河北進境種用動物衣原體血清學檢測

王建昌，付 琦，王金鳳，田振祥

（河北出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心，河北 石家莊 050051）

衣原體（Chlamydia）是一種專一性細胞內病原，具有非常廣譜的宿主，并能在人和動物等宿主中引起腸炎、肺炎、流產等多種疾病[1-3]；而其中的鸚鵡熱衣原體主要引起動物的流產、肺炎、腹瀉以及人類的肺炎、結膜炎、尿道炎等。世界動物衛生組織（OIE）將此病列為必須通報疾病[4]，我國列為二類傳染病[5]。禽衣原體病是由鸚鵡熱嗜性衣原體引起的一種傳染病，其中不同禽種易感性不同，臨床癥狀的差異取決于鳥的品種、年齡以及衣原體菌株，以鸚鵡和鴿子易感。而雞對鸚鵡熱嗜性衣原體的抵抗力較強，雞衣原體病只有幼年雞發生急性感染時出現死亡，真正發生流行的很少。大多數自然感染的雞，癥狀不明顯，主要表現沉郁、拉稀、呼吸困難、結膜炎、漸進性消瘦、衰竭死亡。病理剖檢以纖維素性心包炎、氣囊炎、肝腫大、肝周炎和脾腫大等特征[6]。豬衣原體病是由鸚鵡熱嗜性衣原體和流產嗜性衣原體引起的一種慢性、接觸性人畜共患傳染病，臨床上以妊娠母豬流產、產死胎、木乃伊胎、弱仔，各年齡段豬發生肺炎、腸炎、多發性關節炎、心包炎、結膜炎，公豬發生睪丸炎等為主要特征。

目前研究表明國內規?；B殖場中動物的衣原體抗體陽性率較高，造成了極大地經濟損失。近幾年來我國從國外引進了大量的優良動物品種，極大地促進我國畜牧業的發展和提高了人民生活水平。為了探明引進種用動物中衣原體感染情況，本研究針對河北省2011—2012年間引進的2批進境種雞、2批進境種鴨及2批進境種豬血清樣品，通過間接血凝試驗對衣原體抗體水平進行了檢測?，F將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 待檢材料

隨機抽取實驗室-20℃冷藏保存的進境種豬血清90份，種鴨血清48份，種雞血清72份。樣品無菌采集，且未溶血、未腐敗。

1.2 診斷試劑盒和試劑

衣原體間接血凝抗原、陰、陽性血清（批號均為120215）、稀釋液（批號為120320），購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 主要儀器設備和器材

96孔V型微量反應板，25 μL、100 μL微量移液器，微量振蕩器，超凈工作臺，恒溫培養箱，高壓消毒器，臺式離心機，1.5 μL離心管。

1.4 操作方法與結果判定

IHA操作方法：用定量加樣器每孔加稀釋液75μL。取25 μL 待檢血清以4 倍遞增稀釋，從第一孔稀釋至第三孔，即1:4、1:16、1:64，第三孔棄去25 μL，孔內液體量為75 μL。同一板上同時設陽性、陰性和空白對照各2 孔。向每孔加抗原各25 μL，置微型振蕩器上振蕩2 min，在37 ℃下作用2 h后判定結果。

IHA結果判定：“++++”表示100%凝集紅細胞全部凝集，形成一層均勻的膜，布滿整個孔底；“+++”表示75%凝集紅細胞在孔底形成一層薄膜，面積比前者稍??；“++”表示50%凝集紅細胞在孔底形成薄層凝集，邊緣松散或呈鋸齒狀；“+”表示25%凝集紅細胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圓點；“-”表示紅細胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點。對照各孔均成立即：陽性血清孔呈“+ + + +”；陰性血清孔呈“-”；空白對照孔呈“-”。被檢血清判定標準：被檢血清1:16孔出現“++”以上者為陽性；1:4孔出現“+”以下者為陰性；1:4孔“++”至1:16孔“+”以下者為可疑。

2 結果與分析

2.1 IHA檢測結果

對210份抽檢血清采用IHA檢測衣原體抗體，結果表明陽性樣品為33份，抗體陽性率為15.7%（表1）。

表1 血清IHA檢驗結果

2.2 不同動物IHA檢測結果

由表1 可知，不同動物血清樣品中均可檢出衣原體抗體。其中豬抗體陽性率最高，為20%，而鴨抗體陽性率最低，為4.2%。

3 討論

3.1 目前檢測衣原體抗體的方法主要有間接血凝試驗（IHA）、補體結合試驗（CFT）、間接免疫熒光試驗（IFA）和ELISA方法。目前國內動物衣原體抗體檢測主要依賴間接血凝試驗（IHA），該方法操作簡單，不需要專門的儀器設備，在基層有著廣泛的應用。但是該方法重復性較差，存在一定的假陽性。補體結合試驗（CFT）繁瑣費時的操作、結果重復性不高、具有極高的技術要求，該方法非常不利于推廣應用。間接免疫熒光試驗（IFA）試劑昂貴，同時需要熒光顯微鏡和操作人員的豐富經驗，很難推廣使用。目前ELISA方法要比上述幾種方法更加穩定、敏感、特異性更強，但是均為國外生產，價格昂貴。如以色列Biogal公司的ImmunoComb診斷試劑卡，操作方便，但是每份樣品成本為120元，十分不利于大規模的檢測。目前急需國內的衣原體ELISA檢測試劑盒的商品化。

3.2 國內邱昌慶等通過間接血凝試驗（IHA）對動物群中衣原體感染情況進行了檢測。結果表明家禽血清陽性率為24.9%，豬血清陽性率為46.8%，奶牛為21.4%，水牛為14.0%～20.0%，黃牛為15.2%～32.6%，牦牛為18.7%，并且不同地區衣原體抗體陽性率有著明顯的差異。對于我國不同地區進境動物的衣原體感染情況，目前的報道還較少。本研究中我們共檢測了6批3種不同動物共210份血清。結果表明3種動物血清樣品中均有陽性檢出，提示目前引入的種用動物攜帶該病的機率很大。由于檢測的范圍和數量有限，本研究結果尚不能真正反映出引入種用動物感染本病的全貌。本研究涉及的檢測對象沒有包括目前引進量較大的奶牛，為了更加真實、全面的反映引進動物衣原體感染情況，我們下一步將進一步擴大檢測范圍及數量。

[1]楊宜生，姜天童，方雨鈴，等. 衣原體和衣原體病[M]. 武漢：湖北科技出版社，1994.

[2]Kauffold J，Melzer F，Henning K，et al. Prevalence of chla?mydiae in boars and semen used for artif i cial insemination[J].Theriogenology，2006，65（9）：1750-1758.

[3]Zhong G. Killing me softly：Chlamydial use of proteolysisfor evading host defenses[J]. Trends Microbiol，2009，17（10）：467-474.

[4]陸承平，陳杖榴. 獸醫法規導論[M]. 北京：中國農業出版社，2006：232.

[5]林穎，曹慶炎，孟祥勇. 禽衣原體病綜述[J]. 遼寧畜牧獸醫，2004（5）：40-42.

[6]邱昌慶.衣原體分類研究進展[J]，中國獸醫科技，2000，30（12）：19-21.