黃芪多糖、丹參酮聯合醛固酮受體拮抗劑對CHF模型大鼠MIF、TNF-α、IL-6的影響

肖大剛

(鐵煤集團總醫院,遼寧 鐵嶺 112700)

黃芪多糖、丹參酮聯合醛固酮受體拮抗劑對CHF模型大鼠MIF、TNF-α、IL-6的影響

肖大剛

(鐵煤集團總醫院,遼寧 鐵嶺 112700)

目的研究黃芪多糖、丹參酮聯合醛固酮受體拮抗劑對慢性心力衰竭(CHF)模型大鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)水平的影響。方法將60只成年雄性SD大鼠隨機分為對照組、模型組、黃芪多糖+丹參酮組、螺內酯組、黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組和阿托伐他汀組，每組10只。除對照組外，其余組均采用阿霉素腹腔注射復制CHF大鼠模型。造模成功后，各給藥組灌胃相應藥物，模型組和對照組灌胃等量蒸餾水。在造模及灌胃過程中觀察各組大鼠的癥狀及體征，灌胃結束后測空腹體質量，行超聲心動圖檢查，計數左心室質量指數(LVWI)，采用ELISA法檢測血清MIF、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細胞介素-6(IL-6)水平。結果與對照組比較，模型組大鼠出現精神萎靡、活動量少、食欲下降等CHF癥狀；超聲心動圖顯示左心室舒張末內徑(LVEDD)、左心室收縮末內徑(LVESD)明顯增加，左心室射血分數(LVEF)和左室短軸縮短率(LVFS)明顯下降；LVWI和血清MIF、TNF-α和IL-6水平明顯上升。各給藥組大鼠CHF癥狀明顯改善，LVEDD、LVESD和LVWI明顯下降，LVFS和LVEF明顯增加，血清MIF、TNF-α和IL-6水平明顯下降，其中黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組各指標改善更明顯。結論黃芪多糖、丹參酮聯合醛固酮受體拮抗劑能下調CHF模型大鼠血清MIF、TNF-α、IL-6的水平，逆轉心肌重構，改善CHF的心功能。

慢性心力衰竭；黃芪多糖；丹參酮；螺內酯；巨噬細胞移動抑制因子

慢性心力衰竭(chornic heart failure, CHF)是心臟結構性和功能性損傷引起心室充盈和射血能力受損的綜合征，是多種心血管疾病的最終結果[1]，其病死率高達50%[2]。近年來研究表明，神經激素和前炎性細胞因子的過度激活及由此而導致的心肌重塑是CHF發生和發展的根本原因[3]。巨噬細胞移動抑制因子(macrophage migration inhibitory factor，MIF)作為前炎癥因子，可誘導自然殺傷細胞(NK)、T細胞產生γ-干擾素(IFN-γ)，促進腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細胞介素-6(IL-6)和人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM- CSF) 等炎癥因子的表達，通過抑制心肌收縮力，引起心肌重塑及心肌細胞的凋亡，是導致心力衰竭發生的一個重要炎性指標[4]。他汀類藥物除具有調血脂作用外，還具有抗氧化、調節NO合成、改善內皮功能、抑制炎癥因子和逆轉心肌重構等作用[5]，是一種新的抗心室重塑劑，能延緩心力衰竭進展。黃芪和丹參酮是分別從黃芪和丹參酮中提取獲得的有效成分，二者具有抗炎、抗氧化和免疫調節作用，對CHF具有改善作用[6]。隨著現代醫學研究的不斷深入，醛固酮受體拮抗劑(aldosterone receptor antagonists, ARA)的改善內皮功能、抗炎、抗血栓等作用逐漸廣為人知，成為繼血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑和β受體拮抗劑后用于治療CHF的第3類藥物[7]，但其單獨應用對心功能的改善作用有限。本研究觀察了黃芪多糖、丹參酮、醛固酮受體拮抗劑螺內酯單用及聯合應用對CHF模型大鼠心功能及MIF、TNF-α、IL-6的影響，并與阿托伐他汀對照，旨在探討單純西藥、中藥及中西醫結合治療CHF的效果，為臨床提供治療依據。

1 實驗資料

1.1材料

1.1.1實驗動物 成年雄性SD大鼠60只，體質量(230±20)g，由南京醫科大學動物中心提供，動物許可證號為SCXK(蘇)2013-005。動物分籠飼養，自由攝食和飲水，通風良好，室溫18 ～ 25 ℃，12 h光照晝夜循環。實驗中SD大鼠的使用嚴格按照《中華人民共和國實驗動物管理條例》和《實驗動物質量管理方法》進行。

1.1.2藥物與試劑 阿霉素(ADR)，上海禾豐制藥有限公司，批號：02140702；黃芪多糖，廣東惠州東方植物科技有限公司，提取方法：原藥粉末50g經水浸泡30min，水提取3次，再經過30min/次濃縮成3g/(kg o d)。丹參酮ⅡA，上海第一生物制藥廠，批號：100603。阿托伐他汀片，德國輝瑞制藥有限公司，批號：J20110098。MIF、TNF-α和IL-6檢測試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號分別為：20140923，20140912，20140929。

1.1.3儀器 TGL-16R高速離心機(上海安亭)，Vivid7.0彩色超聲儀(美國GE公司)，電熱恒溫培養箱(DH4000A，天津泰斯特)，半自動洗板機(Thermo, USA)。

1.2實驗分組、造模及給藥 將大鼠隨機分為對照組、模型組、黃芪多糖+丹參酮組、螺內酯組、黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組和阿托伐他汀組，每組10只。除對照組常規飼養、蒸餾水灌胃外，其余組大鼠均參照文獻[8]，給予ADR3.0mg/kg腹腔注射，3次/周，間隔1d，持續2周。之后模型組給予蒸餾水灌胃6周，黃芪多糖+丹參酮組給予黃芪多糖3g/ (kg·d)灌胃+丹參酮ⅡA 5mg/(kg·d)靜脈注射6周，螺內酯組給予螺內酯40mg/(kg·d)灌胃6周，黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組給予黃芪多糖3g/ (kg·d)灌胃+丹參酮ⅡA 5mg/(kg·d)靜脈注射+螺內酯40mg/(kg·d)灌胃6周，阿托伐汀片組給予阿托伐他汀10mg/(kg·d)灌胃6周。

1.3檢測指標

1.3.1大鼠形態、體征觀察及體質量測定 在造模及灌胃過程中觀察各組大鼠的形態及體征，灌胃結束后測各組大鼠空腹體質量(BW)。

1.3.2超聲心動圖檢查 實驗結束后，各組大鼠腹腔注射戊巴比妥25 mg/kg行全身麻醉，固定后左前胸備皮，采用70%的乙醇消毒。應用 GE Vivid 7. 0 超聲儀12L 探頭行經胸高頻超聲檢查，頻率13MHz，在二維超聲引導下用M 型超聲經胸骨左心長軸切面測量左心室舒張末內徑(LVEDD)、左心室收縮末內徑(LVESD)，求3個心動周期的平均值，并按照 Teichholtz公式[9]計算左心室射血分數(LVEF) 、左室短軸縮短率(LVFS)。

1.3.3心室重塑指標的測定 實驗結束后處死大鼠，開胸切取心臟，剪去大血管、心外膜脂肪組織，剪除心房及右心室，濾紙吸干后將左心室和室間隔準確稱質量，并計算心室質量(LVW)與BW的比值，即左心室質量指數 (LVWI)[10]。

1.3.4血清MIF、TNF-α和IL-6水平測定 動物處死前，經頸動脈取血，于干凈促凝管中室溫凝固0.5h后1000r/min離心 15min，收集血清并分裝。按 ELISA試劑盒說明書操作檢測血清MIF、TNF-α及IL- 6 水平。

2 結 果

2.1各組大鼠一般形態和體征的變化 實驗結束時，對照組大鼠全部存活，模型組死亡3只，黃芪多糖+丹參酮組死亡2只，螺內酯組死亡1只，黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組死亡2只，阿托伐汀片組大鼠全部存活。造模2周，模型大鼠出現毛色暗淡、活動量下降、精神萎靡、進食減少、呼吸急促等明顯心力衰竭體征。給藥6周后，各給藥組大鼠心力衰竭體征與模型組比較明顯改善，表現為自發活動增加、毛色改善、腹水減輕、食欲增加。

2.2各組大鼠心功能比較 實驗結束時，超聲心動圖測定顯示模型組大鼠心室壁增厚，心室擴張，LVEDD、LVESD增加，LVFS和LVEF下降，與對照組比較差異均有統計學意義(P均<0.05)；各給藥組LVEDD、LVESD下降，LVFS和LVEF增加，與模型組比較差異均有統計學意義(P均<0.05)，其中黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組改善情況更明顯。見表1。

表1 各組大鼠心功能比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組比較，P<0.05。

2.3各組大鼠BW、LVW和LVWI比較 各組BW、LVW和LVWI的結果如表2所示。模型組LVW低于對照組，各給藥組LVW均高于模型組，但各組間比較差異均無統計學意義。模型組BW明顯低于對照組(P<0.05)，LVWI明顯高于對照組(P<0.05)。與模型組比較，各給藥組BW明顯高于模型組(P<0.05)，LVWI明顯低于對照組(P<0.05)，且各給藥組間BW和LVWI比較差異無統計學意義(P均>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠BW、LVW和LVWI比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05。

2.4各組大鼠血清MIF、TNF-α和IL-6水平比較 模型組大鼠血清MIF、TNF-α和IL-6水平均明顯高于對照組(P均<0.05)。各給藥組大鼠血清MIF、TNF-α和IL-6水平均明顯低于模型組(P均<0.05)，其中黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組各指標水平均明顯低于黃芪多糖+丹參酮組和螺內酯組(P均<0.05)。見表3。

3 討 論

表3 各組大鼠血清MIF、TNF-α和IL-6水平比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與模型組比較，P<0.05；③與黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組比較，P<0.05。

P心肌重構是CHF發生的病理生理基礎，而細胞炎癥因子的調控網絡在CHF心肌重構中發揮著重要作用[11]。當CHF心肌重構發生時，血管緊張素-醛固酮系統(RASS)和交感神經系統興奮性增強，多種內源性神經分泌系統和細胞因子的長期慢性激活，如NF-κB、MIF、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10等，進一步加重心肌重構的發展[12]。血清IL-6和TNF-α水平與心力衰竭有關，二者可能通過抑制肌漿網Ca2+-ATP酶，推遲舒張心肌細胞鈣離子的再吸收和衰減，導致心功能不全[13]。而MIF作為IL-6和TNF-α上游調控因子，在CHF發病中起著非常關鍵的作用，現成為CHF治療的新靶點。

在CHF發生和發展過程中，RASS和交感神經系統與其病情的發展密切相關。在神經內分泌系統中，醛固酮具有獨立和相加于AngⅡ對心臟結構和功能的不良，因此醛固酮受體拮抗劑成為CHF治療的主要策略之一[14]。吳萃榮等[15]臨床研究表明，螺內酯可以通過抑制心肌纖維代謝、減輕心肌細胞壞死及抑制炎癥反應改善CHF患者左心室重構。孫愛華等[16]研究發現螺內酯不僅可以抑制RASS系統，而且能完全阻斷醛固酮對心肌的損害。除此之外，螺內酯可以調節多種神經內分泌因子如BNP、TNF-α、IL-6、TGF-β的分泌[17]。但CHF的發生是一個復雜的病理生理過程，單獨應用西藥治療效果不是十分理想，對CHF的并發癥幾乎不產生治療作用。而中醫藥具有多組分、多靶點、多途徑和多層次的藥理作用特點，在CHF防治中可起到改善血流動力學，改善心功能，抑制炎癥因子釋放，擴張外周血管，減輕心臟負荷，抑制心肌重構的作用[18]。黃芪多糖為黃芪的主要成分，其可通過抑制心臟微血管內皮細胞NF-κB信號級聯反應，減少炎癥因子的表達[19]。丹參酮ⅡA是丹參的主要成分，具有良好的抗炎、抗氧化、免疫調節作用[5]。本研究結果顯示，黃芪多糖+丹參酮組、螺內酯組、黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組大鼠血清MIF、TNF-α和IL-6水平均明顯低于模型組，LKWI、LVEDD、LVESD、LVFS和LVEF均較模型組明顯改善，且黃芪多糖+丹參酮+螺內酯組各指標改善情況明顯優于黃芪多糖+丹參酮組和螺內酯組。表明黃芪多糖+丹參酮和螺內酯均可明顯改善CHF大鼠心肌重構，降低MIF、TNF-α和IL-6水平，但聯合應用有效果疊加作用。

綜上所述，黃芪多糖、丹參酮聯合醛固酮受體拮抗劑可以明顯下調CHF模型大鼠MIF、TNF-α和IL-6水平，逆轉心肌重構，改善CHF的心功能,為中西醫結合治療CHF提供了理論依據。

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Effect of astragalus polysaccharides, tanshinone combined with aldosterone receptor antagonist on MIF, TNF-α and IL-6 in chronic heart failure model rats

(The Second People’s Hospital of Guangdong Province, Guangzhou 510317, Guangdong, China)

XIAO Dagang (General Hospital of Tiemei Group, Tieling 112700, Liaoning, China)

Objective It is to study the effects of astragalus polysaccharide, tanshinone combined with aldosterone receptor antagonist on macrophage migration inhibitory factor (MIF), TNF-α and IL-6 in chronic heart failure (CHF) model rats. Methods 60 male SD rats were randomly divided into six groups: control group, model group, astragalus polysaccharides+tanshinone group, spironolactone group, astragalus polysaccharides+tanshinone +spironolactone group and atorvastatin group each group had 10 rats. All the rats except that in control group were given adriamycin by intraperitoneal injection to establish CHF models. After successfully establishing, every treatment group was given respective medicine by intragastric administration, control group and model group was given normal saline. The symptoms and signs of the rats during establishing and treatment were observed, body weight was measured, LVWI were detected by echocardiography, the levels of serum MIF, TNF-α and IL-6 were determined by ELISA. Results Compared with control group, the rats in model group showed CHF symptoms such as listlessness, little activity, loss of appetite, echocardiography showed left ventricular end-diastolic diameter (LVEDD), left ventricular systolic diameter (LVESD) increased significantly, left ventricular ejection fraction (LVEF) and left ventricular short axis shortening rate (LVFS) significantly decreased; Left ventricular mass index (LVWI) and right ventricular mass index (RVWI) increased significantly; the levels of serum MIF, TNF-α and IL-6 increased obviously. In every treatment group, CHF symptoms improved obviously; LVEDD, LVESD decrease obviously, LVFS and LVEF increased significantly; the levels of serum MIF, TNF-α and IL-6 decreased obviously, and the improvements were the best in astragalus polysaccharides+tanshinone+spironolactone group. Conclusion Astragalus polysaccharides, tanshinone combined with aldosterone receptor antagonist can down-regulate the levels of serum MIF, TNF-α and IL-6,reverse myocardial remodeling, improve cardiac function in the rats with CHF.

chronic heart failure; astragalus polysaccharides; tanshinone; spironolactone; macrophage migration inhibitory factor

肖大剛，男，主治醫師，研究方向為慢性心力衰竭的診治。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.29.004

R-332

A

1008-8849(2015)29-3203-04

2015-01-18