固相萃取-高效液相色譜熒光法測定食用油中苯并（a）芘

馮 輝 謝君紅 馬麗萍

（余姚市食品檢驗檢測中心，余姚 315400）

固相萃取-高效液相色譜熒光法測定食用油中苯并（a）芘

馮 輝 謝君紅 馬麗萍

（余姚市食品檢驗檢測中心，余姚 315400）

建立固相萃取-高效液相色譜法測定食用油中苯并（a）芘的檢測方法。樣品經苯并（a）芘專用SPE小柱凈化、濃縮，沃特世反相C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱進行分離，流動相為乙腈∶水（95∶5，體積比），流量1.0 mL／min，激發波長384 nm，發射波長406 nm。結果表明，苯并（a）芘在濃度范圍0.2～50μg／kg內線性良好，相關系數為0.999 9，最低檢出限為0.1μg／kg，精密度RSD＜3%，回收率88.6%～101%。本方法快速便捷、準確率高、重現性好、可同時處理大量樣品，為食用油中苯并（a）芘的測定提供參考。

固相萃取 高效液相色譜 熒光檢測 苯并（a）芘 食用油

苯并（a）芘（Benzo（a）pyrene）是一種多環芳香族碳氫化合物，難溶于水，易溶于環己烷、苯、甲苯、丙酮等有機溶劑，高活性致癌、致畸、致突變物質，對人類基因有害。采用浸出法制油時，如果溶劑質量不符合要求，輕汽油（作為溶劑）中含有較高的多環芳烴類，可造成對油脂的污染。油脂在使用過程中因油溫過高，而且反復使用，致使油脂在高溫下發生熱聚，形成多環芳烴類物質。苯并（a）芘隨油炸食品被攝入人體后，能迅速被腸道吸入血液并分布于全身，易導致皮膚癌、肺癌、膀胱癌、乳腺癌等，是世界公認的三大強致癌物質之一。我國在衛生標準中規定苯并（a）芘在食用油中的殘留為10μg／kg以下。目前，食品中苯并（a）芘的測定方法有熒光法［1］、目測比色法［1］、液相色譜法［2-3］等，研究采用成品固相萃取柱進行樣品前處理、凈化、濃縮，高效液相熒光檢測器測定食用油中的苯并（a）芘，操作步驟簡單快捷，擬建立快速準確的檢測食用油中的苯并（a）芘的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

2695型液相色譜儀帶2475型熒光檢測器：美國沃特世公司；SC-8L-150型固相萃取儀：廣州智真生物科技公司；OA-SYS型氮吹儀：美國Organomation公司；GENIUS 3漩渦混合器：德國艾卡公司；SK5200H超聲波清洗機：上?？茖Ч?；DI型超純水儀：德國賽多利斯公司；BAP專用 SPE小柱（500 mg／6 mL）：上海安譜公司；BAP苯并（a）芘標準品（99.6%）：德國DR.公司；色譜純二氯甲烷、正己烷、乙腈：迪馬科技公司；試驗用水為超純水（18.3 MΩ×cm）。

1.2 試驗方法

1.2.1 提?。悍Q取試樣0.5 g（精確至0.001 g），加入3 mL正己烷漩渦混合10 s，待凈化。

1.2.2 凈化洗脫濃縮：Bap專用SPE小柱使用前依次用5 mL二氯甲烷，5 mL正己烷活化。將待凈化液上樣到小柱上，然后用2 mL正己烷潤洗樣品瓶，上樣到柱上，保持1.0 mL／min流速過柱。用10 mL正己烷淋洗小柱，流出液棄去。用5 mL二氯甲烷洗脫小柱，收集洗脫液，40℃氮氣吹干，1 mL乙腈定容，超聲1 min，漩渦混合10 s，過0.22μm PTTE針式濾器過濾，上機檢測。

1.3 標準工作溶液的配置

稱取標準品0.100 g，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度，配成1.00 mg／mL標準儲備液，4℃冰箱保存。

標準工作溶液配制：準確移取相應標準儲備液，用乙腈稀釋成 0.10、0.20、0.50、1.0、5.0、10.0、20.0 μg／kg的系列標準工作溶液，臨用前配制。

1.4 色譜條件

沃特世反相C18色譜柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫30℃，流動相為乙腈∶水（95∶5，體積比），流量1.0 mL／min，激發波長384 nm，發射波長406 nm，進樣量10μL。

2 結果分析

2.1 固相萃取小柱的選擇

試驗比較了安譜BAP專用SPE小柱，和GB／T 22509—2008推薦的人工填裝中性氧化鋁柱。采用商業固相萃取柱，與填裝的氧化鋁柱相比，不需要進行復雜的活度調節和活性測試，節省大量時間，穩定性好，整個檢測操作時間不超過1 h，溶劑使用量少，回收率較高。標準品、空白樣品添加標準品圖譜見圖1。

2.2 線性范圍和檢出限

對系列標準工作溶液按照色譜條件進樣分析，以峰面積定量，得到標準溶液濃度與峰面積之間的線性回歸方程，在線性范圍0.10～50μg／kg線性方程1.22×104X-6.21×103，線性相關系數為0.999 9。按3倍信噪比計算，方法的檢出限（LOD）約為0.02μg／kg，按10倍信噪比計算，方法的定量下限（LOQ）約為0.10μg／kg。

2.3 回收率和精密度

取空白大豆油樣品12份，按3個加標水平加標，按1.2前處理和色譜條件測試，測定苯并（a）芘的加標回收率見表1，回收率88.6%～101.0%，相對標準偏差均小于2%，精密度良好，滿足分析要求。

該BAP專用SPE小柱的理論柱容量約為5 mg，理論過載濃度約為10 g／kg，當加標水平為500μg／kg時，平均回收率為94.5%，RSD為2.4%，能夠滿足檢測需要。國家限量標準對苯并（a）芘規定為不超過10μg／kg，如果實際樣品檢測過程中濃度大于500 μg／kg時，考慮到儀器檢測范圍可增加提取溶劑，吸取一定比例提取液重新過柱檢測。

表1 加標回收率和精密度試驗結果（n＝3）

2.4 未知樣品中苯并（a）芘的含量測定

利用本方法對市售的10種樣品進行檢測，結果見表2。由分析結果可知，苯并（a）芘含量均未超過10μg／kg的國家限量標準。

表2 未知樣品中苯并（a）芘的含量

3 結論

采用成品商業固相萃取柱對食用油中苯并（a）芘進行凈化、提取，用高效液相色譜儀熒光檢測器對苯并（a）芘進行測定，相比GB／T 22509—2008《動植物油脂苯并（a）芘的測定反相高效液相色譜法》，大大縮短檢測時間、節約試劑，準確率高，重現性好，線性關系、精密度和準確度均獲得滿意的結果，能夠更好地滿足食用油中苯并（a）芘的分析檢測。

［1］GB／T 5009.27—2003，食品中苯并（a）芘的測定［S］

［2］GB／T 22509—2008動植物油脂，苯并（a）芘的測定 反相高效液相色譜法［S］

［3］NY／T 1666—2008，肉制品中苯并（a）芘的測定 反相高效液相色譜法［S］

［4］王紅青，韓里明，屠海云，等.固相萃取-超高相液相色譜熒光法測定植物油中苯并（a）芘［J］.食品科學，2012，33（14）：216-218

［5］林慧，顏春榮，徐春祥.固相萃取-高相液相色譜法測定肉制品中中苯并（a）芘［J］.肉類研究，2012，26（6）：24-27

［6］牟鈞.固相萃取—高效液相色譜法測定食品中的苯并（a）芘［J］.糧油食品科技，2011，19（3）：42-44

［7］李進偉，王興國，金青哲.食用油中苯并（a）芘的來源、檢測和控制［J］.中國油脂，2011，36（6）：7-11

［8］鄭睿行，夏愛萍，祝華明，等.凝膠滲透色譜-液相色譜法測定熏烤肉制品中的苯并（a）芘［J］.食品研究與開發.2013，36（12）：76-78.

Determination of Benzo（a）pyrene in Edible Oil by HPLC with Solid Phase Extraction

Feng Hui Xie Junhong Ma Liping
（Yuyao Food Inspection and Testing Center，Yuyao 315400）

A solid phase extraction-high performance liquid chromatography（HPLC）method.was determined Benzo（a）pyrene in edible oil.The sample was purified and concentrated on a benzo（a）pyrene special solid phase extraction column（SPE）and separated on a Waters reversed phase C18（150 mm×4.6 mm，5μm）chromatographic column by using amobile phase composed of acetonitrile and water（95∶5，V／V）at a flow rate of 1.0 mL／min，with the excitation wavelength of 384 nm，and the emission wavelength of 406 nm.The result showed that benzo（a）pyrene showed good linearity relationship over the concentration range of 0.2～50μg／kg，a coefficient correlation was 0.999 9，the lowest limit of detection was0.1μg／kg，and the precision（RSD）was below 3%，the recovery rate was between 88.6%～101%.Themethod was rapid，convenient，high accuracy and good reproducibility，and could handle a large number of samples at the same time，and suitable determination for Benzo（a）pyrene in Edible oil.

solid-phase extraction，high performance liquid chromatography，fluorescence detection，benzo（a）pyrene，edible oil

TQ646

A

1003-0174（2015）07-0108-03

2014-01-29

馮輝，男，1980年出生，工程師，食品科學與工程