豬圓環病毒與豬丹毒、豬巴氏桿菌病混合感染的診治

劉濤，王瑞，溫新杰

（1.信陽農林學院河南信陽464000；2.確山縣畜牧局河南駐馬店463200）

豬圓環病毒與豬丹毒、豬巴氏桿菌病混合感染的診治

劉濤1，王瑞1，溫新杰2

（1.信陽農林學院河南信陽464000；2.確山縣畜牧局河南駐馬店463200）

通過臨床癥狀、病理剖檢及實驗室診斷工作，確定一例由豬圓環病毒、豬丹毒、豬巴氏桿菌混合感染病例，并提出針對性的控制方案。

圓環病毒；豬丹毒；豬巴氏桿菌；PCR

2015年1月，駐馬店市確山縣某豬場持續發生以發熱、體表出現彌漫性皮膚出血為主要特征的疫情，豬場按按常規解熱及抗生素治療，病情未得到控制，最后通過實驗室進行病原檢測，確診為豬圓環病毒、豬丹毒、豬巴氏桿菌病混合感染，經篩選敏感藥物以采取針對性的綜合防控措施控制了疫情。

1 發病情況

2015年1月初，駐馬店確山縣某規?；i場育肥豬持續發生以體溫升高、呼吸困難、體表出現彌漫性出血為特征的疫病，豬場先后按多家飼料公司、獸藥廠技術員推薦的治療藥物和控制方案進行處理,用過治療呼吸道疾病的氟苯尼考、潔霉素、黃芪多糖等藥物，用藥后效果不明顯，該病發病率達10%以上，病死率達90%。

2 臨床表現

病豬精神沉郁，體溫升高達40～41.5℃，呼吸困難，喘氣明顯，耳根、頸部、背部，胸前、腹壁和四肢內側等處，出現鮮紅色充血區，病程長者中心部位形成黑褐色痂皮（見圖1、圖2）。

3 剖檢變化

淋巴結腫大，尤其是腹股溝淋巴結腫大明顯，切面出血或灰白色；肺臟膨脹，質地實變，表面有灰白色斑塊。腎臟腫大變形，呈土黃色，被膜剝離后可見腎表面有暗紅色出血點（見圖3）。肝臟腫大黃染，膽囊充盈（見圖4）。

4 實驗室診斷

4.1 細菌學診斷

4.1.1 直接涂片觀察

無菌取病豬的脾、肺、腎臟、淋巴結、直接涂片,經革蘭氏染色，鏡下可見有革蘭氏陽性細長桿菌和兩端鈍圓的短桿菌。

4.1.2 細菌分離鑒定

無菌取剖檢病豬的脾、肺和腎接種于鮮血瓊脂平板在37℃培養24 h后在平板上可見到光滑、圓形，邊緣整齊的白色菌落，一種在血平板上不溶血，另一種有不完全溶血現象（見圖5、圖7）。經染色鏡檢后可見革蘭氏染色陰性細小桿菌和兩端鈍圓球桿菌，經生化鑒定為丹毒絲菌和巴氏桿菌[1-2]（見圖6、圖8）。

4.1.3 動物試驗

取脾臟、肝臟、腎臟等臟器，用生理鹽水制成1∶10懸液，以0.2 mL經皮下接種小鼠2只，在接種后3 d，試驗小鼠2只均發生死亡。從其心血和腎臟中檢出紅斑丹毒絲菌和巴氏桿菌。

4.2 藥敏試驗

將兩種細菌液分別涂布于巧克力瓊脂平板，以紙片法進行藥物敏感試驗，藥物包括氟苯尼考、丁胺卡那霉素、紅霉素、頭孢噻呋鈉、阿莫西林、氨芐青霉素、卡那霉素、慶大霉素、環丙沙星、氧氟沙星、強力霉素、四環素、恩諾沙星等13種。結果表明，丹毒絲菌對恩諾沙星、阿莫西林高度敏感，巴氏桿菌對阿莫西林高度敏感。

4.3 病毒的檢測

4.3.1 引物設計與合成

根據GenBank已發表的序列，應用Primer-Premier5.0軟件設計豬圓環病毒引物。上游引物：5'-GTTATGGTATGGCGGGAGG-3'；下游引物：5'-CCGCTCTGTGCCCTTTGA-3'。引物擴增特異性目的片段，出現189 bp大小條帶判斷為PCV2陽性。

4.3.2 DNA的提取

按基因組DNA提取試劑盒和純化試劑盒說明書進行病料組織中DNA提取及純化。

4.3.3 PCV2檢測方法的建立

2×MasterMix 12.5 μL，PRV上游和下游引物各2 μL，DNA模板8.5 μL。95℃預變性5 min，然后95℃變性30 s，53℃退火30 s，72℃延伸30 s，35個循環，72℃延伸10 min。

4.3.4 PCR檢測結果（見圖9）

圖9 PCR擴增產物的電泳

根據以上臨診斷癥狀、剖檢病變和實驗室檢測結果，綜合判定該豬場發病是由豬圓環病毒2型和豬丹毒及豬巴氏桿菌混合感染引起。

5 控制措施

1）發病豬只，建議使用阿莫西林和氟尼辛葡甲胺注射液，大群添加阿莫西林（克拉維酸鉀）和恩諾沙星粉劑。對病情較重的豬只可用5%葡萄糖加VC以及地塞米松靜脈注射[3]。

2）平時應堅持定期對圈舍四周、地面、用具進行消毒。

3）做好保溫與通風干燥工作。

4）做好豬群圓環疫苗免疫工作。

6 小結

我國許多養豬場環境污染嚴重，豬病非常復雜，以多病原混合感染和繼發感染為主，豬場濫用抗生素導致許多病原性細菌已產生廣泛耐藥性，發病后用藥效果不理想。診斷豬病要結合流行病學、臨床癥狀、剖檢病變以及實驗室診斷進行綜合判定才能確診，否則只會誤診和漏診，導致延誤治療時機和加大損失。本次疫情通過全面診斷尤其是借助實驗室檢測技術，判斷發病原因為豬圓環病毒Ⅱ型和豬丹毒及豬巴氏桿菌混合感染引起。

我國由郎洪武等于2001年首次報道從豬群中分離到了PCV-2以來，近幾年來由于圓環病毒在豬場陽性感染率的持續升高，導致一些生產條件一般，同時疫苗與飼料更迭頻繁的豬場內部豬病發病復雜化。如同此次病例，由于豬群免疫力下降，內源性細菌—巴氏桿菌通過釋放皮膚壞死毒素加之丹毒絲菌產生大量的神經氨酸酶，引起毛細血管內皮細胞膜通透性升高，直接損傷血管內皮，最終在臨床上表現出皮膚彌漫性出血征。

周緒斌等于2009年報道了中國10個省市36個規?；i場豬丹毒血清流行病學調查發現母豬胎次越高陽性率越高[4]。由于受近幾年生豬行情下滑影響，中小規模豬場母豬淘汰速度放緩，這為丹毒絲菌等病原體在種豬群中滋生創造了條件。

豬病的預防是一個永恒的話題，只有真正地尊重生豬生產規律，創造有利條件提高豬只自身的免疫力水平，才能在層出不窮的豬病面前，做到從容不迫，而不是被動應付?！觯ň庉嫞豪钣甏龋?/p>

[1] 白文彬,于康振.動物傳染病診斷學[M].北京:中國農業出版社. 2000,462-467.

[2] 唐先春,吳斌,索緒峰,等.豬多殺性巴氏桿菌的分離鑒定及生物學特性研究[J].畜牧獸醫學報.2005,36(06):590-595.

[3] Barbara E.Straw,Jeffery J.Zimmerman.[M].北京:中國農業大學出版社.2011,709-721.

[4] 周緒斌,丹尼,李聰,等.豬丹毒-古老的傳染病是否從中國規?；i場消失了？[J].今日養豬業.2009,5:22-24.

圖1 耳根、脊背有紫色斑塊

圖2 腹壁有彌漫性出血斑

圖3 腎臟腫大，皮質部出血

圖4 肝臟黃染，膽囊充盈

圖5 血平板表面白色菌落

圖6 腎臟分離出丹毒絲菌

圖7 血平板有白色菌落，不完全溶血

圖8 肺臟分離出巴氏桿菌

《家禽飼養中如何防止霉菌毒素中毒》文中配圖

圖1 玉米野外存放，易遭受雨水雪水浸泡，容易發霉變質。

圖2 肉雞霉菌毒素感染，雞群大小不均勻，不像同一日齡的雞。

圖3 上為正常腺胃，下面為腺胃炎病雞的腺胃，異常腫大呈圓球狀。

圖4 霉菌毒素感染一日齡肉雞，肌胃角質層潰瘍呈棕黃色。

圖5 肉雞霉菌毒素感染，腺胃壁極度增厚，乳頭潰瘍凹陷，雞胃角質層靠近連接處邊緣開裂潰瘍。

圖6 霉菌毒素感染，肉雞嚴重的肌胃炎、腺胃炎。

圖7 霉菌毒素感染，蛋雞肌胃角質層出現潰瘍灶。

圖8 蛋雞霉菌毒素感染，右側肌胃角質層顏色變淺、增厚，左側肌胃角質層四分五裂。

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.03.038

市科技攻關項目：豫南地區豬場免疫抑制性傳染病優勢毒株的分子流行病學及免疫方案的確定（130017）。

劉濤，男（1979-），漢，副教授，碩士，執業獸醫師；研究方向：規?；i場傳染病防控技術；E-mail:decai178@163.com。