全媛,王平平
(泰州市第二人民醫院檢驗科,江蘇泰州225500)
兩種定量檢測D-二聚體方法的比較
全媛,王平平
(泰州市第二人民醫院檢驗科,江蘇泰州225500)
D-二聚體;檢測;方法比較
D-二聚體(D-dimer,D-D)是反映已交聯的纖維蛋白被纖溶酶降解的特異性分子標記物,是血栓性疾病的唯一標記物,它能有效地確定有無穩定的纖維蛋白存在。它的生成或增高反應了凝血和纖溶系統的激活,其血漿中的水平可代表體內凝血酶的活性及纖維蛋白的生成情況,可以作為體內血栓形成的指標之一[1]。近年來,定量檢測D-二聚體含量已成為排查深靜脈血栓(DVT)、肺栓塞(PE)、彌散性血管內凝血(DIC)等血栓性疾病的重要手段之一,并作為溶血栓治療的動態監測指標[2]。但是不同的檢測方法D-二聚體結果通常不一致
[3],現將本院兩種檢測D-二聚體的方法進行比較,結果如下。
1.1 儀器與試劑
1.1.1 免疫比濁法采用美國IL公司ACL-9000全自動血凝儀及其配套D-D檢測試劑。
1.1.2 VIDAS測D-D:采用法國生物梅里埃D-D檢測試劑,在VIDAS儀器按操作說明進行檢測。
1.2 標本
1.2.1 質控品IL公司提供的正常及高值質控血漿。
1.2.2 血樣隨機抽取住院及門診患者共100例,采集新鮮全血用109mmol/L枸櫞酸鈉1:9抗凝,3000r/min離心10min,分離血漿,3h內完成檢測。
1.3 試驗原理
1.3.1 免疫比濁法的原理樣品中的D-二聚體分子與包被有高特異性D-二聚體克隆抗體的乳膠顆粒結合后,乳膠顆粒發生凝集,在405nm檢測透光強度變化,凝集程度與樣本中的D-二聚體含量成正比。
1.3.2 VIDAS測D-D原理:是一種定量全自動ELISA法,將兩步的免疫夾心法與最后的熒光檢測結合起來,利用現成的單劑量試劑和分析儀中儲存的校準系統,對單份樣品進行檢測。
1.4 方法
1.4.1 重復性實驗(批內精密度)根據CLSI的EP5-A2文件[4]對于精密度評價的要求,分別在ACL-9000血凝儀和VIDAS測定正常及高值水平血漿D-D含量,3h內各水平測試20次,計算均值(x)、標準差(s)、變異系數(CV)。
1.4.2 穩定性實驗(批間精密度)按上述方法分別測定正常及高值質控血漿D-D含量,每天1次,連續測定20天,計算均值(x)、標準差(s)、變異系數(CV)。
1.4.3 比對實驗根據CLSIEP9-A2文件[5],選取隨機的住院及門診病人新鮮全血標本100例,采用上述兩種方法平行檢測D-D含量,最后對檢測結果進行相關性分析。
1.5 統計學方法用SPSS17.0統計軟件進行相關性分析。
表1 D-D批內及批間精密度測定結果
2.1 重復性與穩定性比濁法和VIDAS法的重復性與穩定結果見表1,可見VIDAS法的重復性與穩定要優于比濁法。
2.2 比對實驗將檢測結果作回歸曲線,得到免疫比濁法與VIDAS比對結果的回歸方程:y=0.873x+ 46.485,相關系數r=0.981。根據CLSI文件要求(r>0.975),可見兩種方法相關性理想。
血漿D-D是纖溶酶水解蛋白形成的降解產物之一,為繼發性纖溶所特有的代謝物,是血栓已形成并被溶解的直接證據。但D-D測定受很多因素的影響,只要機體血管內有血栓形成及纖維溶解活動,D-D含量就升高。
根據上述實驗結果,兩種定量檢測方法均有準確、快速、簡便的特點,尤其VIDAS法具有更高的檢測靈敏度和精密度,避免了連續加樣的偶然誤差,重復性和穩定性要優于免疫比濁法。但是,VIDAS測定一個標本需一個試劑條,一個批次檢測標本量不多,免疫比濁法一個批次檢測標本量比較大,對于標本量大的醫院來說,免疫比濁法更加快速,簡便。不同檢測法雖然使用的抗體不同,識別的抗原不同,但比對實驗結果表明,兩種方法相關性較好。因此,選擇哪一種D-D檢測方法需各實驗室根據自身具體情況決定。
[1]傅應裕,陳小華,秦光明.乳膠增強免疫比濁法檢測D-二聚體水平的方法學評價[J].實驗與檢驗醫學,2005,10(5):441-442.
[2]郭雪梅,王鴻利.快速D-二聚體檢測在診斷靜脈血栓形成中的應用進展[J].中國實驗診斷學,2000,4(1):41-43.
[3]師偉,張國富.D-二聚體研究進展.實用醫技雜志,2010,17(11):1031-1033.
[4]NCCLS.Evaluation of Performance of Quantitative Measurement Methods;Approved Guideline-Second Edition.NCCLS document EP5-A2[S].NCCLS,940 West Valley Road,Suite 1400,Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA,2004.
[5]NCCLS.Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline-Second Edition.NCCLS document EP9-A2[S].NCCLS,940 West Valley Road,Suite 1400,Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA,2002.
R446.62,R364.1+5
B
1674-1129(2013)05-0504-02
10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.043