黃芪多糖口服液對羅曼雛雞免疫功能的影響

趙素華，李靈娟 ，王 彬，柴保國，楊振豪

1.宿州職業技術學院動物科學系，安徽宿州，234101 2.河南省禽藥工程技術研究中心，河南鄭州，451162； 3.河南牧翔動物藥業有限公司鄭州，河南鄭州，451162

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黃芪多糖口服液對羅曼雛雞免疫功能的影響

趙素華1，李靈娟2,3，王 彬3，柴保國2,3，楊振豪3

1.宿州職業技術學院動物科學系，安徽宿州，234101 2.河南省禽藥工程技術研究中心，河南鄭州，451162； 3.河南牧翔動物藥業有限公司鄭州，河南鄭州，451162

為研究不同劑量的黃芪多糖口服液對雛雞免疫調節作用的影響，將200只1日齡羅曼蛋公雞采用單因子隨機設計，分為5個處理組，即黃芪多糖口服液高、中、低劑量組，藥物對照組及免疫對照組。并檢測不同劑量的黃芪多糖口服液對蛋公雞碳廓清指數、血清溶菌酶含量、免疫器官指數和新城疫抗體水平的影響。結果顯示，黃芪多糖口服液可以明顯促進免疫器官發育，增強機體單核巨噬細胞吞噬能力,提升疫苗抗體滴度，且這些功能均與劑量成正相關，說明黃芪多糖口服液可以作為一種效果理想的免疫增強劑。

黃芪多糖口服液；羅曼蛋公雞；免疫調節

中獸藥是我國傳統獸醫學的重要組成部分，集藥效的整體性(平衡陰陽、祛邪扶正、標本兼治)、藥源的天然性、無抗藥性等優勢于一身。黃芪是常用的“扶正固本，補中益氣”的中草藥[1]。中藥黃芪含有多糖類、黃酮類、皂苷類三種主要活性成分，具有抗腫瘤、抗氧化、抗病毒等功效[2-3]。近代藥理研究證明，黃芪的各種化學成分中與免疫力有關的主要是黃芪多糖和黃芪皂苷，其中多糖的免疫力尤為突出[4-6]。國內外關于黃芪及其復方制劑對動物機體免疫力的影響研究較多，但是關于黃芪多糖口服液對雛雞免疫力的影響報道較少。本試驗精心選取道地蒙古膜莢黃芪藥材制備黃芪多糖口服液，通過測定其對正常蛋公雞的外周血淋巴細胞轉化率、新城疫HI抗體滴度、碳廓清指數、血清溶菌酶含量的影響，觀察其對機體的免疫功能的影響，為黃芪多糖口服液的臨床應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗動物：1日齡200只健康羅曼蛋公雛雞，購自河南省鄭州市瑞祥孵化廠。

試驗藥物及試劑：黃芪多糖口服液，每1 mL藥液含1 g生藥，棕黃色液體，味微澀，宿州職業技術學院藥理實驗室制備；左旋咪唑，石家莊神威生物科技有限公司生產，批號20130804；印度墨汁(India ink staining; Blank ink)生物染色劑，北京市西中化工廠生產。溶菌酶測定試劑盒,購于南京建成生物工程研究所。

疫苗及檢測抗原：新支二聯弱毒苗、新支二聯油苗，由河南省獸醫站提供,批號分別為515、201351。雞新城疫HI檢測抗原，購自中國獸藥監察所。

1.2 分組及處理

將購買的1日齡200只羅曼蛋公雛雞混合飼養，蛋公雞養至14日齡時(平均母源抗體效價4.3log2，雞只均重96.7 g)全部用2羽份的新支二聯弱毒苗點眼滴鼻，然后采用單因子隨機設計將大群分為5組，3個用藥試驗組分別為黃芪多糖口服液高(1%飲水)、中(0.5%飲水)、低(0.25%飲水)劑量組，1個藥物對照組[3](左旋咪唑，按每日每kg體重5 mg劑量飲水)，4組連續用藥3 d，間隔4 d繼續用藥，直至免疫后42 d，1個空白對照組僅進行正常免疫。28日齡各組按每羽肌肉注射0.3 mL新支二聯疫苗進行二免。每組40只中隨機選20只標號后用于ND-HI抗體檢測、溶菌酶試驗、碳廓清試驗；其余20只用于45日齡時測定免疫器官(脾臟、法氏囊)指數。

各組雞群均采用統一的飼養管理標準，包括飼養方法、飼料品種、飼喂次數及免疫程序(1日齡注射馬立克(MD)疫苗)等。

1.3 外周血淋巴細胞轉化率測定

各組均在免疫前1 d(D0)、免疫后14 d(D14)、21 d(D21)、42 d(D42)，每組分別隨機抽取8只雞，翼下靜脈采血0.5 mL，采用MTT法(590 nm)檢測外周血T淋巴細胞轉化率的動態變化。

1.4 雞新城疫HI抗體滴度的測定

于免疫前1 d(D0)，免疫后7 d(D7)、14 d(D14)、21 d(D21)、28 d(D28)、42 d(D42)，每組分別隨機抽取8只雞，翼下靜脈采血0.5 mL，待析出血清后，1 000 r/min離心5 min分離血清，用微量血凝抑制法測定雞新城疫HI抗體滴度。

1.5 碳廓清指數測定

各組分別于首免后21 d、42 d，用1∶4稀釋的印度墨汁(India ink staining)生物染色劑,按每1 800 g體重0.2 mL靜脈注射,立即計時,間隔2 min(T2)、10 min (T10)分別從翅靜脈取血20 μL,加到2 mL 0.1% Na2CO3溶液中搖勻,用751分光光度計于680 nm波長處比色，測光密度OD值(以下分別用OD2和OD10來表示2min和10min所取血樣的光密度),用1%Na2CO3溶液做空白對照,然后處死雞,取肝、脾臟稱重,計算碳廓清指數K值：

1.6 血清溶菌酶含量測定

各組分別于首免后21d、42d心臟采血,自然凝固后分離血清,試驗過程嚴格按照試劑盒說明進行，測定血清溶菌酶含量。

1.7 免疫器官指數測定

于免疫前1d(D0)、免疫后42d(D42)，每次每組隨機抽取10只雞放血致死，稱取體質量；將采血后淘汰的雞剖殺，取脾和法氏囊，剝離多余組織，用濾紙吸水后稱重，按下面公式計算法氏囊指數和脾指數：

免疫器官指數=免疫器官重(mg)/體重(g)。

1.8 數據統計

數據用SPSS13.0軟件進行Duncan's多重分析,比較各組抗體效價、血清溶菌酶、碳廓清指數及免疫器官指數的差異。

2 結果與分析

2.1 黃芪多糖口服液對雛雞外周血淋巴細胞轉化率的影響

表1顯示，在免疫后第14d、21d、42d,黃芪多糖口服液試驗組(高、中劑量組)與同期的空白對照組及藥物對照組相比,T淋巴細胞ANAE陽性率明顯升高且差異顯著(P<0.05)，但在免疫后第42d除黃芪多糖口服液高劑量組外，其余各組差異均不顯著。

表1 各組免疫后不同時段雞外周血T淋巴細胞ANAE陽性率/%

注：同行數據上標無相同字母者差異顯著(P<0.05)，以下表同。

2.2 黃芪多糖口服液對新城疫抗體效價的影響

表2顯示，免疫后所有時間點,黃芪多糖口服液高、中劑量試驗組ND-HI抗體效價均顯著高于對照組(P<0.05)。免疫后14d、28d、42d,黃芪多糖口服液中、高劑量組ND抗體效價顯著高于藥物對照組和空白對照組(P<0.05)，免疫后28d試驗組抗體效價達到最高峰值;免疫后42d,所有組的新城疫HI抗體效價開始降低。

2.3 黃芪多糖口服液對碳廓清指數的影響

由表3可以看出，黃芪多糖口服液不同劑量組對蛋公雞碳廓清指數影響較空白對照組均表現顯著差異性(P<0.05)，免疫后21d、42d黃芪多糖口服液高、中劑量組碳廓清指數也顯著高于藥物對照組(左旋咪唑)，說明黃芪多糖口服液能夠提升機體單核巨噬細胞吞噬功能，促進機體非特異性免疫能力。

表2 免疫前后各組不同時間點ND抗體效價 log2

表3 免疫前后不同試驗組碳廓清指數測定結果

2.4 黃芪多糖口服液對血清溶菌酶含量的影響

表4顯示，黃芪多糖口服液高、中劑量組僅在免疫后21 d時對蛋公雞血清溶菌酶含量影響較空白對照組和免疫對照組表現顯著差異性(P<0.05)，在免疫后42d時碳廓清指數與藥物對照組和空白對照組差異不顯著，具體原因有待于進一步研究。

表4 免疫前后不同試驗組血清溶菌酶含量測定結果 μg/mL

2.5 黃芪多糖口服液對免疫器官指數的影響

表5顯示，黃芪多糖口服液高、中劑量組對蛋公雞脾指數影響較空白對照組和藥物對照組均表現顯著差異性(P<0.05)，低劑量組差異不顯著；法氏囊指數方面，黃芪多糖口服液高劑量組較對照組差異顯著。說明黃芪多糖口服液能夠提升機體免疫器官的發育。

表5 免疫前后不同試驗組免疫器官指數測定結果 mg/g

3 討論與結論

(1)外周血淋巴細胞轉化率、抗體滴度是反映細胞免疫功能、體液免疫功能的重要指標。在家禽養殖過程中，因飼養管理或疫苗應激、野毒侵染往往造成機體不同程度的免疫損傷。黃芪多糖口服液采用扶正祛邪雙管齊下的組方思路，藥材經“生物酶解-三級除雜-低溫濃縮”動態提取工藝提取，所含的多糖及皂苷成分能夠激活免疫系統，促進細胞免疫及體液免疫功能的恢復[8]。此外，口服液中所含的鋅、鐵、錳、銅等微量元素可能也參與了反應，具體機制尚待進一步研究。

(2)單核吞噬細胞系統是機體非特異性免疫系統的重要組成部分,它的主要功能是吞噬和消滅進入機體的異物和病原微生物,是維持機體內環境穩定的重要系統之一。巨噬細胞的碳廓清指數多寡反映了單核吞噬細胞系統的吞噬功能強弱。溶菌酶含量是反映機體非特異性免疫的一個重要指標,它從體液免疫方面反映了機體的非特異性免疫功能。溶菌酶主要來自嗜中性粒細胞、單核細胞及巨噬細胞的溶酶體中。本試驗也從非特異性免疫方面研究黃芪多糖口服液對巨噬細胞吞噬功能和溶菌酶含量影響，結果顯示黃芪多糖口服液對構建機體非特異性免疫屏障具有積極影響，這可能與黃芪多糖促進脾細胞增殖，進而促進脾細胞γ-干擾素及巨噬細胞吞噬功能有關[9-11]。血清溶菌酶試驗存在重復性差、游離度大等缺陷，有待進一步研究。

(3)免疫器官指數作為免疫部位發育的直觀反映，本試驗結果表明黃芪多糖口服液不同劑量組均能夠促進蛋雛雞脾臟、法氏囊等免疫器官發育，現代試驗也已證實黃芪、黨參、淫羊藿等可顯著促進家禽免疫器官發育[1，4，12]，這可能與其所含的糖類、微量元素及黃酮類成分有關。

在當下家禽養殖實踐中，疫苗應激、粉塵及氨味刺激、通風不良、溫濕度控制不當、霉菌毒素污染等均會給家禽免疫系統造成不同程度的損傷，進而引致病原體侵染的風險。隨著人們食品安全意識的提高，中藥抗病毒產品研發日益成為市場熱點，黃芪多糖口服液秉承扶正祛邪的治療理念，并經高新提取工藝復方精提，能夠增強機體細胞及體液免疫功能、強化非特異性免疫功能、促進免疫器官發育，是一種效果理想、具有良好市場潛力的免疫增強劑。

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(責任編輯：汪材印)

2014-11-26

安徽省教育廳自然科學研究重點項目(kJ2013B295)；河南省禽藥工程技術研究中心項目(142102113109)。

趙素華(1966-)， 女，安徽蕭縣人，副教授，在讀博士，主要研究方向：動物免疫。

10.3969/j.issn.1673-2006.2015.04.030

R859.7

A

1673-2006(2015)04-0105-04