反相高效液相色譜法測定鹽酸氨溴索注射液的含量

劉淑華

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗所，遼寧朝陽122000

反相高效液相色譜法測定鹽酸氨溴索注射液的含量

劉淑華

遼寧省朝陽市食品藥品檢驗所，遼寧朝陽122000

目的建立反相高效液相色譜法測定鹽酸氨溴索注射液含量的方法。方法色譜柱：Kromasil C18（4.6mm× 150 mm，5μm）；流動相：0.005 mol/L磷酸氫二銨溶液（磷酸調節pH值至7.0）-乙腈（48∶52）；柱溫：室溫；流速：1.0 mL/min；檢測波長：248 nm；進樣體積：20μL。結果鹽酸氨溴索的線性范圍為0.060 04~1.501 00μg（r＝0.9999，n=5）；鹽酸氨溴索注射液的高、中、低3種濃度的平均加樣回收率為99.4%（RSD=0.6%，n=9）。結論該方法專屬性強、準確、重現性好，可用于鹽酸氨溴索注射液含量的測定。

反相高效液相色譜法；鹽酸氨溴索注射液；含量測定

鹽酸氨溴索注射液適用于伴有痰液分泌異?；蚺盘倒δ懿涣嫉募甭灾夤芊渭膊〉撵钐抵委?，尤其是慢性支氣管炎急性發作喘息型支氣管炎支氣管哮喘等癥[1]，其現行標準為國家食品藥品監督管理局標準YBH21062005（屬于單頁試行標準）[2]，采用紫外分光光度法測定鹽酸氨溴索的含量，由于受降解產物的干擾，方法專屬性不強，本研究用反相高效液相色譜法[3]測定，方法專屬性強，準確，重現性好，可用于鹽酸氨溴索注射液含量的測定[4-17]。結果如下：

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：型號Waters e2695-2489；對照品：鹽酸氨溴索（批號：100599-200502，中檢所）；鹽酸氨溴索注射液（康哲制藥有限公司，批號：20130227、20130411、20130618）；乙腈：色譜純；磷酸、磷酸氫二銨：分析純，水：純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：0.005 mol/L磷酸氫二銨溶液（磷酸調節pH值至7.0）-乙腈（48∶52）；流速：1.0 m L/min；柱溫：室溫；檢測波長：248 nm；進樣體積：20μL；理論塔板數以鹽酸氨溴索峰計算為8000；拖尾因子：1.04；鹽酸氨溴索與相鄰雜質峰之間的分離度均大于1.5。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液精稱鹽酸氨溴索對照品15.01mg，置100 mL容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得150.1μg/mL的溶液。

2.2.2 對照品溶液精取對照品儲備液5mL，置25mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為30.02μg/mL的溶液。

2.2.3 供試品溶液精取供試品適量，加流動相稀釋成30μg/mL的溶液。

2.3 專屬性考察

精取鹽酸氨溴索注射液適量（相當于鹽酸氨溴索1.5 mg），經下列條件破壞：A.加鹽酸溶液（1.0 mol/L）5mL破壞20min后，加氫氧化鈉溶液（1.0mol/L）5mL中和；B.加氫氧化鈉溶液（1.0 mol/L）5 m L破壞20 min后，加入鹽酸溶液（1.0 mol/L）5 mL中和；C.160℃加熱2 h破壞；D.紫外光（254、365 nm）照射15 min。分別取上述各破壞產物，轉移至50 m L容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得經破壞后的供試品溶液，照“2.1”項下條件進樣。由色譜圖得出：主峰與降解產物峰分離良好（分離度均大于1.5），表明此法專屬性強。見圖1。

圖1 專屬性色譜圖

2.4 線性關系

精取對照品儲備液1.0、5.0、10.0、20.0mL和25.0mL，分別置50mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，進樣20μL。以進樣量（μg）為橫坐標X，峰面積為縱坐標Y，繪制標準曲線：Y=29 850.56X-6 348.82，r＝0.9999（n=5），表明：鹽酸氨溴索進樣量在0.060 04~ 1.501 00μg范圍內與峰面積有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液連續進樣5次，峰面積的RSD為0.3%。表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取供試品溶液，分別經室溫放置0、2、4、8、12 h后，進樣，峰面積的RSD為0.4%。表明供試品溶液至少在12 h內穩定。

2.7 重現性試驗

取樣品（批號：20130227），按“2.2.3”項下制備供試品溶液5份，照“2.1”項下條件測定，測得含量均值為99.6%，RSD=0.3%，表明方法重現性良好。

2.8 加樣回收率測定

精取樣品（批號：20130227，100.4%）適量（約相當于鹽酸氨溴索0.75 mg）9份，分為三組，每組分別精密加入對照品儲備液3、5、7 mL（分別約相當于加入鹽酸氨溴索的量為0.4503、0.7505、1.0507 mg），按“2.2.3”項下制備成低、中、高3個濃度的供試品溶液（分別為“2.2.3”項下供試品溶液濃度的80%、100%、120%），照“2.1”項下條件測定加樣回收率。測定結果見表1。

表1 加樣回收率測定結果（n=9）

2.9 樣品含量測定

取對照品溶液及三批樣品的供試品溶液，按“2.1”項下條件進樣測定，按外標法計算，測定結果見表2。

表2 樣品測定結果（%）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

以流動相為溶劑，用島津UV-2550型紫外－可見分光光度計測定，鹽酸氨溴索最大吸收波長為248 nm，故定為測定波長。

3.2 流動相的選擇

實驗時曾選甲醇代替流動相中乙腈，但峰型較差，此法的色譜峰型對稱（拖尾因子為1.04），理論塔板數較高，符合系統適用性的要求；《中國藥典》2010年版二部新增關于流動相的選擇原則是：應盡可能少用含有緩沖液的流動相，必須使用時，應盡可能選用含較低濃度緩沖液的流動相，曾用高、低兩種磷酸鹽濃度：0.01mol/L（《中國藥典》2010年版方法）、0.005mol/L（本法）進行比較，色譜峰型無明顯差異，故選用較低濃度的磷酸緩沖溶液作為流動相，有利于延長色譜系統的壽命。

3.3 方法專屬性

經破壞實驗驗證，鹽酸氨溴索主峰與各降解產物分離良好，能夠排除降解產物的干擾，專屬性強，可有效地控制鹽酸氨溴索注射液的質量。

3.4 方法學考察

本法線性范圍較寬，加樣回收率高，結果可靠準確，可用于鹽酸氨溴索注射液的含量測定。

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Determ ination of Am broxol Hydrochloride Injection by RP-HPLC

LIU Shuhua
Institute for Food and Drug Control of Chaoyang City in Liaoning Province,Chaoyang 122000,China

Objective To establish amethod for the determination of Ambroxol Hydrochloride Injection by RP-HPLC. Methods The determination was performed on a Kromasil C18column(4.6 mm×150 mm,5μm)with themobile phase consisted of 0.005mol/L diammonium phosphate solution(adjusted to pH 7.0 with phosphoric acid)-acetonitrile(48∶52) at ambient temperature.The flow rate was 1.0 mL/min.The detective wavelength was 248 nm.The injection volume was 20μL.Resu lts The liner range of Ambroxol Hydrochloride was 0.060 04-1.501 00μg(r＝0.9999,n=5).The average recovery was 99.4%(RSD=0.6%,n=9)for the three different levels of the added amount of Ambroxol Hydrochloride.Conclusion Thismethod is specific,accurate and reproducible.It can be used for determination of Ambroxol Hydrochloride Injection.

RP-HPLC;Ambroxol Hydrochloride Injection;Contentdetermination

R927.2

A

1673-7210（2014）01（b）-0111-03

2013-11-14本文編輯：衛軻）

劉淑華（1971-），女，副主任藥師，從事藥品檢驗工作。