HPLC測定益肝顆粒中五味子甲素的質量濃度

楊大宇，李洪陽，鄒海曼，王 磊，劉 懿，李彥冰

(黑龍江中醫藥大學藥學院，哈爾濱 150040)

益肝顆粒是由丹參、五味子等中藥制備而成的純中藥制劑.制劑經試驗研究和臨床驗證，具有活血止痛，涼血舒肝，清熱燥濕，益氣補虛功效.臨床上主要用于急、慢性乙型肝炎、乙肝轉陰等疾病，具有良好療效.其中五味子具有保肝，降低轉氨酶等作用，五味子所含的五味子甲素也是益肝顆粒的有效成分［1－3］，本文采用高效液相色譜法［4－5］測定了五味子甲素的質量濃度，以控制益肝顆粒的質量.

1 儀器與試藥

1.1 儀器

戴安Ultimate3000高效液相色譜儀(VWD－3400紫外檢測器、WPS－3000自動進樣器、TCC－3x00柱溫箱、LPG－3x00泵、Chromeleon色譜工作站);KQ－250E型超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司);電子分析天平(AB204－N，梅特勒－托利多儀器上海有限公司);Millinnium32旋轉蒸發儀RE－52AA(上海亞榮生化儀器廠).

1.2 試藥

藥材(購自哈藥集團世一堂飲片廠);實驗用水系重蒸水;甲醇為色譜純;五味子甲素對照品由中國藥品生物制品檢定所提供，批號為0764－9804;其他試劑為分析純.

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:依利特SinoChrom ODS－BP(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相為甲醇－水(87∶13);檢測波長為254 nm;柱溫:25℃;流速為1.0mL/min;進樣量10μL.在此色譜條件下，五味子甲素峰與其他峰分離明顯.五味子甲素保留時間約為8.1min，在該色譜條件下陰性無干擾.對照品、樣品、陰性對照品色譜圖，見圖1.

圖1 HPLC色譜圖

2.2 試液配制

2.2.1 對照品溶液的制備

稱取五味子甲素對照品10.00mg置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;量取5.0mL加入到10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得.

2.2.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品1 g，加入50mL甲醇，250 W，40 kHz超聲30min，冷卻至室溫，用甲醇補足損失的質量，過0.22 μm的微孔濾膜，即得.

2.2.3 陰性供試品溶液

按照供試品溶液的配制方法，取處方中去除五味子藥材制成空白對照品，作為陰性供試品溶液.

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系的考察

精密吸取五味子甲素對照品溶液(100μg/mL)2、4、6、8、10μL，依次注入液相色譜儀中，依次注入液相色譜儀中，記錄峰面積.按上述色譜條件進行測定以五味子甲素進樣量X為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，繪制標準曲線.五味子甲素回歸方程為 Y=22.53X，r=0.9992.結果表明五味子甲素進樣量在0.2～1.0μg范圍內與峰面積線性關系良好.

2.3.2 精密度試驗

精密吸取五味子甲素對照品溶液10μL，重復進樣5次，峰面積值RSD為0.104%，結果表明，儀器精密度良好.

2.3.3 穩定性試驗

按上述方法，取供試品溶液，精密吸取樣品溶液10μL，每隔2 h進樣1次，共進樣6次，峰面積的RSD為1.67%，結果表明，樣品中五味子甲素在10 h內基本穩定.

2.3.4 重復性試驗

精密稱取同一批樣品 1.0 g，按照 2.2.2 項下平行制備5份供試品溶液，供試品分別進樣10μL，對照品進樣10μL進行質量濃度測定，結果RSD為1.19%，結果表明，該方法的重復性良好.

2.3.5 加樣回收試驗

精密稱取已知含量的樣品0.75 g，共9份，加入五味子甲素對照品溶液(40μg/mL)6.0、4.4、2.8mL，按樣品供試品處理方法制備樣品，以10μL進樣.按2.2項下色譜條件測定，求得平均回收率為98.82%，(n=3)，見表1.

表1 加樣回收試驗結果

3 結語

藥典中所收載的五味子所選擇的定量指標成分為五味子醇甲，但本處方制劑中所選擇的定量指標為五味子甲素，兩者測定條件差異很大.本試驗曾采用不同的流動系統，對甲醇－水系統不同比例進行試驗，結果采用甲醇－水(87∶13)流動相系統時，所測得五味子甲素峰與其他組分峰能達到較好的分離.

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