HPLC測定整腸正氣丸中和厚樸酚及厚樸酚的含量

陳玉秀

(湖南食品藥品職業學院，湖南 長沙 410014)

HPLC測定整腸正氣丸中和厚樸酚及厚樸酚的含量

陳玉秀

(湖南食品藥品職業學院，湖南 長沙 410014)

目的：建立整腸正氣丸中和厚樸酚及厚樸酚的檢測方法。方法：色譜條件為C18色譜柱；柱溫為室溫；流動相：甲醇-水(75∶25)；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：294 nm。結果：和厚樸酚及厚樸酚線性范圍分別為12.15～121.50 μg·mL-1和22.25～222.50 μg·mL-1，r分別為0.999 8，0.999 5；和厚樸酚加樣回收率為98.47%(RSD=0.72%，n=6)；厚樸酚加樣回收率為98.30%(為RSD=0.88%，n=6)。結論：該方法簡便，準確度高，可有效控制整腸正氣丸的質量。

整腸正氣丸；和厚樸酚；厚樸酚；高效液相色譜法

整腸正氣丸是依據清代王勛所撰的溫病著作《慈航集三元普濟方》中的正氣丸研制成的中成藥[1]，是由廣藿香、厚樸、紫蘇葉、枳殼等16味中藥制成的水蜜丸。具有解表化濕，理氣和中功能，適用于外感風寒，內傷濕滯，嘔吐泄瀉，惡寒發熱，頭痛脘腹疼痛，舌苔白膩，脈浮弦等癥。以厚樸作為君藥的中成藥丸劑多以厚樸酚與和厚樸酚作為含量測定指標，經文獻檢索可知[2-6]，這些丸劑多為水丸或者大蜜丸，目前尚未有水蜜丸中和厚樸酚及厚樸酚含量測定方法學研究的公開報道；另外，《中國藥典》2010年版一部中對厚樸酚與和厚樸酚含量測定做出了規定[7]，但其供試品溶液的制備是采用浸漬法，冷浸24 h后再進行過濾處理，耗時長，給企業的檢驗工作帶來較大不便。本文對整腸正氣丸中和厚樸酚及厚樸酚含量測定的方法進行研究，擬定的測試方法干擾少，靈敏可靠，可有效控制產品質量，為生產企業提供質量控制的便捷途徑。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜系統：美國鉑金-埃爾默公司，包括Series 200 LC 四元低壓梯度泵；Model 785A二極管陣列紫外檢測器；NELSON 200 Series色譜工作站；200 Series自動進樣器(100 μL)。島津分析天平(1/10 000)(日本島津公司)。KQ250-DB超聲波清洗儀(昆山超聲儀器設備廠，工作頻率50 Hz，功率300 W)。

1.2 試藥

和厚樸酚、厚樸酚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為：110730-201112，和厚樸酚含量>99.8%；110729-200411)；整腸正氣丸(自制)，規格：每包4 g，(批號：1111261，1111262，1111263)；陰性對照樣品(處方中除去厚樸，并按制法工藝制成)。分析用甲醇為色譜純，水為三重蒸餾水，其他試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取和厚樸酚、厚樸酚對照品2.43，4.45 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1 mL含和厚樸酚24.30 μg、厚樸酚44.50 μg的混合溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取樣品適量研細、混勻。取約2.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇約45 mL，超聲處理30 min，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，用0.45 μm的濾膜過濾，取濾液，即得。

2.1.3 陰性樣品溶液的制備 除厚樸外，將其他藥按處方中藥味的比例，自配陰性樣品。再按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：AgilentC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：室溫；流動相：甲醇-水(75∶25)；流速：1 mL·min-1；檢測波長：294 nm；進樣量10 μL；在此色譜條件下，和厚樸酚、厚樸酚對照品與樣品中其他組分分離度不低于1.5；理論塔板數按和厚樸酚、厚樸酚算均不低于3 800。

對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液色譜圖見圖1，結果表明在此色譜條件下陰性樣品溶液中其他成分對和厚樸酚與厚樸酚的測定無干擾。

A.對照品；B.整腸正氣丸供試品；C.陰性對照；1.和厚樸酚；2.厚樸酚圖1 整腸正氣丸及其對照品HPLC圖

2.3 線性關系考察

精密吸取和厚樸酚、厚樸酚對照品混合溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，5.0 mL，分別置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，分別獲得和厚樸酚濃度為12.15，24.30,36.45,48.60,60.75，121.50 μg·mL-1以及厚樸酚濃度為22.25，44.50,66.75,89.00,111.25，222.50 μg·mL-1的系列混合溶液。分別精密吸取上述對照品溶液10 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，分別計算回歸方程為Y=13 577X-19 263，r=0.999 8；Y=12 024X-26 852，r=0.999 5。表明和厚樸酚、厚樸酚對照品分別在12.15～121.50 μg·mL-1和22.25～222.50 μg·mL-1內具有良好的線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取2.1.1項下對照品溶液10 μL，按2.2項下色譜條件，重復進樣6次，測定，記錄和厚樸酚與厚樸酚的峰面積，求得RSD分別為1.14%與1.75%，說明精密度良好。

2.5 穩定性試驗

精密吸取供試品溶液，在室溫下，分別于配制后0,2,4,6,8 h進行和厚樸酚、厚樸酚峰面積測定，每次進樣10 μL，測得供試品溶液于8 h內的峰面積 RSD分別為0.93%，0.69%，結果表明供試品溶液在8 h內穩定。

2.6 重復性試驗

稱取樣品6份(批號1111261)，每份2 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法操作，依法進樣測定，計算含量，求得和厚樸酚RSD=0.55%，厚樸酚RSD=0.94%。結果表明，本法測定具有良好的重現性。

2.7 回收率試驗

采用加樣回收法，稱取已知含量的同一批整腸正氣丸(批號：1111261；和厚樸酚、厚樸酚含量分別為2.77，2.58 mg·g-1)1.0 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，分別精密加入對照品溶液(和厚樸酚濃度為2.83 mg·mL-1，厚樸酚濃度為2.74 mg·mL-1) 1 mL，照供試品溶液制備方法制備。按正文方法，進樣，測定，計算和厚樸酚、厚樸酚平均回收率，結果見表1。

表1 回收率試驗

2.8 樣品測定

精密稱取整腸正氣丸樣品(批號：1111261，1111262，1111263)，按2.1.2項下方法制備，分別精密吸取供試品溶液10 μL，按上述色譜條件測定，計算樣品中和厚樸酚與厚樸酚的含量。結果本品含和厚樸酚及厚樸酚合計分別為5.38,5.34,5.31 mg·g-1。

3 討論

3.1 流動相的選擇

實驗在選擇流動相時，參考相應文獻[2-7]，分別選用了甲醇-水，甲醇-水-冰醋酸，乙腈-水等，通過試驗發現甲醇-水可以使峰得到較好的分離。并進一步對甲醇-水(75∶25)、(78∶22)、(59∶41)3種不同比例進行了比較，結果，在甲醇-水(75∶25)比例下的色譜峰分離較好且峰形較佳。

3.2 檢測波長的選擇

通過對供試品及和厚樸酚、厚樸酚對照品溶液的紫外光譜掃描，結合檢測峰的分離效果，認為294 nm為最佳檢測波長，與《中國藥典》2010版一部中厚樸的檢測方法一致[7]。

3.3 提取方法的選擇

參照文獻[2-7]，分別選用了冷浸法、超聲法、回流法進行了提取測定，結果表明超聲法的提取較為完全，且省時方便、簡單易行。

[1] 清·王勛.慈航集三元普濟方[M]. 合肥：安徽科技出版社，1990：55.

[2] 魏蓉,項菲.高效液相色譜法測定舒肝快胃丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量[J]. 中南藥學，2011,9(11)：847-850.

[3] 馬俊,馮端浩,曹紅.HPLC法測定兒童清熱導滯丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量[J].中國藥師，2010,13(4)：524-526.

[4] 李衛民,牛志強,王治平，等.超聲強化超臨界提取厚樸酚與和厚樸酚工藝的研究[J].中草藥，2011,42(4)：681-683.

[5] 魏剛.高效液相色譜法測定藿香正氣丸中厚樸酚與和厚樸酚的含量[J].湖北中醫雜志，2011,133(2)：70-71.

[6] 鄭新元,張茉,王杰，等.RP-HPLC法測定香蘇正胃丸中厚樸酚及和厚樸酚的含量[J].湖北中醫雜志，2011,133(2)：70-71.

[7] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：235.

DeterminationofHonokiolandMagnololinZhengChangZhengQiPillsbyHPLC

CHEN Yu-xiu

(HunanFoodandDrugVocationalCollege,Changsha410014China)

Objective：To establish a HPLC method for determining the honokiol and magnolol content in Zheng Chang Zheng Qi Pills.Methods:HPLC was used to detect the honokiol and magnolol content in Zheng Chang Zheng Qi Pills with C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase consisted of methanol-Water(75∶25).The flow rate was 1.0 mL·min-1and column temperature was room temperature.The detected wavelength was 294 nm.Results:The method were linear at the range of 12.15～121.50 μg·mL-1for honokiol(r=0.9998)and 22.25～222.50 μg·mL-1for magnolol(r=0.999 5).The average recovery rate were 98.47%,RSD=0.72% and 98.30%,RSD=0.88% respectively(n=6).Conclusion:The method is convenient and accurate,which can be applied to the content determination of honokiol and magnolol for Zheng Chang Zheng Qi Pills.

Zheng Chang Zheng Qi Pills;Honokiol;Magnolol;HPLC

2012-10-09)

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陳玉秀，E-mail：cyxxl127@sina.cn