鵝細小病毒和番鴨細小病毒鑒別診斷方法

楊旭東 王剛

（黑龍江省獸醫科學研究所161006）

鵝細小病毒和番鴨細小病毒鑒別診斷方法

楊旭東 王剛

（黑龍江省獸醫科學研究所161006）

鵝細小病毒 （GPV）和番鴨細小病毒 （MDPV）分別是引起小鵝瘟和番鴨細小病毒病的病原，20世紀90年代初才認識到番鴨細小病毒病是不同于小鵝瘟的獨立疾病。這兩種病嚴重危害水禽飼養業的傳染病，臨床上常在同一地區流行，甚至混合感染。雖然二者在大小理化特性等方面很相似，但疫苗交叉保護差，致病性明顯不同。番鴨細小病毒僅見番鴨發??；而小鵝瘟病毒既可感染鵝也可感染番鴨，近年來番鴨小鵝瘟的流行也逐漸增強。在臨床上用和常規的血清學方法很難將這兩種病毒區分，本文簡要介紹目前的一些主要鑒別診斷方法。

鵝細小病毒；番鴨細小病毒；鑒別診斷；方法

鵝細小病毒引起的小鵝瘟是一種傳播快、死亡率高、高度接觸性、急性或亞急性、敗血性傳染病主要侵害1～20日齡雛鵝和雛番鴨。以腸道栓塞為其特征性病變是嚴重危害養鵝業發展的重要傳染病之一。番鴨細小病毒引起的番鴨細小病毒病臨床上主要發生于1～3周齡雛番鴨以腹瀉軟腳喘氣為特征。在細小病毒成員中，二者同源性最高，在理化特性、流行病學、臨床癥狀、病理變化也非常相似，兩者的血清也有一定的交叉保護性，臨床上這2種細小病毒病常在同一地區流行，用常規的血清學檢測方法很難區分，鑒別診斷難度較大。

1 動物感染試驗

可采用易感雛鵝和易感雛番鴨作感染試驗。對5日齡左右的易感雛鵝和5日齡左右的易感雛番鴨分別攻毒。若雛鵝和雛番鴨均發病死亡，并且有小鵝瘟特征性病變，是小鵝瘟病毒感染；若只引起雛番鴨發病死亡，則感染了番鴨細小病毒。還可用鵝或番鴨的胚胎以及組織細胞培養物進行病毒分離，通過電鏡直接觀察或者通過抗血清中和試驗來確定感染細胞內是否有該種病毒。還建立了過氧化物酶技術、反向間接血凝試驗及瓊脂擴散試驗等，能夠對分離病原進行鑒定。

2 血清學試驗

血清學診斷技術有很多，比如酶聯免疫吸附試驗、瓊脂擴散試驗、膠乳凝集試驗 （LPA）和膠乳凝集抑制試驗 （LAPI）等。其中瓊脂擴散實驗應用較多，該方法可以對鵝細小病毒和番鴨細小病毒進行交叉反應，缺點是特異性不強。相比較而言LPA和LAPI特異性強，而且操作方便和判斷直觀。交叉中和試驗可以鑒別GPV和MDPV抗體。王永坤等采用交叉免疫轉印試驗發現，MDPV的多抗與MDPV、GPV都出現了兩條反應帶VP2、VP3；GPV多抗和MDPV只有1條反應帶VP3；與 GPV出現 3條反應帶VP1、VP2、VP3；MDPV單抗僅識別MDPV和GPV的VP3，GPV單抗在識別GPV VP3和VP2的同時，還識別MDPV的VP3。說明MDPV和GPV的共同抗原主要在占整個衣殼蛋白比例大的VP3上，兩者的VP1和VP2存在差異。張云等用GPV Ep22株VP3蛋白旳原核表達產物作包被抗原建立ELISA方法，可特異性檢測出GPV和MDPV，特異性和靈敏度分別為91.8%、96.7%和90.2%、95.2%。

2.1 PCR—RFLP技術

萬春和等根據GenBank登錄的鵝細小病毒和番鴨細小病毒非結構蛋白（NS）基因特征，研究設計1對特異性引物對GPV和MDPV基因組DNA進行PCR擴增。用EcoR I酶對GPV和MDPV特異性膠回收產物進行酶切，建立了一種快速區別GPV和MDPV感染的PCR-RFLP（聚合酶鏈式反應-限制性片段長度多態性）檢測方法。

2.2 PCR技術

劉家森等、季艷菊等根據GPV和MDPV基因組的非同源序列，分別設計了針對GPV和MDPV的引物但所設計引物僅能擴增特定病毒的核酸片段，對其他病毒核酸沒有擴增。鮮思美等分別設計合成針對GPV非結構蛋白（NS）和MDPV NS2-VP1基因片段的2對引物GPVU/L和MDPVU/L，將GPV和MDPV提取核酸混合后作為模板，建立的雙重PCR可用于GPV和MDPV的鑒別診斷和聯合檢測。范文勝等根據GenBank登錄的番鴨細小病毒（MDPV）和鵝細小病毒 （GPV）基因組的同源序列區域結構基因REP以及非同源序列區域結構基因VP3，設計了2對引物，建立了一種鑒別診斷MDPV和GPV的二重PCR方法。

2.3 基因芯片檢測技術

鮮思美建立的DPV-GPV-GPMV基因芯片檢測技術，特異性強，能檢測出相應的病原，對芯片上的其它病原無交叉雜交；敏感性可達7.886ng/L，高于瓊脂糖凝膠電泳；對實驗臨床樣本的檢出率高；可應用于鴨瘟病毒、鵝細小病毒、番鴨細小病毒和鵝副粘病毒的鑒定及其混合感染病例的檢測。