金訶子低溫提取物對6種標準菌株的抑制作用觀察

趙小霞，邱麗君，蘇衛東，宣成睿，孫鵬，楊麗敏

(1天津市第四中心醫院，天津300140;2內蒙古醫科大學)

訶子又名訶黎勒、訶黎、訶梨、隨風子等，為君子科植物訶子及其變種絨毛訶子干燥的成熟果實，其味澀、性平，可祛三弊所引起的諸疾，有解毒之功效。文獻［1～4］報道，訶子對多種致病菌和病毒有抑制和殺滅作用，是一種抗菌譜較廣的單味藥材。金訶子是訶子當中的最佳品種，色顯金黃，故名為金訶子，具有澀腸止瀉、利咽、調和藥性、解毒等功效。本研究觀察了金訶子不同部位低溫提取物對6種標準菌株(大腸桿菌、痢疾桿菌、銅綠假單胞菌、白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌)在體外及體內試驗中的抑制作用，旨在為金訶子的成分、藥效研究及臨床應用提供理論基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物、菌株、動物及儀器 金訶子5種低溫提取物由本課題組自行制備，分別稱為1號部位、2號部位、3號部位、4號部位、5號部位，具體提取工藝見文獻［5］;營養瓊脂培養基購于上海伊華醫學科技有限公司;胃膜素購于重慶格瑞林藥業有限公司。大腸桿菌(細菌編號:25922)、痢疾桿菌(細菌編號:51285)、假單胞綠膿菌(細菌編號:27853)、變形桿菌(細菌編號:49001)、白色葡萄球菌(細菌編號:26101)、金黃色葡萄球菌(細菌編號:25923)購于中國生物制品檢定所。昆明鼠360只，18～22 g，雌雄各半，購自內蒙古大學動物室。DZG-303A離子純水機購于美國摩爾公司;培養箱購于日本日立公司;顯微鏡購于德國Leica公司;電子天平購于上海精科天平公司;PYX-DHS-35隔水式電熱恒溫培養箱購于上海醫療器械七廠。

1.2 金訶子低溫提取物體外抑菌實驗 將凍干的6種標準菌株進行復蘇、傳代培養，連續傳代3代，后用密集劃線法將每種菌株接種至1個固體培養皿中(共計6個培養皿)，將4個無菌鋼杯等間距對稱置于每個培養皿中。分別稱取一定量的5種金訶子提取物(1號部位、2號部位、3號部位、4號部位、5號部位)，每種金訶子提取物用0.45%鹽水配制成4種濃度，即 0、5、15、30 mg/mL，0.22 μm 微孔濾膜濾過除菌，每個鋼杯中加入200 μL，藥物含量分別為0、1、3、6 mg(共計30個培養皿)。37 ℃培養箱中培養24 h，觀察抑菌圈直徑，并用游標卡尺測量數據，單位為mm。

1.3 金訶子低溫提取物體內抑菌實驗 360只小鼠建立6種標準菌株的感染小鼠模型，小鼠腹腔注射含有5%胃膜素和致死劑量的標準菌株，每種模型60只。然后每種模型取10只小鼠灌胃給予0.45%鹽水1 mL(對照組)，另50只小鼠分別灌胃40 mg/mL金訶子低溫提取物1 mL，每種提取物灌胃10只小鼠(分別為1號部位、2號部位、3號部位、4號部位、5號部位組)，給藥后觀察24 h，觀察小鼠存活情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS10.0統計軟件。計量資料以±s表示，組間比較采用方差分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 金訶子低溫提取物體外抑菌實驗結果 結果見表1。由表1可知，金訶子5種提取物在體外對6種標準菌株均有生長抑制的作用(P均＜0.05)。

2.2 金訶子低溫提取物體內抑菌實驗結果 結果見表2。

表1 金訶子低溫提取物對6種標準菌株抑菌圈直徑比較(mm，±s)

表1 金訶子低溫提取物對6種標準菌株抑菌圈直徑比較(mm，±s)

金訶子低溫提取物抑菌圈直徑大腸桿菌 痢疾桿菌 假單胞綠膿菌 變形桿菌 白葡球菌 金葡球菌1號部位1 mg 8.3 ±1.0 10.5 ±0.2 14.3 ±0.3 8.7 ±0.3 9.5 ±0.4 10.6 ±0.3 3 mg 8.6 ±0.4 12.4 ±0.4 15.4 ±0.3 10.6 ±0.3 11.2 ±0.2 12.4 ±0.6 6 mg 13.5 ±0.6 14.4 ±0.2 22.3 ±0.5 10.6 ±0.2 14.5 ±0.2 14.3 ±0.4 2號部位1 mg 0 11.6 ±0.2 14.6 ±0.6 7.4 ±0.3 8.6 ±0.3 7.3 ±0.5 3 mg 7.4 ±0.6 12.6 ±0.4 14.6 ±0.3 11.6 ±0.3 10.3 ±0.3 8.4 ±0.7 6 mg 9.3 ±0.5 16.2 ±0.3 22.4 ±0.7 9.6 ±0.3 13.2 ±0.2 10.9 ±0.5 3號部位1 mg 8.5 ±0.5 11.7 ±0.2 16.7 ±0.5 7.8 ±0.3 8.4 ±0.4 8.4 ±0.4 3 mg 9.4 ±0.4 13.2 ±0.3 18.5 ±0.4 10.7 ±0.2 10.7 ±0.4 9.4 ±0.3 6 mg 12.4 ±0.6 16.5 ±0.2 24.5 ±0.3 9.7 ±0.3 11.8 ±0.4 12.4 ±0.2 4號部位1 mg 10.8 ±0.3 11.8 ±0.4 15.7 ±0.3 9.5 ±0.4 8.5 ±0.4 8.3 ±0.6 3 mg 11.7 ±0.3 12.5 ±0.4 17.8 ±0.4 11.6 ±0.4 11.4 ±0.4 10.3 ±0.3 6 mg 15.6 ±0.4 16.8 ±0.2 23.2 ±0.5 12.5 ±0.4 11.5 ±0.4 12.3 ±0.4 5號部位1 mg 8.2 ±0.2 8.9 ±0.3 11.4 ±0.4 15.3 ±0.5 15.4 ±0.3 15.2 ±0.3 3 mg 10.5 ±0.3 10.6 ±0.5 13.6 ±0.2 15.6 ±0.4 15.4 ±0.3 15.3 ±0.3 6 mg 13.4 ±0.8 10.2 ±0.4 15.8 ±0.3 15.6 ±0.3 15.4 ±0.2 15.6 ±0.3

表2 金訶子低溫提取物對6種標準菌株感染的小鼠存活率的影響(%，±s)

表2 金訶子低溫提取物對6種標準菌株感染的小鼠存活率的影響(%，±s)

注:與對照組比較，*P ＜0.01。

組別小鼠存活率大腸桿菌 痢疾桿菌 銅綠假單胞菌 變形桿菌 白色葡萄球菌 金黃色葡萄球菌1 號部位組 56.67 ±4.71* 63.33 ±9.43* 63.33 ±9.43* 16.67 ±4.71* 66.67 ±4.71* 66.67 ±4.71*2 號部位組 56.67 ±4.71* 63.33 ±9.43* 63.33 ±9.43* 23.33 ±4.71* 60.00 ±0.00* 23.33 ±4.71*3 號部位組 56.67 ±4.71* 56.67 ±4.71* 56.67 ±4.71* 36.67 ±4.71* 56.67 ±4.71* 70.00 ±0.00*4 號部位組 60.00 ±0.00* 56.67 ±4.71* 50.00 ±0.00* 23.33 ±4.71* 66.67 ±4.71* 53.33 ±4.71*5 號部位組 36.67 ±4.71* 36.67 ±4.71* 36.67 ±4.71* 13.33 ±4.71* 40.00 ±8.16* 36.67 ±4.71*對照組000000

3 討論

我國是植物藥的大國，在抗生素出現之前，我國的傳統中藥已在治療感染疾病方面發揮了重要的作用，所以篩選有抑菌作用的中藥具有了一定的優勢，且植物藥的不良反應小，它不僅具有抗菌作用，同時還具有滋補、調理等其他藥用功效，但是由于中藥種類繁多，且都具有自己獨特的作用機制，而且目前沒有一個質量標準體系進行成分測定，所以中藥的國際化受到了限制［6］。本研究前期工作已經優化了金訶子的提取工藝，制定了相應的質量標準體系，并探討了金訶子低溫提取物的免疫增強作用和抗腫瘤作用［5，7，8］。訶子是一種抗菌譜較廣的單味藥材，其對革蘭陽性菌、革蘭陰性桿菌、幽門螺桿菌及部分真菌等都有抑制作用。Kannan等［2］對訶子甲醇提取物進行了抑菌實驗，結果顯示訶子甲醇提取物對沙門傷寒桿菌、枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌以及綠膿假單胞菌和克雷伯桿菌等菌株有高度敏感性，在1 mg/mL的低濃度即顯示了較強的抑菌能力。Bag等［3］比較研究了訶子冷水、熱水、乙醇3種溶劑提取物對耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧嘧啶(SXT)/磺胺甲唑(TMP)的大腸桿菌的抗菌活性，結果發現訶子的3種提取物均有不同程度的抗菌活性，冷水提取物抗菌活性最弱，熱水提取物對MRSA的抗菌活性最強，而乙醇提取物對耐SXT/TMP的大腸桿菌的抗菌活性最強。

因為中醫傳統中主要采用水煎的方法熬制中藥，所以本研究傳承中藥的傳統水提取方法，同時改進工藝低溫提取金訶子，獲得5種不同物理性狀、色澤和味道的提取物。本提取工藝可有效提取金訶子不同部位成分，消除雜質及無用部分，確保用藥安全可靠［7］。本研究體外實驗結果表明，金訶子5種低溫提取物均有抑菌活性，且5號部位對于革蘭陽性菌的抑菌作用優于革蘭陰性菌，其余4個部位對于選擇的6個標準菌株的抑制作用無顯著性差異。體內實驗結果表明，金訶子5種低溫提取物均可提高模型鼠的存活率，但5號部位的體內抑菌作用較弱，5個部位對變形桿菌的體內抑菌效果均最差，具體的抑菌機制有待進一步探討。

［1］劉芳，秦紅飛，劉松青.訶子化學成分與藥理活性研究進展［J］.中國藥房，2012，23(7):670-672.

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