鹽酸特比萘芬乳膏含量測定的方法研究

占海燕，陳麗華，余斌，胡茂榮，姜淑珍

(1、江西省精神病院，江西南昌330029；2、江西中醫藥大學，江西南昌330006)

鹽酸特比萘芬乳膏含量測定的方法研究

占海燕1，陳麗華2，余斌1，胡茂榮1，姜淑珍1

(1、江西省精神病院，江西南昌330029；2、江西中醫藥大學，江西南昌330006)

目的建立HPLC法測定鹽酸特比萘芬乳膏含量的方法。方法采用Hypersil ODS2 C18柱；以甲醇-pH為7.5醋酸三乙胺溶液為流動相，梯度洗脫進行液相色譜分離，流速為1.0m l/min；檢測波長為280 nm；柱溫40℃。結果鹽酸特比萘芬在8.4～168.0μg/m l與峰面積呈良好的線性關系(r=0.9998)；平均回收率為99.13%，RSD為1.6%。結論本HPLC法簡單、快捷、準確，可作為鹽酸特比萘芬乳膏的質量控制方法。

高效液相色譜法;鹽酸特比萘芬;乳膏;質量檢測

鹽酸特比萘芬(terbinafine hydrochloride)是丙烯胺類廣譜抗真菌藥，對皮膚癬菌，酵母菌、霉菌和一些雙相真菌均有顯著的殺菌活性，通常制成1%的乳膏，可以皮膚給藥達到局部治療目的[1]。國家藥品標準[2]和美國藥典第32版[3]均對鹽酸特比萘芬乳膏的含量進行了控制。本文通過進一步完善，采用反相高效液相色譜法梯度洗脫對其含量進行測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器BP211D Sartorius電子天平(北京賽多利斯科學儀器有限公司)；Agilent 1200高效液相色譜儀(美國安捷倫科技有限公司)；SZ-93自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)；PHS-3C型pH計(上海雷磁儀器廠)；超聲儀(上?？茖С晝x器有限公司)。

1.2 試藥甲醇色譜純(Tedia，US)；鹽酸特比萘酚(純度99.6%，中國藥品生物制品檢定所，批號：100563-200301)；鹽酸特比萘酚乳膏(自制，批號：100301，100302，100303)；雙蒸水(自動雙重純水蒸餾器制得)；異丙醇(上海國藥集團試劑有限公司)；冰醋酸(上海國藥集團試劑有限公司)；三乙胺(上海金山亭新化工試劑廠)；無水乙醇(上海國藥集團化學試劑有限公司)；氯化鈉(上海國藥集團試劑有限公司)；磷酸二氫鉀(廣東汕頭隴西化工廠)；磷酸氫二鉀(廣東汕頭隴西化工廠)；氫氧化鈉(天津市福晨化學試劑廠)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件色譜柱：Hypersil ODS2 C18柱(250mm×4.6mm，5μm大連依利特有限公司)；以甲醇-pH為7.5醋酸三乙胺溶液為流動相，梯度洗脫，0～4min，90%甲醇溶液；4～11 min，甲醇溶液比例從90%降至85%；11～14 min，甲醇溶液比例從85%升至95%；流速為1.0 ml/min；檢測波長為280 nm；柱溫40℃；進樣量為20μl。色譜圖見圖1。

2.2 線性關系考察

2.2.1 對照品溶液的制備精密稱取鹽酸特比萘芬對照品適量，至100m l容量瓶中，流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，使其為84μg/m l。

圖1 鹽酸特比萘芬HPLC色譜圖

2.2.2 供試品溶液的制備取鹽酸特比萘芬乳膏約1.0 g，精密穩定，置50 m l的量瓶中，加流動相40 m l，超聲處理使乳膏溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻，取出，迅速過濾，放至室溫，作為供試品溶液。

2.2.3 線性關系考察精密量取上述對照品溶液0.5，1，2，4，8，10m l置于10 m l容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，使其濃度為4.2，8.4，16.8，33.6，67.2，84.0μg/m l的對照品溶液，分別吸取20μl，注入液相色譜儀。以對照品濃度C (μg/m l)為橫坐標，以峰面積(A)為縱坐標，繪制標準曲線方程為A=0.234C+0.3409，r=0.9998，表明鹽酸特比萘芬的濃度在8.4～168.0μg/m l，峰面積與濃度呈良好的線性關系。

2.3 最低檢測限考察[4]按照2010版藥典規定方法進行最低檢測限的測定，以得到信噪比為3的濃度作為檢測限，結果顯示鹽酸特比萘芬的最低檢測限為0.042μg/ml。

2.4 精密度考察取濃度為67.2μg/m l的對照品溶液，連續進樣6次，記錄色譜圖，峰面積RSD值為1.80%。結果表明，該方法精密度良好。

2.5 穩定性考察精密稱取鹽酸特比萘芬乳膏約1.0g，置50 m l的容量瓶中，加流動相40 ml，超聲處理使鹽酸特比萘芬乳膏溶解，放至室溫，加流動相稀釋至刻度，作為供試品溶液。取20μl分別于0，2，4，6，8，10，12 h后注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察鹽酸特比萘芬乳膏樣品溶液的穩定性，結果峰面積RSD為0.89%，表明鹽酸特比萘芬在12 h之內穩定性良好。

2.6 重復性試驗取同一批號樣品6份，按“2.2.2”項下方法制備供試品液。分別精密量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，考察鹽酸特比萘芬乳膏樣品溶液含量，6次測定值的RSD為3.5%，表明本法重復性良好。

2.7 回收率試驗取鹽酸特比萘芬原料藥約0.8，1.0，1.2 g，精密稱定，按鹽酸特比萘芬乳膏的處方和制法制成三個不同濃度的樣品各三個，每個樣品共制100g。取上述樣品9個樣品各1.0g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品液，按“2.1”項下的色譜條件進行測定，按外標法以平均峰面積計算含量并計算回收率，結果平均回收率為99.13%，RSD為1.6%(n=9)，表明該方法準確可靠。

2.8 樣品的測定取3批鹽酸特比萘芬乳膏，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl進樣，注入液相色譜儀，按外標一點法計算供試品中鹽酸特比萘芬的含量。測定結果見表1。

表1 三批樣品中鹽酸特比萘芬含量測定結果(n=3)

3 討論

根據美國藥典USP32-NF27建立色譜條件進行檢測，鹽酸特比萘芬的出峰時間為23min，時間較長，經優化比例，得到檢測鹽酸特比萘芬的色譜條件，其出峰時間大大縮短為7.5 min。本方法準確、簡便、重復性好、快速，可用于其質量控制。

參考國家藥品標準，預試驗分別采用異丙醇與流動相做提取溶劑，對提取溶劑進行考察，未發現明顯差異。

[1]李慎秋,陳映玲,陳春梅,等.特比萘芬軟膏治療淺部真菌病的臨床觀察[J].同濟醫科大學學報,1997,26(6):494.

[2]國家食品藥品監督管理局.國家藥品標準[S].WS1-(X-115)-2004Z.

[3]美國藥典委員會.美國藥典[S].USP32-NF27，2012:3677.

[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].北京：化學工業出版物,2010:194.

Study on determ ination of terbinafine hydrochloride in crem or by high performance liquid chromatography

ZHAN Haiyan,CHEN Lihua,YU Bin,etal.JiangxiMental Hospital,Nanchang 330006,China

ObjectiveTo develop an effective HPLCmethod for determining the content of terbinafine hydrochloride in cremor.M ethodsThe separation was achieved by using a Hypersil ODS2 C18 column and a gradient elution with themobile phase ofmethanol and acetic acid-triethylamine(pH7.5).The flow rate was 1.0 m l/m in and the column temperature was 40℃.The detection wave length was at 280 nm.The content was quantified by an external standard method.ResultsThe terbinafine hydrochloride in the range of 8.4～168.0μg/m l has a good linear relationship with the peak area(r=0.9998).The average recovery rate was 99.13%,and the RSD was 1.6%.ConclusionThe HPLC method is simp le,rapid and accurate.It can be used as the quality controlmethod for detection of the contentof terbinafine hydrochloride in cremor.

HPLC;Terbinafine hydrochloride;Cremor;Quality examination

R927.2,R978.5,R379,R756

A

1674-1129(2013)05-0465-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.023

占海燕，女，1972年9月出生，畢業于江西中醫藥大學，副主任中藥師，研究方向為臨床藥學。

陳麗華，女，1972年3月出生，博士，碩導，教授，江西中醫藥大學現代中藥制劑教育部重點實驗室，研究方向為中藥新劑型與新技術。