反相離子對高效液相色譜法用于利塞膦酸鈉有關物質的分離與測定

張衛民，楊 杰，吳擁軍

(1.河南天方藥業股份有限公司，河南駐馬店 463000;2.鄭州大學化學系，河南鄭州 450001)

0 引言

利塞膦酸鈉是由美國寶潔公司研制開發的第三代雙膦酸鹽類藥物，為西藥二類新藥。到目前為止，只開發出少數測定生物基質中利塞膦酸鈉的分析方法，包括經?；凸柰榛纬蓳]發性衍生物后的氣相色譜—質譜法［1］和非常靈敏但極為復雜的酶聯免疫吸附測定法［2］。據文獻報道，高效液相色譜法是測定利塞膦酸鈉的首選方法［3－5］。本文介紹一種用于雙膦酸鹽類藥物利塞膦酸鈉與有關物質分離的反相離子對高效液相色譜法，該方法操作簡便、準確可靠。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

戴安高效液相色譜儀，美國戴安公司;100 μm Hamilton微量進樣器，美國;移液槍，Dragon，芬蘭;AL 104型電子天平，梅特勒—托利多儀器有限公司。塞膦酸鈉原料藥(批號:071100010)由河南天方藥業公司提供，利塞膦酸鈉化學對照品(批號:100613－200401)購自中國藥品生物制品檢定所。

1.2 色譜條件

通過測試不同流動相pH值、四丁基溴化銨濃度、甲醇比例、磷酸二氫銨濃度和乙二胺四乙酸二鈉濃度對利塞膦酸鈉及其有關物質色譜行為的影響，確定了如下色譜條件:色譜柱為美國Thermo BDS Hypersil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相為甲醇—水(25 ∶75，體積分數)，流速為0.8 mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為262 nm。

1.3 利塞膦酸鈉原料藥有關物質限量檢查

采用不加校正因子的主成分自身對照法，溶液配制及有關物質HPLC測定方法參照2010版中國藥典附錄 VD［6］。

2 實驗結果

2.1 流動相組成的優化

經過多次實驗，得到優化后的流動相組成為:pH值為7.9，四丁基溴化銨濃度為2 mmol/L，甲醇比例為25%，磷酸二氫銨濃度為5 mmol/L，EDTA濃度為1.5 mmol/L時，二者出峰時間較為合適且能達到良好的分離。

2.2 利塞膦酸鈉有關物質測定

在上述色譜條件下，1 g/L利塞膦酸鈉與其有關物質均能分離，4.941min的峰為流動相的峰，利塞膦酸鈉與其有關物質的保留時間分別約為5.9 min 和8.3 min，分離度大于 2.5，見圖 1;理論塔板數以利塞膦酸鈉和有關物質峰計分別不低于5 000和2 000。利用有關物質供試溶液和對照溶液分別重復進樣5次的實驗結果，即得有關物質的峰面積為0.326、0.328、0.346、0.282、0.326，利塞膦酸鈉的峰面積為:2.208、2.207、2.252、2.216、2.245。因此二者相對標準偏差RSD分別為7.4%和0.96%。

圖1 1 g/L利塞膦酸鈉溶液色譜圖

表1 對照和供試溶液中利塞膦酸鈉及其有關物質的峰面積

根據表1的測定結果，以不加校正因子的主成分自身對照法計算，雜質峰含量約為0.14%;同時以面積歸一化法對供試品溶液色譜圖中雜質峰和主成分峰峰面積計算，雜質峰含量也約為0.14%，兩種計算方法得到的結果較為一致。

3 討論

本文所建立的反相離子對HPLC分析方法在測定利塞膦酸鈉時重現性好，利塞膦酸鈉及其有關物質能達到良好分離，方法系統適用性好，在有關物質檢查時得到的結果較為可靠。因此利用該法，可以用于利塞膦酸鈉常規分析及其有關物質檢查，同時為利塞膦酸鈉原料藥的質量控制提供了有效可靠的分析手段。

［1］Auriola S，Kostiainen R，Ylinen M，et al.Analysis of(dichloromethylene)bisphosphonate in urine by capillary gas chromatography－mass spectrometry［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis，1989 ，7(12):1623－1629.

［2］Mitchell D Y，Heise M A，Pallone K A，et al.The effect of dosing regimen on the pharmacokinetics of risedronate［J］.Journal of Clinical Pharmacology，1999，48(4):536－542.

［3］李朋梅，張 明，張 鐳，等.利塞膦酸鈉片溶出度測定方法的建立［J］.中國藥房，2011，22(33):3137－3138.

［4］楊 杰.利塞膦酸鈉原料藥中有關物質的鑒定及其溶解度研究［D］.鄭州:鄭州大學，2010.

［5］萬維香，瞿建江.高效液相色譜法測定利塞膦酸鈉的含量［J］.中國藥業，2010，19(4):24－25.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典二部［M］.北京:化學工業出版社，2010，附錄31頁.