液1μl進樣，計算3,29-二苯甲?；闃侨嗜挤迮c膽固醇峰面積的比值，結果RSD為1.12%，表明供試品溶液在24h內穩定性較好。
2.3 精密度試驗 精密吸取對照品標準溶液1mL于5mL量瓶中，氯仿定容。精密吸取溶液1μl，重復進樣6次,按2.1項下色譜條件測定。計算3,29-二苯甲?；闃侨嗜挤迮c膽固醇峰面積的比值，結果RSD為1.09 %，表明方法精密度良好。
2.4 重復性試驗 取同一樣品粉末6份，每份約1.0g，精密秤定。按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，結果3,29-二苯甲?；闃侨嗜己繛?.487mg/g，RSD為1.19%。結果表明方法重復性良好。
2.5 加樣回收率的測定 精密稱取已知含量樣品9份，每份約0.5g，分別加入標準品溶液（濃度為0.2979mg/mL）2、2.5、3mL，分低、中、高3個濃度進行加樣回收試驗，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按照2.1項條件測定，計算加樣回收率，結果見表1。
圖1 氣相色譜圖（A.對照品；B.樣品；1-內標，2-3,29-二苯甲?；闃侨嗜迹?/p>
表1 加樣回收率試驗結果（n=6）
2.6 樣品含量的測定 精密稱取采集不同地區樣品3份，每份約1.0g，分別按照2.2.3項下方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件測定，計算3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉暮?。結果信陽、焦作、駐馬店樣品含量分別為1.487、1.398、4.493mg/g，平均含量為2.623mg/g，RSD為1.02%。
3 討論
3.1 提取方法的選擇 對瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜继崛r，選擇了超聲波提取和索氏抽提器回流提取，結果顯示索氏抽提器回流提取得率較高，故選用索氏抽提器回流提取。
3.2 溶劑的選擇 根據文獻方法[1-2]，比較了氯仿、乙酸乙醋、乙醚、甲醇等常用溶劑的提取效果。結果顯示，當提取液中存在乙酸乙醋和乙醚時，檢測干擾較大。這可能是由于瓜蔞子中脂肪油和萜的種類較多，彼此結構相似，根據相似相容原理，而使得大量雜質引入。而氯仿作為溶劑，雜質干擾較小，通過比較最終選擇氯仿作為溶劑，分離效果和峰型明顯，無干擾。
3.3 色譜條件的選擇 本文對3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉纳郎爻绦蜻M行了比較，發現升溫程序在80℃，保持2min，以15℃/min的速率升至230℃，保持2min，10℃/min升溫至280℃保持8min；可達到較好的分離效果。但實驗中發現在這種條件下的峰型較寬且峰與峰之間的分離度較低，主要可能升溫速率慢，色譜流出時間過長。通過改變色譜條件，加快升溫速率，即70℃保持1.5min，以20℃/min升溫至230℃保持2min,10℃/min升溫至280℃保持8min；進樣口溫度：280℃，通過此程序升溫的方法，待測組分的良好分離，又能實現盡可能短的分析時間，使3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉玫捷^好的分離。
[1] 國家藥典委員會.中國藥典·一部[S].2010:104.
[2] 唐春風.瓜萎子的化學成分和定性定量研究[D].沈陽:中國醫科大學，2005.
[3] 程雪梅，吳技，俞桂新,等.RP-HPLC法測定瓜萎子中3,29-二苯甲酞基括樓仁三醇含量[J].藥物分析，2005,25(4):377-379.
10.3969/j.issn.1009-4393.2012.24.014
462600 河南省臨潁縣第二人民醫院（楊曉穎）
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楊曉穎
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楊曉穎
目的 建立氣相色譜法測定瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜己康姆椒?。方法 Agilent DB-1701毛細管柱（30mm×0.32mm(內徑)×0.25μm），流量2.0mL/min；進樣口溫度280℃；檢測器溫度320℃；升溫程序為70℃保持1.5min，以20℃/min-1升溫至230℃保持2min，10℃/min升溫至280℃保持8min。結果 在0.009625～0.09625mg/mL范圍內，呈現良好線性關系（r＝0.9998），平均回收率為99.97%，RSD為1.09%。結論 本法簡便可行、重復性好、靈敏度高，適用于瓜蔞子的質量控制。
瓜蔞子；氣相色譜法；3,29-二苯甲?；闃侨嗜?/p>
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1.2 色譜條件 色譜柱：Agilent DB-1701毛細管柱（30mm×0.32mm(內徑)×0.25μm）；流量2.0mL/min；進樣口溫度280℃；檢測器溫度320℃；升溫程序為70℃保持1.5min,以20℃/min升溫至230℃保持2min,10℃/min升溫至280℃保持8min;載氣為氮氣；進樣量1.0μl。色譜圖見圖1。
1.3 溶液的制備
1.3.1 內標溶液的制備 精密稱膽固醇適量，加氯仿溶解并稀釋成1mL含1.4895mg的溶液，搖勻，作為內標溶液。
1.3.2 對照品標準溶液 精確稱取3,29-二苯甲?；闃侨嗜紝φ掌?.4475mg，置25mL的量瓶中，加入內標溶液5mL，氯仿定容，得濃度為0.2979mg/mL的標準品溶液。
1.3.3 供試品溶液 精確稱取干燥的瓜蔞子粉末1g于索氏抽提器中，氯仿100mL，內標溶液1mL，熱回流提取2h，提取2次，提取液過濾后，濃縮定容至50mL，得3,29-二苯甲?；闃侨嗜继崛∥?。
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2.2 穩定性試驗 取同一樣品粉末約1.0g，精密秤定。按2.2.3項下方法制備供試品溶液，分別于0、2、5、10、15、24h精密吸取供試品溶液1μl進樣，計算3,29-二苯甲?；闃侨嗜挤迮c膽固醇峰面積的比值，結果RSD為1.12%，表明供試品溶液在24h內穩定性較好。
2.3 精密度試驗 精密吸取對照品標準溶液1mL于5mL量瓶中，氯仿定容。精密吸取溶液1μl，重復進樣6次,按2.1項下色譜條件測定。計算3,29-二苯甲?；闃侨嗜挤迮c膽固醇峰面積的比值，結果RSD為1.09 %，表明方法精密度良好。
2.4 重復性試驗 取同一樣品粉末6份，每份約1.0g，精密秤定。按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定，結果3,29-二苯甲?；闃侨嗜己繛?.487mg/g，RSD為1.19%。結果表明方法重復性良好。
2.5 加樣回收率的測定 精密稱取已知含量樣品9份，每份約0.5g，分別加入標準品溶液（濃度為0.2979mg/mL）2、2.5、3mL，分低、中、高3個濃度進行加樣回收試驗，按2.2.3項下方法制備供試品溶液，按照2.1項條件測定，計算加樣回收率，結果見表1。
圖1 氣相色譜圖（A.對照品；B.樣品；1-內標，2-3,29-二苯甲?；闃侨嗜迹?/p>
表1 加樣回收率試驗結果（n=6）
2.6 樣品含量的測定 精密稱取采集不同地區樣品3份，每份約1.0g，分別按照2.2.3項下方法制備供試品溶液，按照2.1項下色譜條件測定，計算3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉暮?。結果信陽、焦作、駐馬店樣品含量分別為1.487、1.398、4.493mg/g，平均含量為2.623mg/g，RSD為1.02%。
3 討論
3.1 提取方法的選擇 對瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜继崛r，選擇了超聲波提取和索氏抽提器回流提取，結果顯示索氏抽提器回流提取得率較高，故選用索氏抽提器回流提取。
3.2 溶劑的選擇 根據文獻方法[1-2]，比較了氯仿、乙酸乙醋、乙醚、甲醇等常用溶劑的提取效果。結果顯示，當提取液中存在乙酸乙醋和乙醚時，檢測干擾較大。這可能是由于瓜蔞子中脂肪油和萜的種類較多，彼此結構相似，根據相似相容原理，而使得大量雜質引入。而氯仿作為溶劑，雜質干擾較小，通過比較最終選擇氯仿作為溶劑，分離效果和峰型明顯，無干擾。
3.3 色譜條件的選擇 本文對3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉纳郎爻绦蜻M行了比較，發現升溫程序在80℃，保持2min，以15℃/min的速率升至230℃，保持2min，10℃/min升溫至280℃保持8min；可達到較好的分離效果。但實驗中發現在這種條件下的峰型較寬且峰與峰之間的分離度較低，主要可能升溫速率慢，色譜流出時間過長。通過改變色譜條件，加快升溫速率，即70℃保持1.5min，以20℃/min升溫至230℃保持2min,10℃/min升溫至280℃保持8min；進樣口溫度：280℃，通過此程序升溫的方法，待測組分的良好分離，又能實現盡可能短的分析時間，使3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉玫捷^好的分離。
[1] 國家藥典委員會.中國藥典·一部[S].2010:104.
[2] 唐春風.瓜萎子的化學成分和定性定量研究[D].沈陽:中國醫科大學，2005.
[3] 程雪梅，吳技，俞桂新,等.RP-HPLC法測定瓜萎子中3,29-二苯甲酞基括樓仁三醇含量[J].藥物分析，2005,25(4):377-379.
10.3969/j.issn.1009-4393.2012.24.014
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