耳穴按壓對大鼠精神性疲勞影響的實驗研究*

丁婷婷，袁 紅，李思諾，梁 田，張 茜，肖 響

(北京中醫藥大學，北京100029)

持續的腦力勞動、睡眠不足或某些身心疾病均可誘發精神疲勞，又稱心理疲勞［1］。由于疲勞與精神活動密切相關，因此中樞神經系統是疲勞研究的主要對象，如疲勞后腦內神經遞質水平的變化及調控腦內神經遞質來延緩疲勞的發生［2］、連續駕駛后駕駛員疲勞評價［3］及中醫證模型［4］等。睡眠質量的下降和睡眠不足是臨床慢性疲勞癥患者的主訴，因此睡眠剝奪(sleep deprivation，SD)是建立疲勞模型的主要方法之一。在長途運輸等作業條件下，睡眠剝奪現象會經常發生，駕駛人員的身心健康會受到很大影響，產生諸多問題，嚴重的會導致免疫力下降及腦功能受損。同時精神疲勞駕駛是惡性交通事故的重要誘發因素，特別是在交通及航天領域約20%～30%的事故來源于此［5］。因此，如何緩解駕駛精神疲勞，對于改善精神狀態、保障交通安全具有重要的社會意義。

耳穴壓丸法是在中醫理論指導下安全有效的自然療法。本實驗以耳部的“全息理論”和經絡臟－腑相關性作為突破口，將課題主要對象設定為精神疲勞造模的大鼠，通過對其雙耳“心”、“皮質下”耳穴的壓迫刺激［6－8］，探究耳穴刺激對精神性疲勞的緩解作用。

1 材料

1．1 實驗動物

清潔級150 g雄性Wistar大鼠60只(生產許可號:SCXK京2011－0004)，購自斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司。

1．2 睡眠剝奪箱的制備［9－10］

睡眠剝奪箱是51 cm×36 cm×20 cm的大鼠箱，其中放置一個小平臺(d=6．5 cm)或一個大平臺(d=15 cm)，平臺周圍注3 cm的水，形成水環境，平臺露出水面以上1 cm，在平臺上方16 cm處放置籠罩，籠罩以平行的不銹鋼絲制成，上面可以提供水和食物。水溫與室溫保持一致，并且每日換水、打掃睡眠剝奪箱。

1．3 實驗器材

可調溫游泳箱;YLS－1A多功能大鼠自主活動記錄儀(山東省醫學科學院設備站)。

2 方法

2．1 動物分組

清潔級150 g雄性Wistar大鼠60只。大鼠適應性喂養7天后，隨機(隨機數字表)平均分成4組，每組15只，分別為空白組(A組):不給予任何處理，只是同步飼養;單純抓取組(B組):不進行睡眠剝奪，抓取時間與治療組相同但不刺激耳穴;模型組(C組):進行睡眠剝奪，不進行耳穴按壓，其余與耳穴按壓組相同;耳穴按壓組(D組):進行睡眠剝奪，給予雙耳“心”、“皮質下”耳穴按壓刺激。在實驗過程中保證動物可以自由進食飲水，室溫控制在25℃，提供12 h光照/12 h黑暗的環境(光照時間為7:00～19:00)［11］。

2．2 大鼠精神疲勞模型的建立及干預

在適應性飼養7天后進行睡眠剝奪，大鼠精神疲勞的模型采用改良后的小站臺水環境法(flowerpot)［12］。將模型組大鼠、耳穴按壓組大鼠分別放入睡眠剝奪箱內的小平臺(d=6．5 cm)上，每箱裝1只大鼠。小平臺上的大鼠不能舒展身軀，但進食和飲水不受影響，還可進行簡單的動作如轉頭、舔毛等，可以小憩，但如果大鼠進入快速動眼睡眠時期，由于全身的肌張力降低、肌肉的松弛和節律性垂頭，大鼠會落水突然驚醒，因為大鼠懼水，不會在水中長留而重回小站臺，重復之前的動作站立，如此實現持續睡眠剝奪72 h?？瞻捉M大鼠、單純抓取組大鼠放入睡眠剝奪箱內的大平臺(d=15 cm)上，大鼠在大平臺上可以睡眠而不會落入水中，其它環境與模型組相同，但大平臺直徑大，可保持完整的睡眠周期，并可排除隔離、限制活動和水環境造成的應激影響。大鼠在睡眠剝奪期間可自由進食飲水，室內照明控制在12 h/12 h的明暗周期。72 h睡眠剝奪結束后，耳穴按壓組進行耳穴按壓干預(2006年中國針灸學會耳穴、腧穴專業委員會全國學術研討會上華興邦指出動物模型可在耳廓上出現陽性反應點，但是陽性反應點不是點狀而是片狀、小區，因此耳穴按壓組的刺激方式為耳穴區域按壓)，單純抓取組只給予抓取刺激，模型組除造模外不進行耳穴干預，空白組不給予任何干預。

2．3 測定指標及方法

干預結束后檢測各組大鼠的自發活動度(大鼠在自主活動箱中經過5 min的適應期后，以運動測量法測量大鼠3 min爬格數、3 min探身數)及負重游泳時間［5］。負重游泳以“大鼠游泳協調性顯著性下降、身體下沉、水淹沒鼻尖至再次浮出水面超過10秒”作為力竭判斷標準［13］。

2．4 統計學處理

采用SPSS軟件完成數據的獨立樣本T檢驗以及單因素方差的分析，采用LSD檢驗進行組間比較。

3 結果

各組大鼠曠場實驗測定結果比較見表1;各組大鼠游泳時間測定結果比較見表2。與空白組對照比較，模型組的爬格數和探身數均顯著減少(P＜0．05)，負重游泳時間顯著縮短(P＜0．05)，表明建模成功;與空白組對照比較單純抓取組的爬格數和探身數均無顯著增多或減少(P＞0．05)，負重游泳時間無顯著延長或縮短(P＞0．05)，因此可排除抓取對本次實驗大鼠精神性疲勞產生影響這一混雜因素;與模型組對照比較，耳穴按壓組的爬格數和探身數均顯著增多(P＜0.05)，耳穴按壓組的負重游泳時間顯著延長(P＜0.05)，表明按壓耳穴可顯著改善大鼠精神性疲勞。

表1 各組大鼠曠場實驗測定結果比較(±s)

表1 各組大鼠曠場實驗測定結果比較(±s)

注:與 A 組比較，b1 P=0．95 ＞0．05，b2P=0．95 ＞0．05，c1 P=0．00 ＜0．05，c2 P=0．001 ＜0．05;與 C 組比較，d1 P=0．00 ＜0．05，d2 P=0．00 ＜0．05。

組別 例數(只) 爬格數(個) 探身數(次)A組15 51．93 ±21．83 14．40 ±6．21 B 組 15 51．40 ±20．72b1 14．27 ±6．1b2 C 組 15 27．60 ±8．08c1 8．40 ±3．98c2 D 組 15 52．36 ±16．66d1 16．43 ±2．95d2

表2 各組大鼠游泳時間測定結果比較(±s)

表2 各組大鼠游泳時間測定結果比較(±s)

注:與A組比較，c3P=0．00＜0．05;與C 組比較，d3P=0.00 ＜0．05。

組別 例數(只) 游泳時間(min)A組15 7．85 ±1．97 B 組 15 7．83 ±1．83b3 C 組 15 4．50 ±1．28c3 D 組 15 8．86 ±2．18d3

4 討論

曠場實驗是測評動物情緒興奮性和探究活動的傳統方法，主要反映動物對新環境的探索、適應性以及伴隨的情緒變化［14］。本實驗中觀察到，與空白組對照比較，模型組的爬格數和探身數均顯著減少(P＜0．05)，負重游泳時間顯著縮短(P＜0.05)，這說明本實驗采用72 h睡眠剝奪法后，模型組大鼠興奮性明顯減弱，與文獻報道［15］一致，表明建模成功。

針灸是中國傳統中醫藥學的重要組成部分，耳穴診治法是針灸學微針體系中的一種，早在2000多年前，《黃帝內經》中就記載了許多以耳診治療疾病的經驗和理論，如耳與經絡、臟腑的關系，望耳診斷疾病，耳背放血治療抽搐等。耳穴的研究在國外也備受關注。1956年，法國學者PaulNogier提出了42個耳穴點和形如倒置胚胎的耳穴分布圖［16］成為了國際范圍的焦點此后，我國學者不僅整理和發掘古代文獻，同時吸收國外先進的研究成果，組織并開展了大量臨床研究和探索，眾多未被報道過的耳穴有效點和區域被發現，同時耳廓分區和穴位定位的研究也同時大規模展開［17］。隨著時間的推移，耳穴的研究日益繁榮，成果更加突出，耳穴的功效也被越來越多的醫學工作者肯定，現代對耳穴療效的原理研究也頗多，主要有全息胚學說和生物全息律的耳廓的穴位分布的3個規律(耳廓穴位分布全息律、耳廓經絡全息律及耳廓對稱全息律［18］)，詳盡的闡釋了耳穴的分布與功效的對應關系。

通過本實驗發現，耳穴“心”、“皮質下”對神經衰弱患者有良好療效，按壓耳穴可緩解大鼠由于長時間疲勞興奮性差的問題，顯著改善精神疲勞。

［1］ Kerstedt T，Knutsson AP，Westerholm T．Mental fatigue，work and sleep［J］．J Psycho Res，2004，57(7):427 －433

［2］ Tanaka M，Nakamura F，Mizokawa S，et al．Establishment and assessment of a rat model of fatigue［J］．Neuroscience Letters，2003，352:159162

［3］ Shen KQ，Ll XP，Ong CJ，et al．EEGbased mental fatigue measurement using multiclass support vector machines with confidence estimate［J］．Clinical Neurophysiology，2008，119(7):15241533

［4］ 趙鋼，李志明．中醫脾虛證動物模型實驗研究的近20年概況［J］．醫學綜述，2000，6(1):4345

［5］ 馬文領，黃麗娜，苗雨，等．烏飯樹葉不同萃取物改善大鼠精神疲勞作用的研究［J］．海軍醫學雜志，2008，29(2):97 －99

［6］ 管遵信，王紅磊，方路，等．壓迫耳穴消除小白鼠疲勞的實驗觀察［J］．云南中醫雜志，1986(2):27 －28

［7］ 劉坤，李亮，賁卉，等．電針大鼠耳穴“心”等對孤束核升壓反射相關神經元電活動的影響［J］．針刺研究，2012，37(3):211 －217

［8］ 左天偉．耳穴治療失眠研究進展［J］．社區醫學雜志，2013，11(9):10－11

［9］ Deborah Suchecki，Sergio Tufik．Social stability attenuates the stress in the modified multiple platform method for paradoxical sleep deprivation in the rat［J］．Physiology ＆ Behavior，2000，68:309 － 316

［10］ Machado RB，Hipolide DC，Beneditosilva AA，et al．Sleep deprivation induced by the modified multiple platform technique:quantification of sleep loss and recovery［J］．Brain Research，2004，1004:4551

［11］ 張恒義，邵曉卓，周駿．睡眠剝奪疲勞模型大鼠腦電分析［J］．航天醫學與醫學工程，2011，24(5):341－344

［12］ Youngblood BD，Zhou J，Smagin GN，et al．Sleep deprivation by the flower－ pot technique and spatial reference memory［J］．Physiol Behav，1997，61(2):249 －256

［13］ 郭慶軍．大鼠游泳運動疲勞模型力竭標準的研究［D］．西安:中國人名解放軍第四軍醫大學，2011

［14］ 王維剛．曠場實驗在小鼠行為分析中的應用［J］．中國細胞生物學學報，2011，33(11):1911 －1916

［15］ Han M，Deng C，Burne THJ，et al．Short－ and long － term effects of antipsychotic drug treatment on weight gain ang H1 receptor expression［J］．Psychoneuroendocrinology，2008，22(5):569 －80

［16］ PaulNogier撰，葉肖麟摘譯．耳針療法介紹［J］．上海中醫藥雜志，1958(12):45－48

［17］ 王磊．耳穴國際標準化的現狀分析與對策研究［D］．北京:北京中醫藥大學，2012

［18］ 唐成林，朱丹，王明陵．淺淡耳穴診斷的臨床價值及應用［J］．實用中醫藥雜志，2005(4):243－244