HPLC同時測定新健胃包芯片中5種蒽醌類成分的含量

李平，鄭艷春，楊冬麗，張東閣，崔雅慧，閆春風，秦婷

(頸復康藥業集團有限公司，河北省中藥新輔料工程技術研究中心,河北 承德 067000)

HPLC同時測定新健胃包芯片中5種蒽醌類成分的含量

李平，鄭艷春*，楊冬麗，張東閣，崔雅慧，閆春風，秦婷

(頸復康藥業集團有限公司，河北省中藥新輔料工程技術研究中心,河北 承德 067000)

目的：建立HPLC法測定新健胃包芯片中5種蒽醌類成分的含量。方法：色譜柱：Diamonsil C8柱，流動相：甲醇(A)-0.3%磷酸(B)梯度洗脫，柱溫：25 ℃，流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：430 nm。結果：蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚平均回收率(n=9)分別為99.5%，97.7%，105.4%，100.1%，106.1%，RSD值分別為1.15%，1.76%，1.79%，1.74%，1.93%；蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚分別在進樣量為0.041～0.205、0.041～0.202、0.049～0.245、0.097～0.484、0.042～0.212 μg與峰面積呈良好線性關系。結論：該方法簡便、靈敏、結果準確可靠，適用于該制劑中蒽醌類成分的質量控制。

包芯片；蘆薈大黃素；大黃酸；大黃素；大黃酚；大黃素甲醚；HPLC

新健胃包芯片由陳皮、大黃、黃芩、蒼術等中藥組成，是在新健胃片[WS-10080(ZD-00807)-2002]劑型的基礎上進行的工藝改進和劑型的改革，具有清熱燥濕，制酸和胃之功效，方中黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒功效，大黃具清熱解毒功效，是方中主藥，原標準僅收載了黃芩苷的含量測定方法，相關大黃及其制劑的文獻多以測定大黃素、大黃酚含量為主，新健胃包芯片在原標準的基礎上增加了大黃中5 種蒽醌類成分的檢測，以期更全面控制該制劑的內在質量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1200型高效液相色譜儀：1260型高壓泵，1260 DAD檢測器；梅特勒AE240電子分析天平；KQ100超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥

蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為：110795-201007，110757-200206，110756-200110，110796-200615，110758-200912)；新健胃包芯片(承德頸復康藥業集團有限公司，批號：20120305，20120306，20120307，規格：每片重0.53 g)；甲醇為進口色譜純(美國)；水為重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C8柱(250 mm×4. 6 mm，5 μm)，流動相：甲醇(A)-0.3%磷酸(B),梯度洗脫，檢測波長：430 nm;流速：1.0 mL·min-1;柱溫：25 ℃;進樣量：10 μL。

2.2 對照品、供試品溶液的制備及測定方法

2.2.1 對照品溶液的制備 分別稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度分別為10，10，10，20，10 μg·mL-1的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取新健胃包芯片20片，研細，稱取3.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定重量，75 ℃回流1.5 h，放冷，再稱，甲醇補足減輕的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，蒸干，殘渣加8%(v/v)鹽酸20 mL，超聲處理2 min，再加入三氯甲烷20 mL，加熱回流2 h，冷卻，置入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，水層再用三氯甲烷振搖提取4 次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉移至10 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。分別精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定[1]，計算大黃各成分含量。

2.3 線性關系考察

分別稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚41.08,40.48,39.7,76.8,42.36 μg·mL-1的對照品貯備溶液，再分別精密吸取貯備液 1,2,3,4,5 mL 置10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按測定方法測定，以樣品的濃度為橫坐標(X),測得的峰面積值為縱坐標(Y)，進行線性回歸，得回歸方程。蘆薈大黃素：Y1=23.111X1+3.3，r=0.999 7；大黃酸：Y2=20.877X2-9.17，r=0.999 6；大黃素：Y3=21.402X3+5.31，r=0.999 8；大黃酚：Y4=25.139X4+6.83，r=0.999 9；大黃素甲醚：Y5=12.559X5-2.8，r=0.999 6。表明蘆薈大黃素在進樣量0.041～0.205 μg,大黃酸在進樣量0.041～0.202 μg,大黃素在進樣量0.049～0.245 μg,大黃酚在進樣量0.097～0.484 μg,大黃素甲醚在進樣量0.042～0.212 μg與峰面積呈良好線性關系。

2.4 干擾性試驗

按處方比例(缺大黃)稱取其他中藥，按照新健胃包芯片的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備空白溶液，作為陰性對照溶液。按上述色譜條件測定，結果見圖1。

A：新健胃包芯片樣品 B：對照品 C：陰性對照品1.蘆薈大黃素 2.大黃酸 3.大黃素 4.大黃酚 5.大黃素甲醚圖1 新健胃包芯片及對照品HPLC圖

2.5 精密度試驗

取上述供試品(批號：20120305)溶液，按上述色譜條件，平行進樣6次，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰面積的RSD值分別為0.32%,0.35%,0.12%,0.15%,0.32%。

2.6 穩定性試驗

取上述供試品溶液，分別于0,2,4,6,8,10,12 h進行測定，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚峰面積RSD 分別為0.31%,0.43%,0.20%,0.11%,0.22%,結果表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.7 重現性試驗

取同一批次樣品(批號：20120305)6份，按2.2制備供試品溶液，測定，計算蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量，結果RSD分別為0.89%,1.01%,0.76%,0.85%,1.15%，表明重現性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取同一批號樣品(批號：20120305)1.5 g，精密稱定，另精密稱取一定量對照品加入樣品中，按2.2制備供試品溶液，測定，計算回收率(n=9)，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

取樣品3批，按2.2制備供試品溶液，按上述色譜條件分別測定各成分的峰面積，計算樣品中各組分含量及總含量(n=3)，結果見表2。

表1 加樣回收率試驗

表2 5種蒽醌類成分含量測定結果 /mg·g-1

3 討論

3.1 波長的選擇

根據參考文獻[2]及光譜掃描的結果，大黃蒽醌類成分在254、430 nm下均有明顯吸收，在實驗研究中發現，本制劑在254 nm下分離5種成分[3]時，蘆薈大黃素前后各有一個干擾峰，很難分離，而在430 nm下消除了其他吸收峰的干擾，各峰分離較好。

3.2 色譜柱的選擇

根據文獻[2-9]，大多數蒽醌類成分的檢測色譜柱為C18柱，本實驗在研究中發現，使用C18柱子蘆薈大黃素分離較差，大黃素的前面有干擾峰存在，很難分離，而用C8柱樣品分離好，出峰時間短。

3.3 提取溫度及提取溶劑的選擇

試驗中考察了樣品在70～100 ℃水浴下提取、蒸干，結果發現80 ℃以上各成分均有不同的降低[4]，在75 ℃提取、蒸干、水解時的含量最高。提取溶劑[5]主要考察了乙醇、10%鹽酸-乙醇(3∶1)、甲醇，結果以甲醇提取含量最高，提取液容易過濾，蒸干快。

3.4 提取方法的選擇

主要選擇了甲醇回流法和超聲法以及放置過夜再超聲法，結果發現回流法提取的各成分含量高，超聲法偏低[3,10]?？赡艿脑蚴谴簏S蒽醌類成分在水解過程中溫度不同水解的程度不同，該結果與實驗中得出的結果相符，相關的化學性質還有待于進一步的考察。

[1] 國家藥典委員.中國藥典[S].一部.北京：中國醫藥科技出版社,2010：22-23.

[2] 何素琴,歐陽吉德,肖琳.HPLC法測定膽石通膠囊中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚及大黃素甲醚的含量[J].西北藥學雜志,2011,26(3)：180-182.

[3] 張紅霞,金藝,許海燕，等.HPLC 法測定胃力片中大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量[J].沈陽藥科大學學報,2007,24(7)：417-419.

[4] 楊柳,許舜軍.大黃蒽醌類成分在提取過程中的量變規律[J].中國醫院藥學雜志,2007，27(7)：908-910.

[5] 呂慧英,趙晨曦,梁逸曾，等.5種大黃蒽醌類衍生物的同時測定及應用[J].時珍國醫國藥，2009，20(10)：2490-2492.

[6] 方既明,章懷奮.高效液相色譜法同時測定麻仁丸中大黃素、大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素的含量[J].中南藥學,2011,9(5)：342-346.

[7] 王瑞芬,郭海麗.HPLC同時測定喘舒片中5種蒽醌類成分的含量[J].中成藥,2011,33(3)：446-449.

[8] 吳俊珠,周濃,羅碧燕,等.HPLC測定黃連上清丸中5 種大黃蒽醌類化合物的含量[J].云南中醫中藥雜志,2010,31(9)：66-67.

[9] 岳淑梅,馮玲玲,齊瀟瀟，等.肝寧顆粒中大黃所含5種蒽醌苷元的HPLC測定[J].中成藥，2008，30(8)：1155-1158.

[10] 樊磊磊. HPLC法測定通腑膠囊中大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚及蘆薈大黃素的含量[J].中國醫藥指南,2011,9(12)：11-12.

DeterminationofFiveAnthraquinoneComponentsinXinJianweiPackageTabletbyHPLC

LI Ping,ZHENG Yan-chun*，YANG Dong-li，ZHANG Dong-ge,CUI Ya-hui，YAN Chun-feng,QIN Ting

(JingfukangPharmaceuticalGroupCo.Ltd.,TheNewExcipientsofTraditionalChineseMedicineEngineeringResearchCenterofHebeiProvince,Chengde067000,China)

Objective：To establish a HPLC method for determining five anthraquinone components in Xin Jianwei package tablet.Methods:Diamonsil C8column was used with the mobile phase methanol(A)-0.3% phosphate acid solution(B),gradient elution，the flow rate was 1.0 mL·min-1and detection wavelength was set at 430 nm.Results:The average recoveries of aloe-emodin，rhein，emodin，chrysophanol and physcion were 99.5%，97.7%，105.4%，100.1%，106.1% respectively;RSD were 1.15%，1.76%，1.79%，1.74%，1.93% respectively.The linear range of them was 0.041～0.205,0.041～0.202,0.049～0.245,0.097～0.484,0.042～0.212 μg respectively.Conclusion:The method is simple，sensitive，accurate and can be used for the quality control of Xin Jianwei package Tablet.

Package tablet;Aloe-emodin;Rhein;Emodin;Chrysophanol;Physcion;HPLC

2012-09-16)

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鄭艷春，Tel：(0314)2292050,E-mail：zhengyanchun2001@163.com