HPLC法測定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量

嚴明娟 錢硯燕

1.云南省藥物依賴防治研究所；2.昆明振華制藥有限公司，云南昆明650000

鹽酸美沙酮（Methadone hydrochloride）屬于人工合成的二苯甲烷類麻醉性鎮痛藥之一，并且是當今許多國家用于戒毒和維持療法的一種有效藥物[1-2]。在當前，國內對阿片類的成癮者主要采取鹽酸美沙酮口服溶液維持治療的方式。鹽酸美沙酮含量的測定選擇紫外分光光度法是以國家藥品標準WS1-(X-514)-2003Z 為依據；而2010年版《中國藥典》（(二部）規定采用HPLC法測定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量。各取4個批次比較兩者含量測定結果，見表1，表2。

表1 紫外分光光度法測鹽酸美沙酮含量

表2 HPLC法測鹽酸美沙酮含量

試驗結果表明：采用不同的方法測定，并不過大影響鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量。但HPLC法較紫外分光光度法卻有著簡單、快速、準確的優勢突出，比較適合推廣，因此建立了HPLC法測定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量，該文結合該我所紫外分光光度法實踐，對HPLC法測定鹽酸美沙酮口服溶液中鹽酸美沙酮的含量進行回顧分析。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

①紫外分光光度法儀器：紫外分光光度計（TU-1800，北京普析通用儀器有限責任公司）；島津電子分析天平BT25S。②HPLC法儀器：島津C-R4A型數據處理機；島津LC-2010A型高效液相色譜儀。

1.2 試藥

由中國藥品生物制品檢驗所提供鹽酸美沙酮對照品，符合藥典規格（含量:100.0%，批號：171243-200602）。

鹽酸美沙酮口服溶液：經云南省藥物依賴防治研究所生產，批號（紫外分光光度法）：120401、120402、120403、120404、120405、120406、120407、120408、120409、120410；批號（HPLC法）：130401、130402、130403、130404、130405、130406、130407、130408、130409、130410。

規格為1 mL∶1 mg。優級純的甲醇和純化水；別的試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 紫外分光光度法測定方法

測定以國家藥品標準WS1-(X-514)-2003Z 為依據進行，在353 nm 波長處測定所取對照品溶液、樣品溶液的吸光度。

2.2 HPLC法測定方法

測定以《中國藥典》2010年版(二部) 附錄V A 高效液相色譜譜法為依據進行。

色譜條件及系統適用性試驗。Spherisorb C18 色譜柱 （5×200 mm，大連物化所）；流動相：無水甲醇-四氫呋喃-水（24∶16∶60）；流速：0.6 mL/min；柱溫：25 ℃；檢測波長：λ=270 nm；用2 mol/L磷酸或氫氧化鈉溶液作為流動相調節pH 到6.0；靈敏度：0.02AUFS。定量方法：外標峰面積標準曲線法。

含量測定方法。精密量取鹽酸美沙酮口服溶液10 μL，注入液相色譜儀進行測定，并對色譜圖進行記錄；按外標法計算峰面積，經10次測定10批樣品，平均含量分別為101.69%，

100.45 %，104.50%，103.00%，99.00%，97.60%，100.20%，98.73%，100.12%，97.92%；并與國家藥品標準WS1-(X-514)-2003Z 中紫外分光光度法的測定方法，運用相關儀器進行對比實驗，同樣測定了10次，其平均結果分別相應為：99.28%，98.56%，98.83%，99.01%和100.45%，100.99%，99.37%，99.19%，99.10%，98.30%。

線性關系。把鹽酸美沙酮對照品25 mg 準確稱取，溶解是加入甲醇后并對其進行稀釋，按照25 mL 定容，進行配置鹽酸美沙酮標準溶液的含量為1 mg/mL。將上述色譜作為分析標準，一一分析進標準溶液1、3、5、7、10、12 μl，并做記錄行色譜圖工作，測算各次的峰面積。鹽酸美沙酮含量X 為橫坐標，峰面積Y 為縱坐標，做線性回歸分析，鹽酸美沙酮的濃度在10～100 μg/mL 的范圍內與其峰面積呈良好線性關系，線性方程為Y=2.2×102X+4.5×102，相關系數r=0.9998（n=6）。

試驗回收率。先取30 mg 空白基質，分別按6份精密稱定，再各自放入50 mL 量瓶之中，分別把對照品適量的鹽酸美沙酮精密加入并稱定，并加入流動相溶解讓其含約相當于樣品量的80%、100%、120%鹽酸美沙酮的量，測定以含量測定法為依據行，計算后獲得99.8%的平均回收率，0.85%的RSD。試驗沒有受到空白基質及溶劑的干擾，見表3。

表3 回收率試驗

精密度試驗。分別先取6份連續進樣的鹽酸美沙酮對照溶液以及樣品溶液，在同一日內完成日內差試驗測定，平均為0.57%（n=6）；測定日間差試驗在連續5 d 內進行，平均為0.66%（n=6）。

重復性試驗。6份溶液樣品做鹽酸美沙酮的連續測定，10 μL的進樣，0.5%的RSD。

溶的穩定性試驗。在室溫下取對照溶液及樣品溶液放置24 h，接著每隔1 h 進樣10 μL，測定其峰面積，得出對照溶液及樣品品溶液峰面積穩定性比較好，1.0%RSD。

3 討論

鹽酸美沙酮作為常用的一種麻醉性鎮痛臨床藥物，當前已經其為被很多國家用于有效進行戒毒和維持療法的一種藥物。屬于二苯基甲烷類的美沙酮，也屬于阿片受體激動劑之一，能在中樞μ 和阿片受體產生激活，同時也能非競爭性拮抗NMDA 受體。對于人體能夠產生包括鎮痛、縮瞳、呼吸抑制、抗利尿等一系列藥理作用效應的美沙酮。所組成的由左旋和右旋異構體混合的消旋體基本都是臨床所用的美沙酮。左旋體幾乎成為其鎮痛作用的主要來源，而阿片受體則主要對中樞神經系統產生作用。在美沙酮與μ 受體的兩者之間的親和力極強。

在研究結果中，筆者還發現，美沙酮這一受體拮抗劑是屬于非競爭性的，通過拮抗NMDA 受體還可以產生一種鎮痛效果?？诜}酸美沙酮后能完全吸收，有著比較大的脂溶性，能高度結合血漿蛋白（85%），也能很好的與α 酸性糖蛋白融合，遍布于體內，特別是肝、脾臟、肺和腎等部位。利用度高的生物（90%），與3倍的嗎啡的大體相當[3]。血藥濃度峰值由于胃腸道給藥3 h 而達到，其能能維持2～6 h 的血峰濃度。15 h 的t1/2，經過口服后鎮痛作用能有效發揮，并能發揮24～32 h 的抑制戒斷癥狀作用。0.48～0.86 mg/L 為治療的血液質量濃度，2 mg/L 為中毒的血液質量濃度，致死血液有著>4 mg/L 的質量濃度[4-5]。在肝臟進行代謝活動，其中藥量沒發生變化的比服入量要少于0%可以從尿中和大便中排出來。選用甲醇-水系統作為流動相來進行鹽酸美沙酮口服液中鹽酸美沙酮含量的測定，對于色譜柱的使用壽命的延長有利，實驗經費也可節約，從pH值在5.0～7.0 穩定來考慮，因而調節pH值為6.0。

按國家藥品標準WS1-(X-514)-2003Z 中紫外分光光度法進行鹽酸美沙酮含量的測定，存在一定的不足?！吨袊幍洹?010年版(二部)采用HPLC法測定鹽酸美沙酮的含量。在該研究中用HPLC法對鹽酸美沙酮口服溶液中的鹽酸美沙酮的含量進行測定，其結果證明這一方法建起的HPLC法不僅非常準確靈敏、操作不復雜，而且有著很高的回收率，是比較好的質量控制鹽酸美沙酮口服液的方法。

[1]肖國椿，肖李莉，賴朝東,等.美沙酮與丁丙諾啡聯合梯度治療1028例海洛因依賴者的臨床療效分析[J].贛南醫學院學報，2001（21）：136.

[2]何艷，趙幸福，楊荷葉.美沙酮與丁丙諾啡治療海洛因依賴的對照研究[J].健康心理醫學雜志，2001（9）：295.

[3]林彩，代青，劉松青,等.高效液相色譜法測定人血漿中鹽酸美沙酮濃度[J].中國藥物依賴性雜志，2003，12(2)：126.

[4]王文甫.關于鹽酸美沙酮維持治療應考慮的幾個問題[J].中國藥物濫用防治雜志，2004(4)：244.

[5]徐本樹，率銀良，王志強，等.鹽酸美沙酮維持治療臨床療效觀察[J].中國藥物濫用防治雜志，2005(2):72.