HPLC法測定四逆清帶口服液中芍藥苷的含量

樊建霜，王家員，林方芬，岳顯可

HPLC法測定四逆清帶口服液中芍藥苷的含量

樊建霜1，王家員1，林方芬1，岳顯可2*

目的 建立HPLC法測定四逆清帶口服液中芍藥苷的含量。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為230 nm，柱溫25 ℃。結果 芍藥苷進樣量在0.31～93.00 μg/mL范圍內與峰面積呈良好的線性關系(R2=0.999 9)，平均回收率為98.67(RSD%=1.19，n=6)。結論 本方法簡便、準確、靈敏度高、重現性良好，可用于四逆清帶口服液中芍藥苷的質量控制。

四逆清帶口服液；HPLC；芍藥苷

0 引言

四逆清帶口服液由四逆清帶湯改劑型而來，由柴胡、白芍、枳實、甘草、蒲公英、紅藤、敗醬草、大薊、小薊、椿根皮、綿萆薢、土茯苓、半枝蓮各按一定量配伍而成。四逆清帶湯是溫州市中醫院國家級名老中醫馬大正主任醫師的經驗方，主治慢性盆腔炎的輕癥。該方由四逆散(柴胡、枳殼、白芍、甘草)加味而成。具有透邪解郁、疏肝理氣之功[1-2]。大薊、小薊、敗醬草、紅藤、半枝蓮、蒲公英具有清熱解毒、消癰排毒之功。土茯苓、椿皮、萆薢具有清熱、利濕、去濁之功。諸藥合用共奏疏調氣機、清理濕熱之效[3]，氣機暢，濕熱清，故氣阻濕熱型慢性盆腔炎得以治。且該方由溫州市中醫院馬大正主任醫師沿用數十年，療效確切，能治愈、緩解慢性盆腔炎癥狀，值得推廣使用。目前臨床上僅有其湯劑，而口服液具有濃度高、體積小、便于服用、攜帶及貯藏的優點，故將本方制備成口服液，本研究為四逆清帶口服液質量控制提供試驗依據。

1 儀器與試藥

Ultimate3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司)。梅特勒XS-105電子分析天平(0.01 mg，METTLER TOLEDO，Switzerland)，KS-80中草藥粉碎機(天津泰斯特儀器有限公司)；R-201恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司)。

四逆清帶口服液由溫州市中醫院制劑室制備提供(批號：131201、131202、131203)。芍藥苷標準品(批號：110736-201136)購自中國藥品生物制品檢定所。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗 以Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱；乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)為流動相；檢測波長為230 nm，柱溫：25 ℃；流速：1 mL/min。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于2 000，重復性、分離度、托尾因子及保留時間如表1所示。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品12.4 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成儲備液。

2.3 供試品溶液的制備 取四逆清帶口服液0.5 mL，于10 mL容量瓶中，加5 mL甲醇超聲30 min，超聲頻率40 Hz。放冷，加甲醇至刻度，搖勻，取適量溶液至離心管中，于12 000 r/min條件下離心10 min后，過濾，取濾液，即得。

表1 系統適用性試驗結果

2.4 線性關系考察 取芍藥苷儲備液依次稀釋成濃度為0.31、1.55、15.50、62.00、93.00 μg/mL的線性系列溶液，分別精密吸取5個標準品溶液各10 μL進行測定。以待測物濃度(X)為橫坐標、待測物峰面積(Y)為縱坐標，采用最小二乘法進行線性回歸，回歸方程為：Y=6.773 7 X+1.626 7，R2=0.999 9。結果表明，芍藥苷在0.31～93.00 μg/mL范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度考察 取“2.4”項中62.00 μg/mL標準品溶液，按以上色譜條件，重復進樣6次，測定峰面積，結果RSD為0.51%(n=6)。

2.6 回收率試驗 取已知含量的同一批均勻的四逆清帶口服液(批號：131201)，精密量取0.5 mL，置10 mL容量瓶中，平均量取6份，分別精密加入濃度為93.00 μg/mL的對照品溶液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，按“2.3”項方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進行測定，結果見表2，平均回收率為98.67%，RSD為1.19%(n=6)。

表2 加樣回收試驗結果

2.7 重復性試驗 取同一批均勻的四逆清帶口服液(批號：131201)，精密量取0.5 mL，共6份，按“2.3”項下方法制備供試品，在“2.1”項色譜條件下進行分析。芍藥苷含量RSD為(n=6)。

表3 供試品重復性考察結果

2.8 穩定性試驗 取同一批均勻的四逆清帶口服液(批號：131201)，精密量取0.5 mL，照“2.3”項下方法制備供試品，在“2.1”項色譜條件下，在0、6、12、18、24、30 h進行測定。芍藥苷峰面積的RSD為1.23%(n=6)。

表4 供試品穩定性考察(h)

2.9 樣品測定 取3批樣品，按“2.3”項下方法制備供試品，在“2.1”項色譜條件下測定芍藥苷含量，色譜圖見圖1。結果3批樣品(131201、131202、131203)中芍藥苷的含量分別為84.32、75.61、86.84 μg/mL。故以每支口服液10 mL計，含芍藥苷總量分別為16.86、15.12、17.37 mg。

圖1 芍藥苷標準品與口服液樣品芍藥苷色譜圖

3 討論

3.1 本試驗以甲醇為溶劑對口服液樣品進行再處理，芍藥苷能得到很好的轉移，且供試品在該色譜條件下，分離度好，靈敏度高，為控制四逆清帶口服液的質量提供了一種較好的分析手段[4]。

3.2 四逆清帶湯是治療濕熱型慢性盆腔炎的臨床經驗方，因其療效確切，值得推廣使用，故將本方制備成口服液。組方中的白芍是四逆清帶口服液中的主要味藥，芍藥苷也是口服液的主要功效成分，故以芍藥苷作為質量控制指標[5]。

[1] 暢洪昇,王慶國,關玲.中藥抗抑郁復方分析和證治規律研究[J].中國民間療法,2004,12(2):60-62.

[2] 盧嫏環,肖勇,丁舸.試論四逆散之核心藥組的合理性[J].光明中醫,2013,28(9):1768-1769.

[3] 馬大正.馬大正中醫婦科醫論醫案集[M].北京:中醫古籍出版社,2006:1.

[4] 張穎,王偉麗,朱明偉.高效液相色譜法測定丹參益坤口服液中芍藥苷含量[J].中國藥業,2012,23(21):15-16.

[5] 涂鳳蓮.四逆散中芍藥苷含量的HPLC法測定[J].中外健康文摘,2011,8(13):405-406.

Determination of paeoniflroin in Sini Qingdai oral liquid by HPLC

FAN Jian-shuang1,WANG Jia-yuan1,LIN Fang-fen1,YUE Xian-ke2*

(1.Wenzhou Hospital of TCM,Wenzhou 325007,China;2.Zhejiang Chinese Medical University Chinese Medicine Yinpian Co.,Ltd.,Hangzhou 311400,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of paeoniflroin in Sini Qingdai oral solutions.Methods The analysis was performed on a Agilent Eclipse XDB-C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm) with a mobile phase of Acetonitrile-0.1%Phosphoric acid solution(14∶86).The flow rate was 1.0 mL/min.The column temperature was 25 ℃.The detection wavelength was 230 nm.Results The calibration curve of paeoniflroin was liner within the range of 0.31～93.00 μg/mL(R2=0.999 9).The average recovery rate was 98.67%(RSD%=1.19,n=6).Conclusion The method is accurate,simple,sensitive and reproducible.It can be used as the quality control method for Sini Qingdai oral solutions.

Sini Qingdai oral solutions;HPLC;Paeoniflroin

2014-09-02

1.溫州市中醫院，溫州 325007；2.浙江中醫藥大學中藥飲片有限公司，杭州 311400

溫州市醫藥衛生科研項目(2012ZA006)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503017

*通信作者