補充扇貝寡肽對運動大鼠骨骼肌廢用性萎縮的干預研究

郭振新

(廣東羅定職業技術學院，廣東羅定 527200)

運動員因某種原因如傷病、賽季外休整或退役等終止或負荷減量后，機體負荷部位的骨骼肌可出現不同程度的萎縮。這種去負荷后肌萎縮或廢用性肌萎縮一直是臨床醫學和運動醫學研究領域的熱點，有許多文獻報道了廢用性肌萎縮發生的機制及其對運動員競技能力的影響［1，2］。據文獻，目前從營養干預的角度研究運動員停訓后肌萎縮的研究報道尚為鮮見。本實驗研究補充扇貝寡肽對骨骼肌廢用性萎縮的影響，為探討運動員停訓后肌萎縮的機制及其干預研究提供參考。

1 研究材料與方法

1.1 實驗對象與分組

40只雄性、健康Sprague－Dawley大鼠，體重160～180g，在實驗室適應性喂養3天后即進行為期3周的遞增負荷運動，然后隨機抽取大鼠為基礎對照A組(n=10)，其余大鼠為B組用于制備骨骼肌萎縮模型，3周后隨機分組為補充扇貝寡肽實驗B1組(n=10)、補充安慰劑陰性對照B2組(n=10)、補充牛乳陽性對照B3組(n=10)。各組動物體重無顯著性差異，大鼠分籠飼養。實驗室溫控制在(22±3)℃，相對濕度為50% ～60%，用日光燈控制晝夜節律為12h light/12h dark。

1.2 研究方法

1.2.1 動物運動模型

大鼠在實驗室適應性喂養期間，每天均進行一次適應性的水平跑臺運動，速度為5～10m/min，時間為5～10min。正式訓練時，大鼠在跑臺上進行遞增負荷的跑臺運動，速度遞增3m/min/week、運動時間遞增30min/week，即第1周速度為15m/min，運動時間為30min;第2周速度為18m/min，運動時間為60min;第3周速度為21m/min，時間為90min。大鼠每周訓練6d，休息 1d，共 3 week。

1.2.2 停訓綜合癥動物模型

遞增負荷運動3周后，大鼠隨機分為安靜對照A組(n=10)和制動B組(n=30)，B組大鼠左側后肢用可塑性石膏由足跖管型固定至膝上1 cm處，膝關節固定于屈曲位100°，踝關節固定于跖屈60°，以便小腿的肌肉保持于松弛位，共3周。每日檢查固定情況，如發現大鼠啃咬或出現固定松動，則隨時進行調整或重新固定以保證制動效果。

1.2.3 動物營養干預模型

制動3周后，B組大鼠即解除制動處理，并隨機分為3組即B1(n=10)、B2(n=10)、B3(n=10)。B1組大鼠灌胃15%的扇貝寡肽飲料2ml(其中含扇貝肽0.3g)，1次/日;B2組灌胃等量的純凈水，B3組大鼠灌胃等量的牛乳為對照。A組大鼠在試驗期間灌胃等量的純凈水。扇貝寡肽(scallop peptides，SPs)是從海洋生物櫛孔扇貝中提取并經酶解后獲得的一種具有高生物活性的水溶性8肽(Pro－Asn－Ser－Thr－Arg－Hyl－Cys－Gly)，相對分子量為879D。

1.2.4 標本取材與指標測試

1.2.4.1 標本取材

大鼠在為期3周的營養干預后，用25%烏拉坦溶液腹腔注射麻醉，腹主動脈取血5～8 ml，常溫靜置1h后離心(3000rpm，常溫)，血清分離后－20℃保存待測;同時取雙側腓腸肌，剔除筋膜等、4℃生理鹽水清洗、吸干后稱濕重，計算固定側肌肉與對側的濕重比;固定側腓腸肌一半肌組織于液氮中凍存待測、另一半肌組織迅速置于10%甲醛溶液中固定，制作石蠟切片。

1.2.4.2 光鏡下腓腸肌肌纖維直徑和截面積測定

腓腸肌石蠟切片常規HE染色，每只大鼠觀察2張切片，在BX50F－3奧林巴斯系統顯微鏡下，每張切片中隨機5個高倍視野下，用Med6.0顯微圖像分析系統(Med6.0A分析軟件)采集圖像，測量橫切片中肌纖維的直徑和截面積。

1.2.4.3 細胞凋亡TUNEL法測定凋亡細胞

切片常規脫蠟至水;PBS沖洗5min×3;蛋白酶K(20μg/ml溶于10Mm Tris/HCL中，PH7.4)室溫孵育20min;PBS沖洗5min×3;滴加50μl TUNEL反應混合液，37℃孵育 60min;PBS沖洗 5min×3;滴加 50μl TUNEL過氧化物酶標抗體，37℃孵育30min;PBS沖洗5min×3;滴加DAB底物溶液，室溫孵育5－20min，顯微鏡下控制顯色;雙蒸水洗;脫水、透明、封片、顯微鏡下觀察細胞核有棕黃染色顆粒者為凋亡細胞。每只大鼠觀察2張切片，每張切片計量5個高倍視野中凋亡細胞占總細胞得百分數，即凋亡指數(Apoptosis Index，AI)。并用圖像分析系統測試凋亡細胞光密度值。

1.2.4.4 凋亡相關蛋白Bax和Bcl－2免疫組化測定

切片常規脫蠟至水自來水沖洗、3%H2O2室溫孵育10 min微波修復抗原常溫冷卻后PBS沖洗5min×310%山羊血清室溫孵育10 min滴加1抗50μl(Bax、Bcl－2，1:50)置4℃冰箱過夜常溫后PBS沖洗5min×3滴加2抗，37℃孵育30min(烤片)PBS沖洗5min×3 DAB顯色4－5min雙蒸水洗脫水、透明、封片、顯微鏡下觀察。光學顯微鏡高倍視野下，隨機選取5個區域，用圖像分析系統對每一區域進行光密度分析，分別測試凋亡相關蛋白Bax和Bcl－2。

1.2.4.5 腓腸肌收縮蛋白表達測定

用免疫組織化學(SABC法)檢測肌球蛋白的表達。肌球蛋白的表達檢測步驟:石蠟切片脫蠟至水;PBS(pH 7.4)沖洗3次，5min×3，3%H2O2室溫孵育5～10min，以消除內源性過氧化物酶的活性，蒸餾水沖洗2×3min，PBS浸泡5min，微波抗原熱修復，5～10%正常山羊血清封閉，室溫孵育10min，傾去血清，勿洗，鼠抗骨骼肌肌球蛋白(Myosin)抗體(1:50)，4℃過夜PBS沖洗，5min×3次 Biotin－Goat Anti－Mouse IgG，37℃ 20minPBS沖洗，5min×3次試劑 SABC，37℃20minPBS沖洗，5min×3次DAB顯色自來水充分沖洗蘇木素輕度復染封片。

1.2.4.6 腓腸肌細胞需鈣蛋白水解酶(Calpain)活性測定

取約30mg肌組織以1:10(W/V)加入勻漿緩沖液 LSB(2mM EDTA，2mM EGTA，1mM DTT，1mM PMSF，20mM pH7.4Tris)勻漿勻漿液低溫離心，20000rpm，12min取上清液上清液加入固體硫酸銨，成65%飽和液，用Tris堿調pH為7.4上清液低溫中放置45min，不停攪動低溫離心，20000rpm，12min棄上清，沉淀重新懸浮于LSB中(初始肌肉質量的0.5倍體積)裝入透析袋懸于40倍體積LSB的燒杯中，透析24h，間隔2h換液，共換4次蛋白懸浮液1:1加入反應液(2mg/ml casein，5mM DTT，20mM pH7.4Tris，5mM CaCl2)37℃水浴，30min等體積冰三氯乙酸(5%)終止反應常溫離心，4000rpm，10min取上清液用紫外分光光度計280nm測吸光度。

1.2.5 主要實驗試劑

Bax鼠單克隆抗體IgG(BA0315)、Bcl－2鼠單克隆抗體IgG(BA0412)、TUNEL試劑盒均購自武漢博士德生物工程有限公司，鼠抗骨骼肌肌球蛋白單克隆抗體(Code No.MAB －0124，Maixin Bio Co)，工作液稀釋度為1:50;Biotin－Goat Anti－Mouse IgG(Code No.SP KIT－C4，Maixin Bio Co)，其他試劑購自南京建成生物技術有限公司。

1.3 實驗結果統計分析

實驗結果用“平均數±標準差”表示，用SPSS for Windows 12統計軟件對所有數據進行統計處理。運用T－test進行各組間數據的比較分析，以P＜0.05表示顯著差異。

2 實驗結果

2.1 停訓后大鼠口服扇貝肽飲料后骨骼肌形態指標的變化

本實驗光鏡下觀測腓腸肌組織HE切片，發現停訓后大鼠補充安慰劑(B2)組處置側骨骼肌細胞直徑減小，多角形狀消失，細胞間隙增大，符合萎縮肌細胞的形態學特征，說明大鼠制動模擬停訓即可建立骨骼肌萎縮的大鼠模型。補充牛乳(B3)組大鼠腓腸肌細胞形態多角形態尚未完全恢復，細胞間隙比A組和B1組增大，比B2組減小，雖然呈現萎縮的形態學改變，但比B2組略有減輕的趨勢改變。而補充扇貝寡肽(B1)組大鼠腓腸肌細胞形態與B2、B3比較，基本恢復正常(A)組的多角形態特征，但細胞間隙恢復未見顯著變化，說明補充扇貝寡肽可明顯促進萎縮骨骼肌細胞形態的恢復。

如表1所示，本實驗發現，與A組比較，B1、B2、B3組大鼠腓腸肌濕重比分別減低了9.9%(P＞0.05)、35.2%(P＜0.05)、28.9%(P＜0.05);與 B2組比較，A、B1、B3組大鼠腓腸肌濕重比分別增加了54.4%(P＜0.05)、39.1%(P ＜0.05)、9.8%(P ＞0.05);與 B3組比較，A、B1、B2組大鼠腓腸肌濕重比分別增加了40.7%(P＜0.05)、26.7%(P＜0.05)、－8.9%(P＞0.05)。與A組比較，B1、B2、B3組大鼠腓腸纖維直徑分別減小 13.2%(P＜0.05)、39.7%(P＜0.05)、30.1%(P＜0.05);與 B2組比較，A、B1、B3組大鼠腓腸肌纖維直徑分別增加65.9%(P＜0.05)、43.9%(P＜0.05)、15.9%(P ＜0.05);與 B3 組比較，A、B1、B2組大鼠腓腸肌纖維直徑分別增加43.2%(P＜0.05)、24.2%(P＜0.05)、－13.7%(P＞0.05)。與 A組比較，B1、B2、B3組大鼠腓腸纖維截面積分別減小17.8%(P ＜0.05)、46.8%(P ＜0.05)、44.3%(P ＜0.05);與B2組比較，A、B1、B3組大鼠腓腸肌纖維截面積分別增加87.9%(P＜0.05)、54.6%(P＜0.05)、4.7%(P＞0.05);與B3組比較，A、B1、B2組大鼠腓腸肌纖維截面積分別增加79.5%(P＜0.05)、47.6%(P＜0.05)、－4.5%(P＞0.05)。

表1 各組大鼠腓腸肌濕重和形態指標的比較

以上結果表明，實驗組大鼠口服扇貝寡肽3周后，大鼠腓腸肌質量的損失顯著減少，萎縮肌肉的形態學變化得到改善。

2.2 補充扇貝肽對停訓后大鼠骨骼肌凋亡細胞指數的影響

如表2、圖1～4所示，本實驗發現，A組大鼠腓腸肌組織切片凋亡細胞核TUNEL陰性，與A組比均有顯著差異。與B2組比較，B1、B3組AI平均分別減低92.0%(P＜0.05)和73.2%(P＜0.05);與 B3組比較，B1組AI平均減低74.0%(P＜0.05)、B2組AI平均則增加3.3倍(P＜0.05);與B2組比較，B1、B3組凋亡細胞OD值分別減低7.5倍(P＜0.05)、2.4倍(P＜0.05)，與B3組比較，B1組凋亡細胞OD值減低3.1倍(P＜0.05)、B2組凋亡細胞OD值則增加2.4倍(P＜0.05)。說明骨骼肌廢用性萎縮過程中，骨骼肌細胞凋亡指數明顯增加，而補充扇貝寡肽可顯著減低骨骼肌細胞凋亡指數。

表2 各組大鼠腓腸肌凋亡細胞的比較

圖1 A組腓腸肌組織TUNEL染色(橫切，40×)

圖2 B1組腓腸肌組織TUNEL染色(橫切，40×)

圖3 B2組腓腸肌組織TUNEL染色(橫切，40×)

圖4 B3組腓腸肌組織TUNEL染色(橫切，40×)

2.3 補充扇貝肽對停訓后大鼠骨骼肌凋亡蛋白Bax和Bcl－2的影響

如表3所示，本實驗發現，與A組比較，B1、B2、B3組大鼠腓腸肌凋亡蛋白Bax光密度值分別增加6.3倍(P＜0.05)、46.2倍(P＜0.05)、19.2倍(P＜0.05);而Bcl－2光密度值分別增加19.4倍(P＜0.05)、1.5倍(P＜0.05)、7.9倍(P＜0.05);Bax/Bcl－2比值分別增加0.3倍(P＞0.05)、30.6倍(P＜0.05)、2.4倍(P＜0.05)。與B2組比較，B1、B3組大鼠腓腸肌凋亡蛋白Bax光密度值分別分別減低7.3倍(P＜0.05)、2.4倍(P＜0.05);而Bcl－2光密度值分別增加12.8倍(P＜0.05)、5.2倍(P＜0.05);Bax/Bcl－2比值分別減低94.0倍(P＜0.05)、12.5倍(P＜0.05)。與B3組比較，B1、B2組大鼠腓腸肌凋亡蛋白Bax光密度值分別分別增加0.3倍(P＞0.05)、2.4倍(P＜0.05);而Bcl－2光密度值分別增加2.5倍(P＜0.05)、0.2倍(P＞0.05);Bax/Bcl－2比值分別增加0.1倍(P＞0.05)、12.5倍(P＜0.05)。說明骨骼肌萎縮過程中凋亡蛋白Bax表達明顯增加、Bcl－2表達明顯減低，Bax/Bcl－2比值顯著增加;而補充扇貝寡肽后明顯抑制Bax蛋白的表達，促進Bcl－2蛋白的表達。

表3 各組大鼠腓腸肌凋亡蛋白Bax和Bcl－2表達的比較(OD值)

2.4 補充扇貝肽對停訓后大鼠骨骼肌細胞Calpain總活性及肌球蛋白表達的影響

如表3所示，本實驗發現，與A組比較，B1、B2、B3組大鼠腓腸肌肌球蛋白OD值分別減少14.29%(P＜0.05)、42.86%(P ＜0.05)、33.93%(P ＜0.05)，Calpain總活性分別增加12.16%(P＜0.05)、155.41%(P＜0.05)、112.16%(P＜0.05)。與 B2 組比較，B1、B3組大鼠腓腸肌肌球蛋白OD值分別增加50.00%(P＜0.05)、15.63%(P ＜0.05)，Calpain活性分別減低56.08%(P＜0.05)、16.93%(P＜0.05)。與 B3組比較，B1組大鼠腓腸肌肌球蛋白OD值增加29.73%(P＜0.05)、Calpain活性減低47.13%(P＜0.05)，B2組肌球蛋白OD值減低13.51%(P＜0.05)、Calpain活性增加20.38%(P＜0.05)。以上結果表明大鼠制動致腓腸肌發生萎縮后，肌細胞內鈣水解蛋白酶的活性明顯增加，肌球蛋白表達量顯著減低，而大鼠口服扇貝寡肽飲料3周后肌細胞內鈣水解蛋白酶的活性被抑制，從而肌球蛋白水解減少。

表4 各組大鼠腓腸肌Calpain總活性及肌球蛋白表達的比較

3 分析與討論

從文獻看，有關骨骼肌廢用性萎縮發生的機制與調控研究目前十分活躍，但報道的研究結果尚未一致。較為一致的結論認為萎縮肌肉蛋白質分解代謝增加、合成代謝減少，而調節蛋白質代謝的細胞信號通路尚未清楚。有研究報道與氧化應激相關的細胞信號通路，導致骨骼肌蛋白質的損失［3，4］。Allen 等［5］研究發現大鼠骨骼肌萎縮過程中，肌細胞的確發生程序性死亡。因此，有關骨骼肌廢用性萎縮機制研究結果的不確定影響運動員停訓后肌萎縮的治療。

關于研究廢用性肌肉萎縮的實驗動物模型很多，文獻報道比較多見的模型有大鼠吊尾模型、制動模型、去神經肌肉模型等，其中以固定動物肢體制動為研究廢用性肌萎縮的實驗動物模型方法簡單，操作方便，損傷較小，而且效果可靠，目前已廣泛地應用于廢用性肌萎縮的研究。本研究采用石膏固定大鼠左側后肢3周造停訓模型，結果發現停訓后大鼠補充安慰劑組處置側骨骼肌細胞直徑減小，多角形狀消失，細胞間隙增大，符合萎縮肌細胞的形態學特征，而且試驗中發現大鼠萎縮腓腸肌濕重比、纖維直徑和截面積均顯著減低(P＜0.05)，說明制動3周后骨骼肌即產生廢用性萎縮，本實驗所造動物模型可以實現本研究目的。

Kerr等［6］研究發現，機體細胞死亡存在兩種形式，一種為細胞壞死(necrosis)，另一種為程序性細胞死亡(programmed cell death，PCD)。所謂程序性細胞死亡是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結束其生命的生理性死亡。這種細胞死亡現在普遍稱之為細胞凋亡(Apoptosis)。盡管細胞凋亡的機制目前尚未完全清楚，但是，凋亡過多或過少均可引發一些病理過程，并與許多疾病的發生、發展密切相關。

細胞凋亡的調節機制十分復雜，是受基因調控的精確過程，這些調節基因包括Caspase家族、BcL－2家族、P53基因、C －myc、NF－κB、FasL/Fas途徑及TNF/TNFR途徑等，其中Bcl－2蛋白家族成員在細胞凋亡中發揮重要作用。通常，Bcl－2家族分為兩類，一類Bcl－2家族是發揮抗凋亡作用的蛋白質，如Bcl－2、Bcl－ XL、Bcl－ W、Mcl－1(myeloid cell leukemia－1)、CED9等;而另一類Bcl－2家族是促進細胞死亡的蛋白質，如 Bax、Bak、Bcl－ XS、Bad、Bik、Bid 等。Bcl－2和Bax作為功能基因則在細胞凋亡過程中起關鍵作用，因此，有研究報道細胞凋亡的調控與Bcl－2和Bax蛋白水平高低存在相關［7］。

本研究發現骨骼肌廢用性萎縮過程中，骨骼肌細胞凋亡指數明顯增加，凋亡蛋白Bax表達明顯增加，Bcl－2表達明顯減低，Bax/Bcl－2比值顯著增加。該結果表明細胞凋亡基因Bax、Bcl－2參與大鼠停訓后骨骼肌廢用性萎縮的調節過程。支持本實驗結果的有Schmalbruch研究［8］發現肌萎縮時有NK細胞和巨噬細胞聚集，肌肉細胞凋亡現象伴隨NK細胞而發生。有研究報道，后肢懸吊大鼠肌肉萎縮過程中，肌肉細胞出現程序性死亡［5］。Tews等［9］研究發現大鼠肌肉細胞的存活與肌細胞表達Bcl－2相關，同時，肌細胞表達Bcl－2可對抗bax的作用。隨后Tews研究證實骨骼肌萎縮機制中細胞凋亡產生重要作用［10］。汪寶軍等［11］研究發現，失神經骨骼肌萎縮與肌細胞凋亡有關，Fas基因的表達水平升高，Bcl－2的表達量減少在骨骼肌細胞凋亡的機制中發揮重要作用。王東等的研究有相同的發現［12］。

Calpains是廣泛存在于機體細胞質中的Ca2+依賴性中性蛋白酶，可被去負荷、不同濃度的Ca2+激活。Calpain家族的底物眾多，包括多種骨骼肌結構蛋白和參與細胞內信號轉導的激酶及磷酸化酶等功能蛋白，在細胞內發揮多種作用如細胞運動、細胞周期調節、基因表達調節及細胞凋亡等。許多因素如細胞膜損傷、氧化應激、缺血、缺氧等，均可引起肌細胞內Ca2+濃度升高，活化 Calpain［13］。本實驗發現，萎縮骨骼肌組織Calpain總活性顯著增高，骨骼肌收縮蛋白成分之一的肌球蛋白的表達量明顯減低，說明在廢用性骨骼肌萎縮過程中肌組織中蛋白水解酶Calpain活性增高，而收縮蛋白正是其作用底物，因此，Calpain活化、水解骨骼肌收縮蛋白也是導致廢用性骨骼肌萎縮發生的重要機制之一。此外，有研究發現Bcl－2家族中許多成員都是 calpain的底物［14］。因此，在calpain家族與caspase家族之間存在一種交互作用(crosstalk)。但是，Calpains對細胞凋亡調節基因產物的具體調節機制尚不明了，尚需進一步研究。

目前，有關廢用性骨骼肌萎縮的治療主要有運動療法、物理治療、藥物治療以及基因治療。從有關藥物治療的研究文獻分析，目前報道主要有使用促蛋白質合成的激素類藥物(如生長激素、甲狀腺素、類固醇等)［15］，IGF －1 以及人參、川芍、丹參、黃茂等活血滋補類中藥［11，16］及銀杏葉提取物等［17］。但是，使用的促合成類激素、生長激素、IGF－1等治療肌萎縮對運動員來說是被禁止使用的。而從營養學的角度干預運動員停訓后肌萎縮的研究報道尚為鮮見。

扇貝寡肽(scallop peptides，SPs)是從海洋生物櫛孔扇貝中提取并經酶解后獲得的一種具有生物活性的短肽(Pro－Asn－Ser－Thr－Arg－Hyl－Cys－Gly)，具有抗氧化應激損傷作用和細胞免疫調節等作用。寡肽的生物活性與構成肽片段的氨基酸有著密切關系，通常，肽片段中富含 Tye、Trp、Met、Lys、Cys 和 His等氨基酸的寡肽具有較強的抵御自由基攻擊的生物活性。而一些含His的寡肽能通過鰲合過渡金屬離子起到抵御自由基攻擊的作用，現His上有α－氨基、梭基和活性側鏈基團咪唑基，α－氨基和梭基與金屬離子可形成五元環，α－氨基和咪唑基與金屬離子可形成六元環，梭基和咪哇基與金屬離子可形成七元環，具有供氫能力的Tyr將氫原子給自由基后，自身形成自由基中間體，借助共振求得穩定，導致自由基鏈反應減慢或終止。此外，除了構成肽片段的一些特定氨基酸外，寡肽的氨基酸序列、分子量、底物因素等均可影響寡肽的抗氧化活性。

本研究補充扇貝寡肽后可顯著減低骨骼肌細胞凋亡指數，明顯抑制Bax蛋白的表達，促進Bcl－2蛋白的表達，通過影響肌細胞凋亡過程促進萎縮肌康復。補充扇貝肽可顯著減低萎縮骨骼肌細胞Calpain總活性、增加肌球蛋白的表達、顯著減低肌肉質量的損失和促進萎縮骨骼肌形態學變化的恢復。分析其原因，可能是具有高生物活性的扇貝肽抑制了調節骨骼肌代謝有關酶的活性如Calpain，從而抑制肌肉蛋白質分解代謝、促進合成代謝?？赡芡ㄟ^影響骨骼肌細胞凋亡過程干預骨骼肌廢用性萎縮的發生和發展。張海祥研究［18］觀察三種營養補劑(氯化膽堿、氯化膽堿+復合維生素以及胞磷膽堿)對后肢去負荷大鼠比目魚肌形態與功能的影響，發現后肢去負荷能導致骨骼肌在肌肉形態、肌纖維類型和肌肉功能等方面發生明顯的廢用性萎縮，補充一定劑量的營養補劑后可以減緩這種肌萎縮的發生發展，尤其以氯化膽堿的效果較為突出。韓春山研究［19］報道補充扇貝肽可有效地保護線粒體膜，穩定線粒體膜電位，進而抑制活性氧的產生，降低胞漿游離鈣濃度，上調Bcl－2蛋白表達，下調Bax蛋白的表達，拮抗60Co輻射誘導的淋巴細胞凋亡。

海洋生物蛋白質因其多肽鏈的一級結構與陸地生物蛋白質存在很大的差異。同時，海洋生物蛋白質的種類和數量都遠遠大于陸地蛋白質。因此，種類繁多的海洋生物蛋白質在其多肽鏈中，可能存在著許多具有生物活性的肽片段。隨著對扇貝寡肽研究的不斷深入，其生物活性和生理、藥理功效將逐漸明確，并可能成為研究開發治療骨骼肌廢用性萎縮的海洋藥物資源。

4 小結

在本實驗中，固定大鼠左側后肢3周后可導致骨骼肌廢用性萎縮，廢用性肌萎縮的發生、發展與Cal-pain活性升高、水解骨骼肌收縮蛋白有關，而且，骨骼肌細胞凋亡增加在廢用性肌萎縮的發生發展過程中產生重要作用。而補充扇貝寡肽可顯著減低骨骼肌細胞凋亡指數，明顯抑制骨骼肌Bax蛋白的表達、促進Bcl－2蛋白的表達，抑制Calpain活性，減少收縮蛋白的降解，維持肌球蛋白結構的完整，從而干預肌萎縮的進程。

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