凍前預處理對薩?？巳庋蚓豪鋬鲂Ч挠绊?/h1>
2015-03-01 09:01茍想珍王珂何茂昌楊薦俊劉彥軍
中國畜牧獸醫文摘 2015年8期
茍想珍王 珂何茂昌楊薦俊劉彥軍
(1.甘肅省畜牧獸醫研究所,甘肅平涼 744000；2.定西旺盛養殖有限公司,甘肅定西 743000；3.定西市團結鄉畜牧獸醫站,甘肅定西 743000)
凍前預處理對薩?？巳庋蚓豪鋬鲂Ч挠绊?/p>
茍想珍1王 珂1何茂昌1楊薦俊2劉彥軍3
(1.甘肅省畜牧獸醫研究所,甘肅平涼 744000；2.定西旺盛養殖有限公司,甘肅定西 743000；3.定西市團結鄉畜牧獸醫站,甘肅定西 743000)
通過對薩?？巳庋蛐迈r精液在離心前進行不同時間的靜置，選擇不同的離心速度及離心時間進行冷凍前預處理，以解凍后精子活率，復蘇率為判斷指標，比較了各種不同預處理對薩?？司豪鋬鲂Ч挠绊?。結果表明:離心前在37℃環境下靜置60min的凍后效果（活率達 0.47和復蘇率達到73.8%）優于 30min 和 90min 的凍后效果（p＜0.05）；離心過程以 1000r/min 的速度離心 10min 較好，凍后活率 0.45，復蘇率達到74.5%，優于500r/min 和 1500r/min轉速和其他時間（p＜0.05）。
薩?？巳庋?冷凍精液 預處理 冷凍效果
精液的冷凍保存技術是隨著人工授精（AT）的發展而發展起來的，是通過降低或抑制精子新陳代謝強度從而達到延長精子在體外生存的目的。以精液體外保存為基礎的人工授精技術的廣泛應用已經加速了動物的遺傳選擇并使生產能力得到極大的提高。
薩?？巳庋蛱柗Q世界上長得最快的肉用型品種，早熟，生長快，產肉多，肉質好，適應性強，繁殖率達到160%-210%。為了有效地解決肉用種羊缺乏的現狀，節省優質種羊引種費用和飼養管理成本，開發薩?？巳庋蚋叨似焚|冷凍精液，擴大良種覆蓋率，建立良種繁育體系，良種雜交改良體系，質量監督體系，開展集約化，精準化，產業化，綠色化的發展模式。
1 材料與方法
1.1 樣品來源
精液樣品采集于甘肅定西旺盛養殖有限公司選擇成年，體質健康，性欲旺盛，配種頻率正常的薩?？巳庋?，收集中段富含精子部分，經 4 層滅菌紗布過濾，用保溫瓶在 37℃左右運回實驗室，生物顯微鏡下進行精液品質常規檢查，選擇活率 0.7 以上，密度“中”級以上的精液用于實驗。
1.2 實驗儀器
隔水式電熱恒溫培養箱，800 型電動離心機，400-600X 生物顯微鏡，電子天平，超低溫溫度計，氟板，5L 液氮罐，烘箱，高溫高壓滅菌器，普通冰箱及羊用采精器械和冷凍器械等。
1.3 精液的預處理
1.3.1 離心前靜置時間
將采集的合格精液保存在 37℃左右的保溫瓶中，分別靜置30min、60min 和 90min。
1.3.2 離心
分別以 500r/min、1000r/min、1500r/min 的速度離心 7min、10min 和 15min。
1.4 冷凍精液制作與解凍
用液氮熏蒸法制作細管凍精，劑量為 0.5ml，解凍時用40～45℃溫水。
1.5 數據處理
應用 t 檢驗和方差分析法對實驗數據進行統計分析。
2 結果與分析
2.1 離心前靜置時間對薩?？巳庋騼鼍盥始皬吞K率的影響
本研究在稀釋前采用 30 min、60 min 和 90 min 3 種不同的靜置時間對精液凍后活率的影響見表1。精液離體后靜置 60 min 再采取 1 000 r/min 的速度離心，凍后活率及復蘇率明顯優于靜置30 min和90 min（p＜0.05），凍后精子活率達 0.47，復蘇率達73.8%。
2.2 離心速度及離心時間對凍后活率及復蘇率的影響
對薩?？诵迈r精液采用 500 r/min、1 000 r/min 和 1 500 r/min的速度分別離心 7 min、10 min和 15 min，分別制成細管凍精和顆粒凍精，同時，在相同條件下解凍（45℃溫水）。結果見表2。當采用500 r/min 的速度離心時，離心時間的長短對凍后精子活率及復蘇率的影響都非常明顯。而采用 1 000 r/min 的速度離心，精子活率最高可達 0.45，復蘇率也能達到 74.5%，這表明，離心時間對精液的凍后活率影響較大，通常以離心 10 min 較好，在細管凍精中表現非常明顯（P＜0.05）。離心速度以1 000 r/min 較為理想。
表1 離心前靜置時間對凍后活率及復蘇率的影響
表2 離心速度及離心時間對凍后活率及復蘇率的影響
3 討論
（1）本研究在稀釋前將精液分別靜置 30min，60min 和90min，結果表明，平衡 60min可有效地使精子和精清接觸，以增強精子對冷休克及冷凍損傷的抵抗能力，靜置時間太長可引起精漿變質而對精子產生影響，同時，精子不運動也容易形成假死狀態，該結果與 Paulenz所采用的豬精液 Beltsville 預處理方法所獲得的結果相同。
（2）本研究采用不同的離心速度和離心時間，結果表明，以1000r/min 的離心速度離心10min 較好，解凍后活率達到 0.45。這主要是由于不離心，精液體積過大稀釋效果不佳，而過快的離心速度則使精子在離心管底部凝結，導致形態異常，活率降低。也有報道表明，薩?？司簝銮耙?1200r/min 的速度離心 10 分鐘較好，本研究認為，在平涼地區以 1000r/min 的速度離心較好。
4 結論
（1）精液稀釋前的靜置時間，以在37℃下靜置60min較好，優于30min和90min（p＜0.05）。
（2）離心時以 1000r/min 的速度離心 10min 較好，優于其他的速度時間。
[1] Pursel V G，Johnson L A. Freezing of boar spermatozoa：fertilizing capacity with concentrated semen and a new thawing procedure[J]. Journal of Animal Science，1975，40：99—102
[2] Paulenz H，Taugbol O. Effect of dietary supplementation with cold liver oil on cold shock and freezability of boar semen. Reprod-domestanim. Berlin：Blackwell Wissenschafts-Verlag GmbH[J]. Oct 1999. v. 34（5）：431-435.
[3] 淵錫藩，邢小軍，吳繼東，等.冷凍精液的溫度控制[J].黑龍江動物繁殖，2005，3（13）：3-5.
[4] 楊俊濤.牛精液冷凍稀釋液的改進研究[D].中國優秀碩士學位論文全文數據庫2007.
[5] 蘇永生，呂軍峰，張力.薩?？巳庋蛞N效果及推廣建議[J].甘肅農業科技，2005，6：54-57.
[6] 唐道廉.薩?？巳庋螂s交效果的試驗研究[J].畜牧與飼料科學，2010，31（6-7）：17-18.
[7] 李穎康，達文政，吳艷華，等.肉羊專用品種-薩?？巳庋虻念愋秃蜕a性能[J].中國草食動物，2003，（1）：48.
[8] 淵錫藩，張玲，邢小軍.影響精液質量的幾個冷凍技術因素[J].畜牧獸醫學報.1995（3）.
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薩?？巳庋?冷凍精液 預處理 冷凍效果
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1.2 實驗儀器
隔水式電熱恒溫培養箱，800 型電動離心機，400-600X 生物顯微鏡，電子天平，超低溫溫度計，氟板，5L 液氮罐，烘箱，高溫高壓滅菌器，普通冰箱及羊用采精器械和冷凍器械等。
1.3 精液的預處理
1.3.1 離心前靜置時間
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1.3.2 離心
分別以 500r/min、1000r/min、1500r/min 的速度離心 7min、10min 和 15min。
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1.5 數據處理
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2 結果與分析
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表1 離心前靜置時間對凍后活率及復蘇率的影響
表2 離心速度及離心時間對凍后活率及復蘇率的影響
3 討論
（1）本研究在稀釋前將精液分別靜置 30min，60min 和90min，結果表明，平衡 60min可有效地使精子和精清接觸，以增強精子對冷休克及冷凍損傷的抵抗能力，靜置時間太長可引起精漿變質而對精子產生影響，同時，精子不運動也容易形成假死狀態，該結果與 Paulenz所采用的豬精液 Beltsville 預處理方法所獲得的結果相同。
（2）本研究采用不同的離心速度和離心時間，結果表明，以1000r/min 的離心速度離心10min 較好，解凍后活率達到 0.45。這主要是由于不離心，精液體積過大稀釋效果不佳，而過快的離心速度則使精子在離心管底部凝結，導致形態異常，活率降低。也有報道表明，薩?？司簝銮耙?1200r/min 的速度離心 10 分鐘較好，本研究認為，在平涼地區以 1000r/min 的速度離心較好。
4 結論
（1）精液稀釋前的靜置時間，以在37℃下靜置60min較好，優于30min和90min（p＜0.05）。
（2）離心時以 1000r/min 的速度離心 10min 較好，優于其他的速度時間。
[1] Pursel V G，Johnson L A. Freezing of boar spermatozoa：fertilizing capacity with concentrated semen and a new thawing procedure[J]. Journal of Animal Science，1975，40：99—102
[2] Paulenz H，Taugbol O. Effect of dietary supplementation with cold liver oil on cold shock and freezability of boar semen. Reprod-domestanim. Berlin：Blackwell Wissenschafts-Verlag GmbH[J]. Oct 1999. v. 34（5）：431-435.
[3] 淵錫藩，邢小軍，吳繼東，等.冷凍精液的溫度控制[J].黑龍江動物繁殖，2005，3（13）：3-5.
[4] 楊俊濤.牛精液冷凍稀釋液的改進研究[D].中國優秀碩士學位論文全文數據庫2007.
[5] 蘇永生，呂軍峰，張力.薩?？巳庋蛞N效果及推廣建議[J].甘肅農業科技，2005，6：54-57.
[6] 唐道廉.薩?？巳庋螂s交效果的試驗研究[J].畜牧與飼料科學，2010，31（6-7）：17-18.
[7] 李穎康，達文政，吳艷華，等.肉羊專用品種-薩?？巳庋虻念愋秃蜕a性能[J].中國草食動物，2003，（1）：48.
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