針刺對慢性應激抑郁大鼠血清和腦炎性細胞因子的影響*

金樹英，戶 麗，包伍葉，3，邵潤慧，梁 佳，圖 婭，盧 峻△

(1.北京中醫藥大學，北京 100029;2.河北唐山市豐潤區中醫醫院，河北 唐山 064000;3.內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028007;4.中國中醫科學院，北京 100700)

抑郁癥已成為現代社會常見的情感障礙性疾病，給患者和社會帶來極大危害。針刺治療抑郁癥有較好療效并可以緩解抗抑郁藥的副作用［1－2］，在臨床上的應用日益受到關注。針刺治療抑郁癥的機制研究正逐漸深入［3］。近年來提出的抑郁癥細胞因子假說［4］認為，慢性應激引起免疫激活、產生炎性細胞因子，可以導致抑郁癥的發病。已有臨床研究發現［5－6］，針刺顯著降低抑郁癥患者血清IL－1β、IL－6和TNF－α的水平。海馬和額葉皮層是抑郁癥的重要病變腦區，但針刺對其中的炎性細胞因子的影響尚不明確。本實驗采用慢性應激抑郁大鼠模型，觀察針刺對血清、海馬、額葉皮層IL－1β、IL－6和TNF－α含量的影響，探討針刺治療抑郁癥的可能機制。

1 材料與方法

1.1 動物分組與處理

選用Sprague－Dawley(SD)雄性大鼠32只，體重(180±20)g，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供。動物隨機分為4組:正常組、模型組、針刺組和氟西汀組，每組8只。正常組:常規飼養。模型組:孤養，并制備慢性應激抑郁大鼠模型。針刺組:造模處理同模型組，并隔日1次在應激前針刺。氟西汀組:造模處理同模型組，每日在應激前給藥。

1.2 主要試劑和儀器

IL－1β、IL－6、TNF－α ELISA 試劑盒(美國R＆D公司產品，進口分裝);氟西汀(浙江麗晶化學有限公司，分析純)。其它試劑為國產分析純。環球牌針灸針(蘇州環球針灸醫療器械有限公司);搖床;臺式冷凍離心機;超聲勻漿器等。

1.3 造模方法

［7］方法改進，采用孤養結合慢性應激方法造模。大鼠適應性飼養1周后，28天造模過程中每日隨機接受一種不同的應激刺激，具體方法包括:夾尾2 min;束縛3 h;斷食24 h;斷水24 h;冷水游泳5 min(10℃);振蕩30 min。

1.4 治療方法

針刺方法:參考《實驗針灸學》［8］，選取“百會”及“內關”穴。用30號0.5寸毫針治療，斜刺“百會”，直刺單側“內關”，進針后捻轉，留針10 min。

給藥方法:每日應激造模前用氟西汀(10 mg/kg)灌胃給藥。

1.5 ELISA法檢測血清及腦IL－1β、IL－6和TNF－α含量

斷頭處死大鼠，取血，靜置后離心(4℃，3000 rpm，15 min)，取上清，－80℃保存。斷頭后迅速取出海馬和額葉皮層，置于液氮中，然后移入－80℃冰箱保存。檢測前進行腦組織勻漿。采用ELISA試劑盒檢測IL－1β、IL－6、TNF－α 含量，嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.6 統計方法

采用SPSS17.0軟件進行統計分析，數據以均數±標準差(±s)表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05作為差異顯著性標準。

2 結果

2.1 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－1β含量的比較

表1 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－1β含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

表1 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－1β含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

30.17 ±3.57 23.95 ±2.38 26.04 ±4.93模型組 44.51 ±3.46＊＊ 45.00 ±4.87＊＊ 45.78 ±7.95＊＊針刺組 33.12 ±4.93## 27.32 ±4.04＊＊## 32.47 ±4.76*##氟西汀組 27.95 ±3.89## 22.93 ±4.22## 27.71 ±5.06組別 血清 海馬 額葉皮層正常組##

由表1可見，造模后，模型組與正常組比較，血清IL－1β含量顯著升高，差異具有統計學意義(P＜0.01);針刺、氟西汀治療后，血清IL－1β含量與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。模型組與正常組比較，海馬IL－1β含量顯著升高(P＜0.01);經針刺、氟西汀治療，海馬IL－1β含量顯著降低(P＜0.01)。與正常組比較，模型組額葉皮層 IL－1β含量顯著升高(P＜0.01);針刺、氟西汀治療使額葉皮層IL－1β含量顯著降低(P ＜0.01)。

2.2 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－6含量的比較

表2 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－6含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

表2 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層IL－6含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

注:與正常組比較，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

23.91 ±1.84 20.47 ±2.25 22.78 ±3.15模型組 46.59 ±8.10＊＊ 47.12 ±4.99＊＊ 53.36 ±7.92＊＊針刺組 33.04 ±4.12＊＊##29.92 ±6.54＊＊## 34.40 ±6.20＊＊##氟西汀組 22.77 ±1.61## 20.48 ±2.66## 25.27 ±3.11組別 血清 海馬 額葉皮層正常組##

由表2可見，造模后，模型組與正常組比較，血清IL－6含量顯著升高，差異具有統計學意義(P＜0.01);針刺、氟西汀治療后，血清IL－1β含量與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。模型組與正常組比較，海馬IL－6含量顯著升高(P＜0.01);經針刺、氟西汀治療，海馬IL－6含量顯著降低(P＜0.01)。與正常組比較，模型組額葉皮層IL－6含量顯著升高(P＜0.01);針刺、氟西汀治療使額葉皮層IL－6含量顯著降低(P ＜0.01)。

2.3 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層TNF－α含量的比較

表3 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層TNF－α含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

表3 各組大鼠血清、海馬、額葉皮層TNF－α含量的比較(±s，n=8，單位:pg/ml)

注:與正常組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與模型組比較，##P ＜0.01。

21.47 ±1.89 21.33 ±1.99 19.78 ±3.74模型組 38.00 ±5.66＊＊ 40.09 ±5.98＊＊ 35.79 ±5.06＊＊針刺組 25.26 ±4.82## 28.47 ±5.27＊＊## 25.82 ±4.36*##氟西汀組 20.07 ±2.05## 21.21 ±3.27## 20.18 ±2.70組別 血清 海馬 額葉皮層正常組##

由表3可見，造模后，模型組與正常組比較，血清TNF－α含量顯著升高，差異具有統計學意義(P＜0.01);針刺、氟西汀治療后，血清TNF－α含量與模型組比較顯著降低(P＜0.01)。模型組與正常組比較，海馬TNF－α含量顯著升高(P＜0.01);經針刺、氟西汀治療，海馬TNF－α含量顯著降低(P＜0.01)。與正常組比較，模型組額葉皮層TNF－α含量顯著升高(P＜0.01);針刺、氟西汀治療使額葉皮層TNF－α含量顯著降低(P ＜0.01)。

3 討論

慢性應激是引發抑郁癥的重要原因。研究發現［9－10］，慢性應激可引起免疫系統激活，單核 －巨噬細胞活動增加，炎性細胞因子(IL－1，IL－6，TNF－α等)釋放增加。抑郁癥患者血中可檢測到 IL－1β、IL－6和 TNF－α水平增高［10］。目前認為，炎性細胞因子通過對神經遞質、神經內分泌等方面的影響，引起抑郁癥狀。

已有研究表明，IL－1β、IL－6和TNF－α與抑郁癥的某些行為改變有一定的相關性。將IL－1β注射到大鼠腦室，可以引起發熱、精神運動遲滯、睡眠障礙、體重減輕、食欲減退、快感缺失、認知和記憶損害等病態行為，類似人的抑郁癥狀［11］。IL－6缺失小鼠在強迫游泳和懸尾實驗中出現絕望減少和快感增加的行為，提示IL－6缺失小鼠能夠拮抗應激引起的抑郁作用［12］。TNF－α基因敲除小鼠表現出空間學習記憶能力提高，而TNF－α過度表達的小鼠則出現空間學習和記憶功能損傷［13］。

本研究結果表明，慢性應激引起大鼠血清IL－1β、IL－6和TNF－α含量顯著升高，針刺可以降低模型大鼠血清中上述炎性細胞因子水平。研究顯示［14］，針刺可以顯著降低慢性應激抑郁大鼠血清IL－6和TNF－α含量，與本實驗結果一致。有研究觀察到束縛應激模型大鼠血清TNF－α含量降低［15］，可能是應激方法和時程不同所造成的差異。

慢性應激損害與認知和情緒密切相關的邊緣系統，特別重視的是海馬。海馬是抑郁癥的主要病變腦區之一［16］。額葉皮層在情緒調節中起重要作用，抑郁癥患者出現額葉皮層的損害［17］。筆者的結果表明，慢性應激引起大鼠海馬和額葉皮層的IL－1β、IL－6和TNF－α含量顯著升高;而針刺可以降低上述細胞因子在相關腦區的表達。這提示了針刺可以抑制腦內炎性細胞因子的產生，緩解炎癥反應對大腦的損害，這可能是針刺發揮抗抑郁效應的途徑之一。

抑郁癥屬于中醫“郁癥”范疇，治療時應調氣安神為主。本實驗以百會為主穴。百會位于巔頂，是手足三陽經及督脈、足厥陰交會之處，頭為“精明之府”。百會是臨床上針灸治療抑郁癥的常用穴位［2，6］?，F代醫學研究表明，針刺百會可抑制抑郁大鼠亢進的下丘腦－垂體－腎上腺皮質軸［7］，促進海馬腦源性神經營養因子(BDNF)及其受體 TrkB的表達，改善腦損傷［18］。內關，是心經絡穴，八脈交會穴之一，通陰維脈，《甲乙經》:“心澹澹而善驚恐，心悲，內關主之”。兩穴合用，可調神醒腦、緩解抑郁。

本實驗結果表明，針刺可以降低慢性應激抑郁大鼠血清、海馬、額葉皮層炎性細胞因子IL－1β、IL－6和TNF－α的表達，緩解外周和中樞免疫炎癥反應。這可能是針刺發揮抗抑郁效應的機制之一。

參考文獻:

［1］羅和春，Halbriech U，沈漁邨，等.電針與氟西汀治療抑郁癥療效的對照研究［J］.中華精神科雜志，2003，36(4):215 －219

［2］段冬梅，圖婭，陳利平.電針與百優解對伴軀體癥狀抑郁癥有效性的評價［J］.中國針灸，2008，28(3):167 －170

［3］戶麗，梁佳，金樹英，等.針刺治療抑郁癥作用機制近5年研究進展［J］.針刺研究，2013，38(3):253 －258

［4］Maes M，Vandoolaeghe E，Ranjan R，et al.Increased serum interleukin－ 1 receptor－ antagonist concentrations in major depression［J］.J Affect Disord，1995，36(1 －2):29 －36

［5］Song C，Halbreich U，Han C，et al.Imbalance between pro－ and anti－ inflammatory cytokines，and between Th1 and Th2 cytokines in depressed patients:the effect of electroacupuncture or fluoxetine treatment［J］.Pharmacopsychiatry，2009，42(5):182 －188

［6］孫華，趙慧，張捷，等.針刺百會－足三里對抑郁癥患者血清炎性細胞因子水平的影響［J］.中國針灸，2010，30(3):195 －199

［7］梁佳，盧峻，王俊仁，等.不同針刺方法對慢性應激抑郁大鼠下丘腦 CRH基因表達及血清ACTH、CORT的影響［J］.北京中醫藥大學學報，2012，35(4):265 －268

［8］張露芬.實驗針灸學［M］.北京:化學工業出版社，2010

［9］Hamer M，Stepton A.Association between physical fitness，parasympathetic control，and pro － inflammatory responses to mental stress［J］.Psychosomatic Medicine，2007，69(7):660 －666

［10］Dantzer R.Cytokine，sickness behavior，and depression［J］.Immunol Allergy Clin North Am，2009，29(2):247 －264

［11］Goshen I，Kreisel T.Brain interleukin－1 mediates chronic stressinduced depression in mice via adrenocortical activation and hippocampal neurogenesis suppression［J］.Mol Psychiatry，2008，13(7):717－728

［12］Chourbaji S，Urani A，Inta I，et al.IL － 6 knockout mice exhibit resistance to stress－induced development of depression－like behaviors［J］.Neurobiology of Disease，2006，23(3):587 －594

［13］Golan H，Levav T，Mendelsohn A，et al.Involvement of tumor necrosis factor alpha in hippocampal development and function［J］.Cerebral Cortex，2004(14):97 －105

［14］李麗萍，華金雙，蘭敬昀，等.針刺百會和太沖穴對慢性應激抑郁模型大鼠細胞因子的影響［J］.針灸臨床雜志，2006，22(9):49－50

［15］陳磊，魏惠芳，仲大磊，等.針灸百會穴對束縛應激模型大鼠血清TNF－α及IL－1含量變化的影響［J］.吉林中醫藥，2012，32(1):76－78

［16］盧峻，時宇靜，費宇彤，等.抑郁癥與神經可塑性［J］.中國心理衛生雜志，2006，20(2):43 －46

［17］Dwivedi Y，Rizavi HS，Zhang H，et al.Aberrant extracellular signalregulated kinase(ERK)1/2 signalling in suicide brain:role of ERK kinase 1(MEK1)［J］.International Journal of Neuropsychopharmacology，2009，12，1337 －1354

［18］盧金花，姜勁峰，王玲玲，等.電針治療抑郁模型大鼠快速起效海馬區BDNF－TrkB機制研究［J］.針灸臨床雜志，2011，27(5):51－54