宮頸上皮內瘤變累腺組織中MMP-7的表達及意義

周曉景 王芳 牛吉峰

宮頸上皮內瘤變累腺組織中MMP-7的表達及意義

周曉景①王芳①牛吉峰①

目的：檢測基質降解素(MMP-7)在宮頸上皮內瘤變(CIN)累腺組織中的表達，探討其對CIN發生、發展以及對CIN預后的影響。方法：采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)和免疫組化分別檢測30例CIN累腺組織、40例CIN非累腺組織、15例正常宮頸組織中MMP-7 mRNA和蛋白表達。結果：累腺CIN組MMP-7 mRNA和蛋白的表達均顯著高于未累腺CIN組和正常組(P<0.05)；MMP-7 mRNA及蛋白無論在CIN累腺組還是非累腺組Ⅲ期中的表達顯著高于Ⅱ期中的表達，比較差異有統計學意義(P<0.05)，在CINⅡ期和正常宮頸組織中的表達比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論：累腺CIN中MMP-7高表達可能與宮頸錐切術后復發及發展為浸潤性宮頸癌傾向密切相關；MMP-7可作為預測CIN預后的指標。

宮頸上皮內瘤變累腺； MMP-7； 預后

宮頸上皮內瘤變(CIN)是與宮頸癌密切相關的一組癌前病變，對于CINⅡ~Ⅲ期，目前主要治療方法是宮頸錐切術，而CIN累腺與宮頸錐切術后復發及預后相關[1]。MMP-7在許多上皮性腫瘤中高表達，并且與生存率密切相關。本研究通過檢測MMP-7在CIN累腺組織中核酸和蛋白表達情況，探討MMP-7對CIN累腺預后的影響和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集CIN組織標本70例，均為Ⅱ~Ⅲ期。CIN累腺組30例，Ⅱ期12例，Ⅲ期18例，年齡26~56歲，平均年齡(36.52±3.81)歲。CIN非累腺組40例，Ⅱ期24例，Ⅲ期16例，年齡25~58歲，平均年齡(37.16±4.20)歲。取標本前未經冷凍、激光及藥物治療，標本在陰道鏡下活檢取材、病理學確診。取15例正常宮頸組織作對照，對照組年齡30~52歲，平均年齡(36.90±3.45)歲。新鮮組織離體后迅速放入RNAguard中，-80 ℃保存備用。

1.2 RT-PCR法 總RNA提取及逆轉錄成cDNA、擴增，操作按試劑盒說明書進行。以GAPDH為內參照。MMP-7引 物 序 列：上 游 5’GTGGTCACCTACAGGATCGT3’， 下游 5’ACCATCCGTCCAGCGTTCAT3’(282 bp)；GAPDH引物序列：上游5’TGGGTGTGAACCACGAGAA3’，下游5’GGAATGGACTGTGGTCATGA3’(143 bp)。MMP-7 和GAPDH的PCR反應條件：94 ℃熱變性5 min，以94 ℃變性30 s，59 ℃復性30 s，72 ℃延伸1 min順序共循環38次，72 ℃延伸5 min。反應產物在1.5%瓊脂糖凝膠上電泳(90 V，30 min)，EB染色。用Bandscan 5.0生物電泳分析軟件進行分析。所測指標均與GAPDH灰度值比值作為基因水平相對值進行比較。

1.3 免疫組化S-P法 鼠抗人MMP-7單克隆抗體，S-P免疫組化試劑盒，實驗步驟按試劑說明書進行，石蠟切片標本厚度小于4 μm，切片脫蠟染色后，于光學顯微鏡下觀察切片顯色反應。結果判定：以細胞膜或(和)胞漿呈棕黃色染色為陽性著色。

1.4 統計學處理 應用SPSS 10.0統計軟件進行分析，計數資料采取字檢驗，計量資料以(±s)表示，采取t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MMP-7在CIN累腺組、CIN非累腺組及正常宮頸組中檢測結果 MMP-7mRNA在CIN累腺組中的表達顯著高于未累腺CIN組及正常組(P<0.05)；MMP-7蛋白主要定位于上皮細胞及腺細胞胞漿，間質細胞中無表達，在CIN累腺組中的陽性表達率顯著高于未累腺CIN組及正常組(P<0.05)；MMP-7 mRNA及蛋白在未累腺CIN組及正常組中的表達比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2 MMP-7在CIN不同分期中的表達 無論累腺組還是非累腺組，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅢ期中的表達顯著高于Ⅱ期，比較差異有統計學意義(P<0.05)，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅡ期和正常宮頸組織中的表達比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 MMP-7mRNA及蛋白在不同宮頸組織中的表達

3 討論

宮頸癌的癌前病變CINⅡ~Ⅲ期患者，若不及時有效治療，約66%可發展為宮頸原位癌，2%進展為浸潤癌[2]。宮頸錐切術是目前治療CINⅡ~Ⅲ期的主要手段，尤其適用于生育期患者。但即使有效治療，CIN宮頸錐切術后復發率為3.03%~47.30%[3]。而宮頸管腺體受累是術后復發的獨立危險因素[4]。MMP-7即基質溶素，具有強大的基質降解活性和廣泛的底物特異性，在腫瘤血管的生成和腫瘤的免疫逃避中發揮重要作用[5]。MMP-7在腫瘤中的高表達及其生物學的特異性使其可能成為預測、判斷腫瘤生物學行為的新指標。

本研究中，MMP-7 mRNA及蛋白在累腺CIN組織中表達顯著高于非累腺CIN組織及正常宮頸組織，正常宮頸上皮細胞有弱表達或不表達；MMP-7蛋白在CIN上皮細胞及腺細胞胞漿表達，基質不表達，表明MMP-7在核酸和蛋白水平表達一致，提示MMP-7在CIN累腺組織中的高表達，使不典型上皮細胞具有浸潤的傾向。MMP-7 mRNA及蛋白在累腺CIN組織中的高表達也證明了MMP-7在CIN細胞表達具有相對特異性，因此推斷，MMP-7陽性的累腺CIN是錐切術后易于復發的原因之一，且進展為浸潤性宮頸癌的幾率也相對升高。本研究中，無論累腺組還是非累腺組，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅢ期中的表達顯著高于Ⅱ期中的表達，MMP-7 mRNA及蛋白在CINⅡ期中的表達顯著高于正常宮頸組織中的表達，提示MMP-7可能為CIN發生、發展以及進展為宮頸癌的始動原因之一。MMP-7可作為預測CIN預后的指標。臨床上通過應用蛋白酶抑制劑阻斷MMP-7活性，可能在一定程度上改善累腺CIN患者的預后。

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Expression and Clinic Significance of MMP-7 in Cervical Intraepithelial Neoplasia Glandular Involvement

ZHOU Xiao-jing，WANG Fang，NIU Ji-feng.

Objective:To investigate the expression and the significance of MMP-7 in cervical intraepithelial neoplasia(CIN)glandular involvement.Method:MMP-7 was examined by immunohistochemical SP method and semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR) in 70 cases of CIN and 15 cases of normal cervical tissue.Result:The mRNA and protein level of MMP-7 were all significantly higher in CIN glandular involvement group than that in CIN without glandular involvement group and normal group(P<0.05).Either in CIN glandular involvement group or in CIN without glandular involvement group，MMP-7 mRNA and protein level were all notedly higher in CIN Ⅲ group than that in CIN Ⅱgroup(P<0.05).Conclusion:MMP-7 is highly expressed in CIN glandular involvement and it may be relate to cervical squamous cell carcinoma，and may be served as a new marker in predicting the prognosis in CIN.

Cervical intraepithelial neoplasia glandular involvement; MMP-7; Prognosis

Affiliated Luoyang Central Hospital of Zhengzhou University，Luoyang 471000，China

Medical Innovation of China，2012，9(22):014-015

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.22.007

①鄭州大學附屬洛陽中心醫院 河南 洛陽 471000

周曉景

2012-05-21) (本文編輯：李靜)