膜性腎病患者腎組織肥大細胞的分布及病理意義

鄭敬民，尹 廣，劉志紅

（南京軍區南京總醫院全軍腎臟病研究所國家腎臟疾病臨床醫學研究中心，南京 210002）

膜性腎病是導致成人腎病綜合征的一個常見原因。在我國，膜性腎病約占原發性腎小球腎炎的10%[1]。在西方，膜性腎病的比例則高達30%[2]。但有關膜性腎病的病理機制仍不是很清楚。

近年來，有關肥大細胞在各種腎臟疾病發生發展中的可能作用引起了不少研究者的關注。包括膜性腎病在內的各種主要腎臟病患者腎組織中，均存在肥大細胞增多的現象[3?9]。但目前對腎組織肥大細胞的確切病理意義仍不了解。從已有的文獻來看，針對特定腎臟疾病腎組織肥大細胞的研究仍然不多，病例數也很有限，尤其是在國內，這方面的文獻更少（就我們查閱的文獻來看，尚未見國內有相關報道）。就膜性腎病而言，國外文獻只籠統地報道了患者腎組織肥大細胞增多的現象，尚未見對不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞的分類比較分析。本文對包括Ⅰ～Ⅳ期在內的不同病理類型膜性腎病患者腎組織中的肥大細胞及其與某些臨床病理指標的相關性進行了定量分析，以比較全面地了解我國患者（漢族人）腎組織肥大細胞的分布特點，探討肥大細胞在膜性腎病發生發展中的可能病理意義。

1 對象與方法

1.1 病例選擇及相關病理資料的獲取

從南京軍區南京總醫院全軍腎臟病研究所腎活檢組織標本庫中選取臨床和病理資料完整的特發性膜性腎病病例55例（Ⅰ～Ⅳ期分別為5例、26例、16例和8例）。所有病例的腎活檢組織均經光鏡、免疫熒光和電鏡分析，符合有關特發性膜性腎病的診斷標準[10]。同時選取8例移植供腎組織標本作為正常對照，所選供腎組織病理分析均顯示無明顯病變。所有臨床相關資料（包括生化檢測結果等）從有關病歷資料庫中獲取。本文所有研究均遵守《赫爾辛基宣言》原則，并獲得本單位倫理委員會的批準。

1.2 腎組織肥大細胞檢測和定量計數方法

根據腎組織肥大細胞特異性高表達C3aR的特點[11,12]，以免疫組化的方法標記腎組織中的肥大細胞。光鏡下攝取皮質區圖像，計錄每張切片腎組織皮質區中的肥大細胞數；同時利用NIS Element BR軟件測量每張切片皮質區的腎組織面積；得到每平方毫米腎組織（皮質區）肥大細胞平均數（肥大細胞密度）。

1.3 免疫組化染色方法

腎活檢組織石蠟切片經常規脫蠟和復水處理后，于高壓鍋中高壓進行抗原修復；以3%過氧化氫甲醇溶液滅活內源性過氧化物酶；以10%胎牛血清封阻30min；經磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS）洗3次（5min/次）后，與兔抗人C3aR多克隆抗體（Santa Cruz公司）于4℃孵育過夜；再經PBS洗滌3次（5min/次）后，加Envision試劑（Dako公司）室溫孵育45min；第三次PBS洗滌后進行二氨基聯苯胺顯色反應，然后以蘇木素復染1min，自然風干后封片觀察。

1.4 小管間質相對體積測量方法

參照Okon等[13]介紹的方法，每張切片隨機選取皮質區10個區域，利用NIS Element BR3.4軟件（Nikon，Japan）測量每個區域中的小管間質面積和區域中不含小球的面積，計算出小管間質面積所占的比例，以平均值代表每張切片的相對小管間質體積。

1.5 統計學處理

采用SPSS10.0軟件進行統計分析。由于數據的正態性不佳，采用Kruskal-Wallis檢驗進行組間比較，Mann-Whitney檢驗進行兩兩比較，同時采用Bonferroni法進行校正。相關性分析采用Pearson法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肥大細胞在膜性腎病患者腎組織中的分布定位

免疫組化分析顯示（圖1），肥大細胞主要分布在膜性腎病患者腎組織的皮質及皮髓交界區，與皮質區相比，髓質中肥大細胞的數量明顯要少得多。在皮質區，肥大細胞主要以一種松散的方式分布于小管間質中，常出現在小管間質增寬的區域，分布于萎縮的小管和損傷小球的周圍。多數情況下，肥大細胞并不與小管間質中其他炎癥細胞扎堆分布（圖1B-D），在有大量炎癥細胞浸潤的區域，肥大細胞的數量往往不多。雖然在絕大多數膜性腎病患者的腎小球中觀察不到肥大細胞，但在少數病例的一些小球（在我們所分析的55例中的5例），可見肥大細胞侵入腎小球的情況（圖1E-F），這與我們以前在糖尿病性腎病和IgA腎病等觀察到的情況有所不同（以前在腎小球中從未觀察到肥大細胞）[8,9]。在不同病理類型的膜性腎病腎組織中，沒有觀察到肥大細胞在分布方式上有明顯差異。

2.2 不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞數量統計分析結果

正常對照腎組織中極少發現肥大細胞。與正常對照組相比，各種病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞數量（密度）均有不同程度的增加。Ⅰ期膜性腎病患者腎組織肥大細胞的數量相對較少，而其他病理類型間的差異并不顯著（圖2）。

2.3 膜性腎病患者腎組織肥大細胞與臨床病理指標的相關性分析結果

基于雙變量Person模型相關分析顯示，膜性腎病患者腎組織肥大細胞數量（密度）與患者血肌酐水平（r＝0.464，P＜0.001）、血胱抑素C（cystatin C，Cys C，r＝0.464，P＜0.01）、尿視黃醇結合蛋白（retinol-binding protein，RBP，r＝0.322，P＝0.024）、尿N-乙?；?β-氨基葡萄糖苷酶（N-acetyl-β-glucosaminidase，NAG，r＝0.453，P＜0.001）、尿α微球蛋白（r＝0.351，P＝0.013）、尿C3水平（r＝0.334，P＜0.018）、以及小管間質相對體積具有顯著相關性（r＝0.636，P＜0.001），其中以與小管間質相對體積的相關性最高。而與24h尿蛋白、尿溶菌酶水平，以及性別等沒有顯著相關性。

圖1 肥大細胞（黑色箭頭所示）在不同病理類型膜性腎病患者腎組織中的分布情況Figure1 The distribution of mast cells (indicated by black arrows) in the renal tissue of patients with membranous nephropathy(×200)

圖2 不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞數比較Figure2 Comparison of renal mast cell number in patients with different pathological types of membranous nephropathy

3 討論

本文首次對我國（漢族人）膜性腎病患者腎組織肥大細胞進行了觀察，并與國際上首次對不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞進行了比較分析。從我們的分析結果來看，在膜性腎病患者腎組織中，肥大細胞主要是以一種松散的方式分布于腎小管間質，常出現在小管間質增寬的區域，特別是萎縮的小管和損傷小球的周圍。這與肥大細胞在其他腎臟疾病中的分布相似[3?9]。但在本文，我們還在少數病例的一些腎小球中也觀察到了肥大細胞的存在，特別是在硬化小球中，有時可觀察到較多的肥大細胞浸潤。這是我們以前對其他疾病的分析中所從未見到的[8,9]。文獻上[3?7,14?16]。也未見有肥大細胞出現在腎小球中的報道。但這是否是膜性腎病特有的病理現象，以及產生這一病理現象的原因，仍有待于進一步的研究?；谀ば阅I病的病理分類分析顯示，不同病理類型膜性腎病的腎組織肥大細胞在分布方式上并未觀察到明顯的差異。與已往研究一致[3?9]，在本文中，我們觀察到正常腎組織中極少有肥大細胞。與正常對照相比，膜性腎病患者腎組織肥大細胞的數量顯著增加。相對而言，Ⅰ期患者腎組織肥大細胞的數量較少，而其他組間的差異并不顯著。相關性分析顯示，膜性腎病患者腎組織肥大細胞與反映腎功能損傷程度的指標（血肌酐和Cys C）和小管間質損傷指標（包括NAG、尿視黃醇結合蛋白和小管間質相對體積）具有顯著相關性。這些結果提示：（1）肥大細胞參與了膜性腎病患者腎組織損傷過程；（2）肥大細胞主要與小管和小管間質損傷有關，可能在膜性腎病慢性化病變中起重要作用；（3）在一些特定生理情況下，肥大細胞可能與膜性腎病患者腎小球的損傷有關。

需要特別指出的是，在本文的研究中，我們對不同病理類型膜性腎病患者腎組織肥大細胞進行了分類分析，雖然總的病例數并不少，但涉及到每一病理類型的病例仍很有限，因此，對于不同病理類型中的情況，仍有待于進一步擴大每組病例數進行觀察，以便得出更加可靠的結論。

總之，本文的研究結果提示，肥大細胞很可能參與了膜性腎病腎組織損傷，特別是小管間質損傷的過程。肥大細胞作為一種新的致病因素以及一個潛在的膜性腎病腎組織慢性病變防治新靶標，值得我們關注。

【參考文獻】

[1]Li LS, Liu ZH.Epidemiologic data of renal diseases froma single unit in China: analysis based on 13 519 renal biopsies[J].Kidney Int, 2004, 66(3): 920?923.

[2]Cattran DC.Idiopathic membranous glomerulonephritis[J].Kindney Int, 2001, 59(5): 1983?1994

[3]Papadimitriou JC, Drachenberg CB, Ramos E,et al.Mast cell quantitation in renal transplant biopsy specimens as a potential marker for the cumulative burden of tissue injury[J].Transplant Proc, 2013, 45(4): 1469?1471.

[4]Watanabe S, Miyata Y, Matsuo T,et al.High density of tryptase-positive mast cells in patients with renal cell carcinoma on hemodialysis: correlation with expression of stem cell factor and protease activated receptor-2[J].Hum Pathol, 2012, 43(6): 888?897.

[5]Welker P, Kr?mer S, Groneberg DA,et al.Increased mast cell number in human hypertensive nephropathy[J].Am J Physiol Renal Physiol, 2008, 295(4): F1103?F1109.

[6]Silva GE, Costa RS, Ravinal RC,et al.Mast cells,TGF-beta1 and alpha-SMA expression in IgA nephropathy[J].Dis Markers, 2008, 24(3): 181?190.

[7]Togawa H, Nakanishi K, Shima Y,et al.Increased chymase-positive mast cells in children with crescentic glomerulonephritis[J].Pediatr Nephrol, 2009, 24(5):1071?1075.

[8]Zheng JM, Yin G, Wang JP,et al.Mast cell infiltration in the renal tissue in patients with IgA nephropathy[J].J Nephol Dialy Transplant, 2011, 20(2): 114?119.[鄭敬民,尹 廣, 王建平, 等.IgA腎病患者腎組織肥大細胞的分布及意義[J].腎臟病與透析腎移植雜志, 2011, 20(2):114?119.]

[9]Zheng JM, Yao GH, Cheng Z,et al.Pathogenic role of mast cells in the development of diabetic nephropathy: a study of patients at different stages of the disease[J].Diabetologia, 2012, 55(3): 801?811.

[10]Li LS, Liu ZH.Chinese Nephrology[M].Beijing: People’s Military Medicine Press, 2008: 387?399.[黎磊石, 劉志紅.中國腎臟病學[M].北京: 人民軍醫出版社, 2008:387?399.]

[11]Zheng JM, Zhu XD, Zhang MC,et al.Mast cells highly expressing C3aR were found in the kidney of diabetic nephropathy and correlated with the development of the disease[J].Prog Biochem Biophys, 2011, 38(3): 262?268.[鄭敬民, 朱小東, 張明超, 等.高表達C3aR的肥大細胞在糖尿病腎病患者腎組織中的分布及病理意義分析[J].生物化學與生物物理進展, 2011, 38(3): 262?268.]

[12]Zheng JM, Zhu XD, Zhang MC,et al.C3aR: a sensitive marker for renal mast cells[J].J Nephrol Dialy Transplant,2011, 20(4): 319?324.[鄭敬民, 朱小東, 張明超, 等.C3aR——檢測腎組織肥大細胞的敏感標志[J].腎臟病與透析腎移植雜志, 2011, 20(4): 319?324.]

[13]Okon K, Szumera A, Kuzniewski M.Are CD34+cells found in renal interstitial fibrosis[J]? Am J Nephrol, 2003,23(6): 409?414.

[14]Silver RB.Role of mast cells in renal fibrosis[J].Kidney Int, 2013, 84(1): 214.

[15]Ehara T, Shigematsu H.Mast cells in the kidney[J].Nephrology(Carlton), 2003, 8(3): 130?138.

[16]Gilfillan AM, Austin SJ, Metcalfe DD.Mast cell biology:introduction and overview[J].Adv Exp Med Biol, 2011,716: 2?12.