上海市靜安區、閘北區人群牙周感染厭氧菌群分布及耐藥性研究

常青 何俊霖 俞立英 馮希平 胡付品

（1.復旦大學附屬華山醫院口腔科，上海 200040；2.上海交通大學附屬第九人民醫院口腔預防科，上海 200011；3.復旦大學附屬華山醫院抗生素研究所，上海 200040）

上海市靜安區、閘北區人群牙周感染厭氧菌群分布及耐藥性研究

常青1何俊霖1俞立英1馮希平2胡付品3

（1.復旦大學附屬華山醫院口腔科，上海 200040；2.上海交通大學附屬第九人民醫院口腔預防科，上海 200011；3.復旦大學附屬華山醫院抗生素研究所，上海 200040）

目的:調查上海市靜安區、閘北區牙周膿腫患者的口腔厭氧菌群分布特點及耐藥性。方法:選取2008年3月—2010年12月復旦大學附屬華山醫院口腔科門診患者中牙周膿腫患者251例，其中135例患者來自靜安區（靜安區組），116例患者來自閘北區（閘北區組）。取患者膿液進行厭氧菌培養鑒定及體外藥敏實驗，藥敏試驗采用瓊脂稀釋法。結果:靜安區組厭氧菌檢出率60.0%（81/135），以產黑色素普雷沃菌最多，占50.4%（68/135）；閘北區組厭氧菌檢出率51.7%（60/116），以產黑色素普雷沃菌最多，占22.4%（26/116）。藥敏試驗顯示，靜安區組厭氧菌株對甲硝唑耐藥率為24.5%，而閘北區組為8.3%，2組間有顯著差異（P＜0.05）。結論:產黑色素普雷沃菌是牙周膿腫患者厭氧菌群中的優勢菌；近年來厭氧菌對甲硝唑耐藥性有所增加，且不同地區耐藥譜不同。

牙周膿腫； 厭氧菌； 藥敏試驗

口腔是微生物賴以生存的環境。牙周膿腫是由多種厭氧菌混合感染引起的急性炎性反應性疾病，亦是導致牙周炎惡化的主要因素之一。牙周膿腫的主要治療方法是膿液引流，輔以必要的抗生素療法［1］。近年來，由于抗菌藥物的濫用，使得厭氧菌耐藥性逐年增高，已出現耐甲硝唑菌株［2］。為此，有必要對不同地區牙周膿腫患者厭氧菌群的分布及耐藥性進行分析研究，為臨床合理應用抗生素提供依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象與標本來源

選取2008年3月—2010年12月在復旦大學附屬華山醫院口腔科門診就診的牙周膿腫患者251例。251例患者中135例來自靜安區（靜安區組），其中男性72例，女性63例；年齡30～64歲，平均年齡45歲。其余116例患者來自閘北區（閘北區組），其中男性79例，女性37例；年齡30～78歲，平均年齡62歲。研究對象納入標準:（1）3個月內未接受過任何牙周病治療；（2）3個月內未服用抗生素。

1.2 觀察指標

記錄取樣位點臨床指標，包括:附著喪失（attachment lose，AL）、牙周袋深度（periodontal depth，PD）、牙齦出血指數（gingival bleeding index，BI）、松動度（loose degree，LD）。

1.3 實驗材料

（1）培養基:厭氧瓊脂 Wilkins－Chalgren為英國OXOID公司產品；（2）儀器與試劑:標本運輸管為意大利COPAN公司產品；厭氧產氣袋、厭氧菌鑒定API 20A條均為法國生物梅里埃公司產品；（3）抗菌藥物:甲硝唑、頭孢美唑、頭孢西丁、亞胺培南、克林霉素和氯霉素；（4）質控菌株:脆弱擬桿菌標準菌株。

1.4 標本采集

患者用普通水漱口后，醫師用無菌刮匙去除患者齦上菌斑，隔濕，消毒牙周膿腫術區，用無菌刀片于膿腫波動明顯的最低位切開，以無菌棉拭子沾取膿血，立即置入輸送培養基中送檢［3］。

1.5 厭氧菌的培養與鑒定

標本培養基在0.5 h內接種于厭氧血平板中。所有標本均同時接種厭氧和需氧血瓊脂平板，37℃孵育48～72 h后觀察菌落，分離純化并做耐氧試驗（厭氧環境的氣體條件為5%CO2、10%H2、85%N2）。證實為專性厭氧菌后，分離細菌并經涂片、革蘭染色鏡檢和觸酶試驗后，用API 20A厭氧菌鑒定條鑒定。

1.6 藥敏試驗

按美國臨床實驗室標準化委員會標準（National Committee of Clinical Laboratory Standard，NCCLS），采用瓊脂對倍稀釋法［4］，測定抗菌藥物對厭氧菌的最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC），受試菌菌液稀釋至107CFU/m L后用多點接種儀將厭氧菌接種于含不同抗菌藥物濃度的瓊脂上（104CFU/點），實驗同時設置質控菌株對照和不加抗生素的正常生長對照。37℃厭氧培養48 h后閱讀結果。以50%和90%同屬厭氧菌株生長受抑制的最低抗生素濃度分別為該藥的50%抑菌濃度（MIC50）和90%抑菌濃度（MIC90）。判斷標準按美國臨床實驗室標準化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2008年版文件標準。

1.7 統計學處理

采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析。數據以n（%）表示，組間比較采用χ2檢驗或Fisher’s確切概率法。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 厭氧菌種類

2組人群厭氧菌種類比較見表1。

表1 上海市兩個區域牙周膿腫患者口腔厭氧菌種類比較［n（%）］

2.2 藥敏試驗

2組口腔厭氧菌群抗菌藥物藥敏試驗結果比較見表2和表3。2組厭氧菌對甲硝唑、克林霉素和氯霉素的耐藥率差異均有統計學意義（P＜0.05）。

表2 上海市靜安區牙周膿腫患者口腔厭氧菌群抗菌藥物藥敏試驗結果

表3 上海市閘北區牙周膿腫患者口腔厭氧菌群抗菌藥物藥敏試驗結果

3 討 論

牙周膿腫是牙周炎發展到晚期的并發癥。Salari等［5］對牙周細菌學的研究發現，牙周袋內有400多種細菌，但只有少數細菌為牙周致病菌，其中伴放線放線桿菌、牙齦卟啉單胞菌、生痰二氧化碳嗜纖維菌、齒蝕擬桿菌、中間普雷沃菌等厭氧菌與慢性牙周炎發生有關。幾種細菌通過單獨或協同作用，引發牙周組織的破壞［6］。另有學者［7］通過長期研究提出，具核梭桿菌、伴放線放線桿菌及產黑素普雷沃菌等是牙周炎的主要致病菌。密螺旋體和牙齦卟啉單胞菌在牙周膿腫發病過程中也起著重要作用［8］。本研究結果顯示，產黑色素普雷沃菌是上海市靜安區和閘北區牙周膿腫患者厭氧菌群中的優勢菌。其他菌種沒有表現出優勢性，可能是由采樣部位與培養條件的差異所致，國內外學者多取深牙周袋內菌群為研究對象，而本實驗選取的研究對象為牙周膿血液。

甲硝唑作為口腔科常用藥物，可通過口服或局部粘膜吸收，療效顯著，但近年來隨著抗生素的濫用與細菌變異度的提高，其耐藥性呈上升趨勢。有研究［9］報道，脆弱擬桿菌群對甲硝唑耐藥的耐藥機制與菌株中含有nim和cfiA有關。nim是編碼硝基咪唑還原酶的一類基因，它可以將4/5硝基咪唑轉換還原為4/5氨基咪唑，從而抵抗亞硝基類藥物的抗菌作用［10］。cfiA是編碼金屬β－內酰胺酶的基因。另有研究［2］證實，產黑普雷沃菌株中約54.1%對β－內酰胺類藥物耐藥，接近22%對克林霉素耐藥，不到6%的菌株對甲硝唑耐藥，后者數值遠低于本研究中靜安區組結果。

Van Winkeihoff等［11］發現，在荷蘭和西班牙牙周病患者中所分離的牙周致病菌存在著耐藥性差異。西班牙人群中，較高數量的具核梭桿菌菌株對青霉素、阿莫西林和甲硝唑耐藥，中間普雷沃菌對四環素和阿莫西林耐藥較多。伴放線放線桿菌對阿莫西林和阿奇霉素耐藥較多。該研究提示，耐藥菌株的分布存在著人種和地域差異。本研究中，靜安區組和閘北區組的厭氧菌株對甲硝唑耐藥率有顯著差異，亦說明不同地區和不同醫院由于人群年齡結構比例、文化差異、用藥習慣的原因，導致厭氧菌耐藥譜不同，所以臨床經驗用藥時須根據本地區和本實驗室的藥敏譜選藥。

本研究藥敏結果顯示，所有厭氧菌對亞胺培南100%敏感；對氯霉素、頭孢西丁和頭孢美唑的敏感率亦較高，這幾類均屬強效抗生素，但因不良反應多或藥費偏高，在口腔科較少應用。

［1］曹采方，吳亞菲，吳織芬，等.牙周病學第2版［M］北京:人民衛生出版社，2003:146－148.

［2］Maestre JR，Bascones A，Sánchez P，et al.Odontogenic bacteria in periodontal disease and resistance patterns to common antibiotics used as treatment and prophylaxis in odontology in Spain［J］.Rev Esp Quimioter，2007，20（1）:61－67.

［3］路明，袁還東，張效本.80例牙周膿腫細菌培養和藥敏試驗［J］.現代口腔醫學雜志，2005，19（6）:657－657.

［4］NCCLS.Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria［S］.Approved Standard－Fifth Edition，2001，21（2）:M11－A5.

［5］Salari NH，Kadkhoda Z.Rate of cultivable subgingival periodonto pathogenic bacteria in chronic periodontitis［J］.J Oral Sci，2004，46（3）:157－161.

［6］Bruce LP，Bryan SM，Newell WJ.Periodontal diseases［C］.Seminar，2005，366（19）:1809－1820.

［7］Binnaz L，Guven K.Salivary detection of periodontopathic bacteria and periodontal health status in dental students［J］.Anaerobe，2009，15（3）:82－86.

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［9］Katsandri A，Papaparas J，Pantazatou A，et al.Two cases of infections due to multidrug－resistant Bacteroides fragilis group strains［J］.J Clin Microbiol，2006，44（9）:3465－3467.

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［11］Van Winkeihoff AJ，Herrera D，Oteo A，et al.Antimicrobial profiles of periodontal pathogens isolated from periodontitis patients in The Netherlands and Spain［J］.J Clin Periodontol，2005，32（8）:893－898.

Isolation and Identification of Anaerobes in Periodontal Abscess in Different Regions of Shanghai

CHANG

Qing1HE Junlin1YU Liying1FENG Xiping2HU Fupin31.Department of Stomatology，Huashan Hospital，Fudan University，Shanghai 200040，China；2.Department of Prophylactodontics，Ninth People’s Hospital，Shanghai Jiaotong University，Shanghai Oral Medicine Laboratory，Shanghai 200011，China；3.Institute of Antibiotics，Huashan Hospital，Fudan University，Shanghai 200040，China

Objective:To investigate the distribution of anaerobes in periodontal abscess in different regions of Shanghai and their susceptibility to antibiotics.Methods:A total of 251 samples of pus from patients with periodontal abscess（135 cases were from Jin’an district and 116 cases were from Zhabei district）during March 2008 to December 2010 were cultured with anaerobic bags，and anaerobes were then identified.Their sensitivity to antibiotics was tested by agar dilution method.Results:Anaerobes have been detected in 60.0%（81/135）of Jin’an samples and 50.4%（68/135）of Zhabei samples，and most of them were P.melaninogenica（50.4%in Jin’an and 22.4%in Zhabei）.Strains resistant to metronidazole accounted for 24.5%in Jin’an samples，significantly higher than that（8.3%）in Zhabei samples（P＜0.05）.Conclusions:P.melaninogenica was the predominant species in patients with periodontal abscess.Anaerobes became more resisitant to metronidazole.

Periodontal abscess； Anaerobe； Microbial sensitivity tests

R780.2

A

上海市重點學科建設項目（編號:S30206）；上海市科學技術委員會項目（編號:08DZ2271100）

俞立英，E－mail:wuyu1984＠hotmail.com