阿莫西林脈沖釋藥微丸的研制

許志仁，卞俊，蔣雪濤，原麗慧（1.解放軍第411醫院藥學科，上海20044；2.江西中醫學院藥學院，南昌 0004；.第二軍醫大學藥學院，上海 2004）

近年來，隨著時間生物學和時辰藥理學的發展，釋藥方式符合人體晝夜節律變化的口服脈沖釋藥系統受到藥學研究者的廣泛關注[1]。目前，國內、外已設計和研究了多種不同釋藥機制的定時釋藥制劑，主要包括脈沖片劑和脈沖微丸[2，3]。阿莫西林（Amoxicillion，羥氨芐青霉素）是一種半合成青霉素藥物，因其可口服給藥而廣泛用于臨床[4]。青霉素類抗生素屬時間依賴性抗菌藥，當藥物濃度在病原體最低抑菌濃度（MIC）以上時，發揮抗菌作用；當濃度為最低殺菌濃度（MBC）的4～5倍時，殺菌作用達到飽和，此時再提高藥物濃度已不能提高殺菌作用[5]。因此臨床應用阿莫西林時為少量多次給藥，以使血藥濃度超過MIC的時間維持到最長。為使患者睡眠時藥物濃度能維持在MIC之上，又避免半夜服藥帶來的不便，本試驗設計制備了阿莫西林脈沖釋藥微丸，其可在晚上臨睡前（22：00）時服用，間隔4 h后于次日凌晨釋放出治療量的藥物，以達到使血藥濃度超過MIC的時間維持到最長的效果。

1 儀器與試藥

Mini Glatt流化床（德國Glatt公司）；85-2型恒溫磁力攪拌器（上海司樂儀器廠）；HL-2恒流泵（上海新波無線電廠）；SE3001F電子天平（奧豪斯儀器上海有限公司）；UV-2550紫外分光光度計（日本島津公司）；ZRS-8G智能溶出試驗儀（天津天河醫療儀器有限公司）；標準篩（浙江省上虞市紗篩廠）。

阿莫西林原料藥及對照品（珠海聯邦制藥股份有限公司，批號：3081032009，純度：99.6%）；空白蔗糖丸芯（杭州高成生物營養技術有限公司，規格：直徑0.4～0.6 mm）；羥丙基甲基纖維素（HPMC，型號：E5）、乙基纖維素水分散體（Surelease，固含物：25%）均由上?？房蛋录夹g有限公司提供；羧甲基淀粉鈉（CMS-Na，上海晶純實業有限公司）；阿莫西林脈沖釋藥微丸（解放軍第411醫院藥學科自制，含量：18.1%）。

2 阿莫西林含量及體外釋放度測定方法的建立

2.1 吸收波長的選擇

精密稱取阿莫西林對照品適量，加蒸餾水溶解、稀釋，制備成濃度為133 μg·mL－1的阿莫西林對照品溶液，按紫外分光光度法（《中國藥典》2010年版二部附錄ⅣA）[6]在200～700 nm波長范圍內進行紫外掃描，同時將制劑所用輔料按處方比例用水制備成溶液，搖勻過濾后進行掃描。結果顯示，阿莫西林在272 nm波長處有最大吸收，而輔料在此吸收可忽略。同法對阿莫西林在0.1 mol·L－1鹽酸（以下簡稱鹽酸）和pH6.8磷酸鹽緩沖液（PBS）中進行紫外掃描，吸收峰位和強度與在水中的相似，所以選擇272 nm作為測定波長。阿莫西林和輔料在水中的紫外掃描光譜見圖1。

圖1 紫外掃描光譜圖A.阿莫西林；B.輔料Fig 1 UV spectrumA.amoxicillin；B.excipients

2.2 標準曲線的建立

精密稱取阿莫西林對照品適量，置于量瓶中，分別以蒸餾水、鹽酸、PBS為溶出介質，制備成1 mg·mL－1的對照品母液，再分別精密吸取0.5、1.0、1.5、2、2.5 mL置于10 mL量瓶中，分別加對應溶出介質稀釋，得濃度分別為50、100、150、200、250 μg·mL－1的溶液，以各自的溶出介質為空白，于272 nm波長處測定吸光度（Y）。以Y對濃度（X）進行線性回歸，得回歸方程：水：Y＝0.002 7X+0.005 4（r＝0.999 9）；鹽酸：Y＝0.002 6X+0.013 9（r＝0.999 9）；PBS：Y＝0.002 7X+0.008（r＝0.999 9）。

2.3 回收率試驗

按處方量80%、100%、120%精密稱取阿莫西林對照品各3份，按處方量比例加入100%標示量的輔料，加溶出介質搖勻，過濾，取續濾液于272 nm波長處分別測定吸光度，計算。結果，低、中、高濃度平均回收率分別為（99.75±0.63）%、（100.23±0.74）%、（99.94±1.22）%，總平均回收率為99.97%，RSD＝0.86%。

2.4 精密度試驗

按“2.2”項下方法操作，制備濃度分別為100、150、200 μg·mL－1的低、中、高3個樣品溶液，每個濃度的溶液各于第1天重復測定5次，以后每天測定1次，連續測定5 d。根據標準曲線方程計算含量，得日內RSD＝0.86%，日間RSD＝0.96%。

2.5 體外釋放度測定方法建立

按《中國藥典》2010年版二部附錄ⅩD釋放度測定法第一法（籃法）裝置[6]，水為釋放介質，轉速100 r·min－1，介質溫度（37±0.5）℃，在預定時間間隔內（每隔1 h取樣1次，共取樣12 h）取樣10 mL，0.45 μm微孔濾膜過濾，并即時補加介質10 mL。為考察介質pH對釋放度的影響，分別以水、鹽酸、PBS為釋放介質進行試驗，用紫外分光分度計在波長272 nm處測定吸光度，計算藥物累積釋藥百分率。

3 處方與制備

3.1 各層包衣液的處方與制備

3.1.1 含藥層包衣液處方與制備。處方：5%的阿莫西林原料藥+2%HPMC。制備：取黏合劑HPMC溶于適量熱水中，磁力攪拌至完全溶解，再緩慢加入藥物，攪拌均勻，制備成HPMC質量分數為2%、藥物質量分數為5%的混懸液，將此混懸液過120目篩，以防止在包衣過程中小顆粒堵塞噴嘴。

3.1.2 溶脹層包衣液處方與制備。處方：3%的CMS-Na的乙醇-水混懸液。制備：將CMS-Na分散在乙醇-水（1∶1，V/V）混合液中，攪拌均勻。

3.1.3 控釋層包衣液處方與制備。處方：乙基纖維素水分散體。制備：取乙基纖維素水分散體用水稀釋成固含物為10%的溶液，攪拌均勻即得，備用。

3.2 包衣微丸的制備

將空白蔗糖丸芯置于流化床內，按含藥層、溶脹層、控釋層的順序依次包衣，進風溫度55℃，噴液速率1.5～1.8 mL·min－1，流化壓力0.25～0.28 bar，霧化壓力1.8 bar，以底噴方式進行包衣，每次包衣完成后流化干燥20 min。包衣增重計算公式：包衣增重（%）＝（包衣后重－包衣前重）/包衣前重×100%。

3.3 含藥丸芯釋放度考察

按“2.5”項下方法考察含藥丸芯（只有含藥層，未包溶脹層及控釋層的微丸）的釋放度。結果表明，含藥丸芯中藥物在30 min內基本釋放完全，因此，含藥丸芯不會成為阻滯藥物釋放的因素。釋放曲線見圖2。

圖2 含藥丸芯體外釋藥曲線Fig 2 Dissolution profiles of core containing drug in vitro

3.4 微丸釋藥的影響因素考察

3.4.1 溶脹層（CMS-Na）包衣增重對藥物釋放的影響。保持控釋層增重28%，以CMS-Na為溶脹層材料，改變溶脹層包衣增重分別為12%、16%、20%，制備包衣微丸，并分別進行累積釋藥百分率測定，釋放曲線見圖3。

圖3 溶脹層不同包衣增重時微丸體外釋藥曲線Fig 3 Dissolution profiles of pellets with different thickness of swelling layer in vitro

圖3結果表明，溶脹層包衣增重達到一定的厚度時，才能獲得較好的脈沖釋放效果。保持控釋層包衣增重28%、溶脹層增重12%時，釋藥曲線類似緩釋曲線，這可能是由于溶脹層薄，所產生的膨脹力不足，無法撐破控釋層衣膜形成裂口，導致藥物層被溶解的藥物只能通過已被脹大、但未破裂的控釋層衣膜擴散所致[7]，因此藥物釋放量少；當溶脹層包衣增重達16%時，溶脹層已經產生足夠的膨脹力來撐破控釋層衣膜，于4 h時滯后開始釋藥，隨后的4 h累積釋藥百分率達80%以上；當溶脹層包衣膜增重到20%時，時滯為2 h，時滯已達不到要求。因此本試驗選用溶脹層包衣增重16%。

3.4.2 控釋層（乙基纖維素水分散體）包衣增重對藥物釋放的影響。保持溶脹層包衣增重為16%，改變控釋層包衣增重分別為24%、28%、32%，制備包衣微丸，并分別進行累積釋藥百分率測定，釋放曲線見圖4。

圖4 控釋層不同包衣增重時微丸體外釋藥曲線Fig 4 Dissolution profiles of pellets with different thickness of controlled-release layer in vitro

圖4結果表明，保持溶脹層包衣增重16%、控釋層包衣增重24%，釋藥時滯為2 h，達不到理想要求；控釋層包衣增重32%，釋藥曲線并沒有呈現出期望的脈沖釋放效果，而是呈現出一種緩釋的狀態；而控釋層包衣增重28%時，藥物釋放可時滯4 h，并達到脈沖釋放的效果。

3.4.3 介質pH對藥物釋放的影響。將溶脹層包衣增重16%、控釋層包衣增重為28%的脈沖控釋微丸分別置于水、鹽酸、PBS釋放介質中進行累積釋藥百分率測定。結果，藥物在3種介質中的釋放無顯著性差異，即微丸中藥物的釋放不依賴于介質pH值。

3.5 優化條件驗證試驗

按照上述因素考察得出的優化條件，制備了3批微丸，以水為釋放介質測定其累積釋藥百分率，考察其重現性。結果表明，優化的條件重現性良好。12 h內累積釋藥百分率（1、4、9、12 h）數據如表1，釋藥曲線見圖5。

表1 3批樣品累積釋藥百分率Tab 1 Accumulation drug release rate of 3 batches of samples

圖5 3批樣品體外釋藥曲線Fig 5 Drug release profiles of 3 batches of samples

4 討論

本試驗采用雙層包衣模型制備脈沖釋藥微丸，該模型溶脹層為水溶脹型材料，控釋層為惰性高分子材料，藥物的釋放通過外層膜的破裂而觸發，與滲透壓調節原理[8]和有機酸誘導原理[9]所制備的脈沖控釋微丸相比，該模型時滯后的釋藥速率快，藥物釋放不受外界pH值的影響。

含藥包衣液要過120目篩，防止藥粉中的細小顆粒堵塞噴嘴。溶脹層材料CMS-Na分散在乙醇-水（1∶1）混合液中，以減小黏度，防止包衣過程中微丸之間的粘連。

對優化的條件進行了驗證試驗，結果表明，該優化條件下包衣得到的3批微丸的重現性良好，說明優化條件穩定可靠。制備的阿莫西林脈沖釋藥微丸具有體外脈沖釋放作用。

阿莫西林口服后吸收迅速，約75%～90%可自胃腸道吸收，食物對藥物的吸收影響不顯著，阿莫西林在多數組織和體液中分布良好，口服阿莫西林0.25 g達峰時間為1～2 h。因此為了能維持普通制劑單日內6～8 h間隔給藥的療效，本試驗設計了時滯為4 h左右的脈沖釋藥微丸，時滯后4 h釋藥達到80%左右，目的是在4 h脈沖釋放的阿莫西林在有即刻吸收相之外還具有延遲吸收相，使得在給藥間隔期內的大部分時間內，阿莫西林的血藥濃度都能維持在MIC之上，達到高效的抑菌能力，同時能滿足制劑的設計要求[10，11]。

張瑜[12]等制備了鹽酸維拉帕米脈沖控釋微丸，其內層溶脹層采用CMS-Na，中間阻滯層選用HPMC，外層衣膜采用含致孔劑的乙基纖維素，制得的脈沖微丸釋藥曲線與本試驗的釋藥曲線類似。與其相比，本試驗減少了包衣層數（無需包中間阻滯層），簡化了包衣過程，并考察了溶出介質pH對微丸釋藥的影響。

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