中藥茺蔚子炮制工藝優化的研究

李智萌　張彥飛　蔡廣知等

[摘要] 目的 改進中藥茺蔚子的炮制工藝，考察影響中藥茺蔚子的炮制因素。 方法 設計正交試驗，考查中藥茺蔚子的酒炒工藝，并對其進行多因素分析?？疾鞓藴室攒底又宣}酸水蘇堿為指標，采用高效液相色譜結合蒸發光散射檢測器（HPLC-ELSD）對其進行含量測定，采用方差分析等統計學方法分析數據，找出最佳的優化方案。 結果 水煎煮提取的最佳工藝為A1B3C3，即加水煎煮3次，第1次加8倍量水，浸泡1 h，煎煮1.5 h；第2次加6倍量水，煎煮1.5 h，第3次加6倍量水，煎煮1.5 h，濾過，合并濾液。炮制最佳工藝為A3B2C1D3，即使用25%加酒量浸潤茺蔚子藥材10 min后，將其在150℃下炒制5 min后即得。 結論 炮制的方法直接影響中藥茺蔚子中鹽酸水蘇堿的含量，本研究為改進中藥茺蔚子的最佳炮制工藝提供了參考依據。

[關鍵詞] 茺蔚子；炮制工藝優化；鹽酸水蘇堿；高效液相色譜結合蒸發光散射檢測器

[中圖分類號] R283 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）05（c）-0016-04

[Abstract] Objective To improve the processing technology of the Chinese traditional medicine Motherwort fruit，and investigate the factors influencing for the processing of Chinese traditional medicine Motherwort fruit. Methods The orthogonal experiment was designed to investigate the fried wine processing of Chinese traditional medicine Motherwort fruit，and the multiple-factor analysis was given.Standard for Motherwort fruit was used Hydrochloric acid stachydrine as the index，which was used HPLC-ELSD to determine the content and the data were analyzed statistically by analysis of variance to find out the optimal scheme. Results Optimum water decoction was extracted for A1B3C3，was decocted three times，the first with 8 times amount of water，soaked for 1 h，boiled for 1.5 h；second times with 6 times amount of water，boiled for 1.5 h，third times with 6 times amount of water，decocted for 1.5 h，and then filtered and merged filtrate.The best processing technology for A3B2C1D3 was infiltrated 25% for liquor 10 min and under 150℃ fried for 5 min to obtain. Conclusion The processing methods is a direct impact on the content of stachydrine hydrochloride in Motherwort fruit，this study provides reference for optimizing the best processing method of Motherwort fruit.

[Key words] Motherwort fruit；Optimal processing method；Hydrochloric acid Stachydrine；HPLC-ELSD

中藥茺蔚子又名益母草子，為唇形科植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的干燥成熟果實[1]。藥材多秋季果實成熟時采割地上部分，曬干，打下果實，除去雜質。該中藥首載于《神農本草經》，味辛、苦，性微寒。歸心包、肝經，具有活血調經、清肝明目的功能，用于目赤腫痛或目生翳膜，酒炒品治療頭目之疾最佳[2-4]?！俺粗啤焙汀皟糁啤眱煞N炮制方法是目前中藥茺蔚子的主要炮制方法。為傳承其炮制理論和優化其炮制方法，進一步使中藥茺蔚子更好地發揮功效，本研究以酒炒法為主要方法，考察影響酒炒工藝的因素和水平，采用正交試驗的方法進一步優化和改進炮制工藝方法，對不同炮制方法制得的炮制樣品進行試驗比較。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀（LC-10ATvP型，日本島津公司），蒸發光散射檢測器（上海分析儀器有限公司），空氣壓縮泵（天津市分析儀器廠），超聲波提取器（上海分析儀器有限公司），85-2A數顯測速恒溫磁力攪拌器（金壇市榮華儀器制造有限公司），80-2型電動離心機（江蘇金壇市金國勝實驗儀器公司），百萬分之一電子天平，十萬分之一電子天平；水為超純水，磷酸、乙腈為色譜純；鹽酸水蘇堿對照品（批號：110710-201310，規格為20 mg，中國藥品生物制品鑒定所）。

茺蔚子藥材[5]，經長春中醫藥大學姜大成教授鑒定為真品。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備

取鹽酸水蘇堿對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加70%乙醇制成每1毫升含0.5 mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取研磨后的茺蔚子粉末過四號篩，取過篩后的藥材粉末約0.25 g，精密稱定后記錄其準確重量，轉入完全干燥的50 ml具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 ml，加塞，精密稱定重量，記錄，置入超聲提取器中（頻率40 kHz，功率250 W）處理30 min，待完全放冷后，再精密稱定其重量，使用70%乙醇補足與第1次稱量相比減少的重量，充分搖勻，置入漏斗中濾過，棄除濾液，精密取一定量續濾液，70%乙醇定容后即為供試品溶液[6-8]。

2.3 標準曲線的考察

取鹽酸水蘇堿對照品，精密稱4.87 mg，完全轉入10 ml棕色容量瓶中，先加一定量70%乙醇溶解，待溶解完全后，繼續加乙醇定容至刻度，充分搖勻，即得（每1毫升含鹽酸水蘇堿對照品0.487mg）。分別精密吸取上述鹽酸水蘇堿對照品溶液1、3、5、7、9 μl，注入液相色譜儀，分別記錄相應的峰面積值，其中，橫坐標為進樣量（μg）取對數后的值（X），縱坐標為峰面積積分取對數后的值（Y），制作標準曲線圖（圖1）。結果回歸方程為Y=1.5503X+2.1495，r=0.9999，提示，鹽酸水蘇堿線性范圍為0.487～4.383 μg時，進樣量的對數值與峰面積積分的對數值之間有良好的線性關系[9-11]。

2.4 茺蔚子提取方法的考察

遵循中藥湯劑的煎煮方法，確定水作為提取溶劑，提取方法選擇熱法提取，即煎煮法，且固液分離時應注意趁熱濾過，使藥效物質較少損失，以保證較高的提取率及臨床療效[12-13]。根據上述原則，對水煎煮提取工藝條件進行試驗研究。試驗考察了3個因素包括藥材的加水量、煎煮時間及煎煮次數，其中每個因素考察了3個水平，根據因素和水平設計L9（34）的正交試驗（表1），考慮到試驗中可能存在誤差的影響，每次試驗平行3次。其中藥材的浸泡時間采用單因素實驗法，以直觀考察進行評價；其他因素采取L9（34）正交設計實驗法，以茺蔚子中有效成分鹽酸水蘇堿的含量為考察指標，優選最佳提取工藝參數。由方差分析表可知各因素影響的重要性順序為B>C>A，提示對試驗有顯著性影響的主要因素為煎煮次數和煎煮時間，即主要影響因素是煎煮次數B和煎煮時間C，加水量A對試驗結果影響較小，結合生產實際情況及實驗操作，選擇A1。綜合分析結果，確定最佳提取工藝條件為A1B3C3，即加水煎煮3次，第1次加水8倍量，浸泡1 h，煎煮1.5 h，趁熱濾過；第2次加水6倍量，煎煮1.5 h，趁熱濾過；第3次加水6倍量，煎煮1.5 h，趁熱濾過，合并濾液，即為供試品溶液（表2、表3）。

2.5 茺蔚子酒炒工藝的考察

茺蔚子酒炒工藝設計考察了酒炒溫度、酒炒時間、浸潤時間和加酒量4個因素，每個因素分別設了3個水平，根據因素和水平設計了L9（34）正交試驗表（表4）?？紤]到試驗中可能存在誤差的影響，每次試驗平行3次[14-16]。使用最佳提取方法對炮制后茺蔚子進行提取，根據炮制后鹽酸水蘇堿含量優選炮制方法。正交試驗的直觀分析見表5，結果顯示，炮制因素的主次為D>A>C >B，根據試驗實際操作需求確定最佳組合為A3B1C1D3。由方差分析結果（表6）可知各因素影響試驗結果的重要顯著因素為A和D，由于B對試驗影響不顯著，故將其列入誤差項處理。根據最終測得鹽酸水蘇堿含量和飲片外形特征為主要參考指標，A3B2C1D3為最終選擇的最佳炮制工藝，即使用25%加酒量浸潤茺蔚子藥材10 min后，將其在150℃下炒制5 min后即得。

2.6 茺蔚子不同炮制品總浸膏量、鹽酸水蘇堿含量測定

取不同炮制品200 g，加水煎煮3次，第1次加8倍量水（其中2倍量是藥材的吸水量），浸泡1 h，煎煮1.5 h；第2次加6倍量水，煎煮1.5 h；第3次加6倍量水，煎煮1.5 h，濾過合并濾液，比較不同炮制方法的浸膏量和鹽酸水蘇堿的含量。由實驗結果可以看出，與生品比較，酒炒品總浸膏量、鹽酸水蘇堿含量差異顯著（P<0.01）（表7），可見酒炒品在鹽酸水蘇堿含量上較高，說明優化后的酒炒工藝確實提高了炮制飲片的質量。

2.7 方法學考察

2.7.1 精密度試驗 分別精密吸取已處理的供試品溶液及鹽酸水蘇堿對照品溶液各5 ml注入液相色譜儀，分別連續進樣6次，按照上述色譜條件進行測定其峰面積，計算其相應的峰面積積分值可知，對照品溶液和供試品溶液峰面積的RSD值分別為1.59%、2.99%，表明該試驗的儀器、方法的精密度良好[17]。

2.7.2 重復性試驗 精密稱取已過篩的茺蔚子藥材粉末，按照“2.2”項下供試品溶液制備的方法進行處理，平行制備6份，依次獨立測定，按上述色譜條件測定峰面積，計算茺蔚子藥材中鹽酸水蘇堿的含量，考察試驗方法的重復性，測定其鹽酸水蘇堿含量，結果平均含量為34.33 mg/g，RSD為1.67%，表明該試驗方法具備良好的重復性。

2.7.3 穩定性試驗 每隔一定時間，分別精密吸取茺蔚子藥材供試品溶液和對照品溶液各5 μl注入液相色譜儀，按照上述色譜條件測定其峰面積，考察其穩定性。結果顯示，在24 h內，測定對照品溶液和供試品溶液峰面積的RSD分別為1.84%、2.26%，表明鹽酸水蘇堿具備良好的穩定性，保證了其在24 h內測定結果準確可靠[18]。

2.7.4 加樣回收率試驗 精密稱取茺蔚子藥材樣品，按照供試品制備項下方法處理，平行制備6份，且已測定其鹽酸水蘇堿的含量，向6份供試品中分別適量精密加入對照品，按照上述色譜條件進行測定，計算茺蔚子藥材中的鹽酸水蘇堿加樣回收率，經測定，其鹽酸水蘇堿平均加樣回收率為97.96%，RSD值為0.92%，提示試驗方法具備良好的準確度（表8）。

3 討論

由于茺蔚子具有活血調經、清肝明目的作用，故本實驗以茺蔚子中鹽酸水蘇堿作為主要指標對其炮制方法進行考察。優化后的酒炒法下鹽酸水蘇堿含量明顯比生品高，可能與茺蔚子經酒制后增加了與酒相關的成分有關，炒制品的水溶性成分含量和鹽酸水蘇堿含量均高于生品，與中藥傳統炮制理論中“逢子必炒”的理論是相符合的[19-20]。此外，本試驗確定茺蔚子的最佳酒炒工藝為使用25%加酒量浸潤茺蔚子藥材10 min后，將其在150℃下炒制5 min后即得，茺蔚子的最佳酒炒工藝為茺蔚子其他炮制工藝提供了參考依據。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：化學工業出版社，2005：225.

[2] 陳發奎.常用中草藥有效成分含量測定[M].北京：人民衛生出版社，1997.

[3] 王寶琴.中成藥質量標準與標準物質研究[M].北京：中國醫藥科技出版社，1994.

[4] 吳壽金，趙泰，秦永祺.現代中草藥成分化學[M].北京：中國醫藥科技出版社，2001.

[5] 熊佐章.HPLC法測定復方鹽酸水蘇堿片的含量[J].基層中藥雜志，2002，16（2）：11-13.

[6] 林文群，陳宏靖，陳忠.茺蔚子化學成分的研究[J].福建師范大學學報（自然科學版），2001，17（2）：84-87.

[7] 姜舜堯.益母草藥材中水蘇堿成分的高效液相色譜法分析[J].藥物分析雜志，2001，21（4）：243-247.

[8] 劉雅茜，王夢月，史海明，等.高效液相色譜法測定甘草及其炮制品中5種活性成分的含量[J].中國藥學雜志，2008，43（16）：1268-1271.

[9] 孫淑琴，魏廣武.不同炮制方法對薏苡仁煎液的影響[J].中國中藥雜志，2000，25（11）：60.

[10] 楊能英，夏新華.HPLC測定小兒止咳顆粒中鹽酸水蘇堿的含量[J].中成藥，2003，25（7）：591-592.

[11] 楊懷鏡，姚宏春，張全望.HPLC法測定鹽酸水蘇堿和復方鹽酸水蘇堿片的含量[J].中國藥事，2003，17（3）：171-172.

[12] 高建，夏泉，黃趙剛，等.HPLC-ELSD同時測定當歸補血總苷中黃芪甲苷和黃芪皂苷Ⅱ[J].中成藥，2012，34（2）：268-272.

[13] 盧鳳來，蔣海英，陳月圓，等.HPLC-ELSD法測定山銀花中綠原酸、灰氈毛忍冬皂苷乙和川續斷皂苷乙[J].中成藥，2013，35（8）：1821-1823.

[14] 蔣小華，賓祝芳，謝運昌，等.HPLC-ELSD法同時測定紅絲線中的豆甾醇和β-谷甾醇[J].中成藥，2013，35（8）：1711-1713.

[15] 李紅燕，張蕊，馮曉川.HPLC-ELSD法測定復方枇杷止咳顆粒中桔梗皂苷D、熊果酸、齊墩果酸和貝母素甲[J].中成藥，2013，35（7）：1479-1484.

[16] 陳俊，黃玉鳳，王彬.HPLC-ELSD在中藥分析及指紋圖譜中的應用[J].藥學實踐雜志，2009，27（4）：251-253.

[17] 張蓮珠，王會弟.茺蔚子研究進展[J].長春中醫藥大學學報，2012，10（28）：920-921.

[18] 閆文靜，仲彥穎，汪豪.HPLC-ELSD法測定川牛膝中兩種三萜皂苷的含量[J].藥學與臨床研究，2014，22（4）：336-338.

[19] 黃勇紅，黃艷萍.飛揚草藥材HPLC指紋圖譜研究[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（16）：72-74.

[20] 王克英，郭思妤，祝晶，等.黔產鉤藤HPLC指紋圖譜的研究[J].中國中藥指南，2012，10（35）：69-70.

（收稿日期：2015-01-29 本文編輯：衛 軻）