貴南縣牛羊口蹄疫免疫抗體監測與分析

旦正措 （青海省貴南縣畜牧獸醫工作站 813199）

貴南縣牛羊口蹄疫免疫抗體監測與分析

旦正措 （青海省貴南縣畜牧獸醫工作站 813199）

為了全面掌握貴南縣牛羊注射口蹄疫疫苗后所產生的免疫抗體效價情況，于2014年3、6、、9、12月份，對貴南縣塔秀鄉和過馬營鎮的散養戶、縣城屠宰場屠宰的90頭牛和90只羊用正向間接血凝實驗進行了監測，免疫抗體效價第一、二、三、四季度分別為牛78.7%、85.6%、85.7%、86.05%；羊48.75%、84.15%、71%、79.65%。說明該縣牛、羊口蹄疫免疫接種工作扎實有效。

牛羊；口蹄疫；抗體；檢測分析；散養戶；屠宰場；貴南縣

1 基本情況

貴南縣位于青海省東南部，地處西傾山與黃河之間。地理坐標為東經 100°33′～101°33′， 北緯 35°09′～36°08′， 總面積6649.7平方公里，草場總面積為756.6萬畝，耕地面積為43.79萬畝，林地面積為25.26萬畝。隸屬海南藏族自治州，約占海南藏族自治州面積的14.45%。屬于共和盆地，境內南部高山連綿，挺拔高聳，為西傾山褶曲高原的一部分，直亥主峰為第一高峰，海拔5011m，中部為高原灘地，地勢開闊。黃河沿岸為河谷地帶，地勢平坦。拉西瓦黃河沿岸海拔2222m為境內海拔最低點。大部分地區海拔在3000～3500m之間。全縣共有草食畜89.26萬頭只，其中牛11.85萬頭，羊77.04萬只?？谔阋?（FMD）是豬、牛、羊等主要家畜和70多種野生偶蹄動物共患的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。該病傳播途徑多、速度快，曾多次在世界范圍內暴發流行，造成巨大政治、經濟損失，鑒于此，世界動物衛生組織 （OIE）將其列為通報疫病，我國政府將其排在15個一類動物傳染病的第一位。貴南縣2006年、2008因引進家畜引發了2次大的口蹄疫疫情流行，造成了巨大的經濟損失，鑒此，該縣非常重視家畜口蹄疫苗的免疫接種工作，該監測的目的是為了進一步掌握口蹄疫免疫效果。

2 材料和方法

2.1 實驗材料

被檢血清、96孔反應板、水浴鍋、50～100μl移液器、移液嘴、加樣槽、中國農業科學院蘭州獸醫研究所生產的口蹄疫O型間接血凝抗體檢測試劑盒。試劑批號2014022084、2014071706、規格5ml、有效期3個月、保存溫度2～8℃.

2.2 方法

正向間接血凝實驗。

2.3 實驗步驟

2.3.1 加稀釋液

在血凝板上1～7排的1～10孔、第8排的1～4孔和第5～7孔，加稀釋液50μl/孔。

2.3.2 稀釋待檢血清

待檢血清使用前，需經過56℃水浴滅活30min，取待檢滅活血清樣品50μl，分別加入反應板1～6排的第1孔中，與稀釋液混勻后，吸取50μl，加于第2孔中，依次作2倍系列稀釋至第10孔，第10孔混勻后取出50μl棄去。

2.3.3 稀釋陽性對照血清

在血清板的第7排第1孔加陽性血清50μl，2倍系列稀釋至第10孔，混勻后從該孔取出50μl丟棄。此時被檢血清和陽性血清的稀釋倍數依次為1.2～1：1024。

在血凝板的第8排第1孔加陰性血清50μl，對倍稀釋至第4孔，混勻后從該孔取出50μl丟棄。此時陰性血清的稀釋倍數依次為 1： 2、 1： 4、 1： 8、 1： 16。 第 5～7孔為稀釋液對照，每孔僅加入50μl稀釋液。

2.3.4 加血凝抗原

血清稀釋孔和稀釋對照孔加血凝抗原 （充分搖勻，瓶底應無血球沉淀）25μl/孔。將反應板置微型震蕩器上震蕩2～3min或用手依次四邊輕拍，直至血球分布均勻。封板膜封板，室溫下靜置2～3h判定結果。

2.4 判定標準

以呈現 “++”血凝反應的血清最高稀釋度作為該血清的間接血凝抗體效價。血凝反應強度表示如下：

“++++”紅細胞全部凝集，形成一層均勻膜，布滿整個孔底。

“+++” 紅細胞在孔底形成一層薄膜，面積比前者略小。

“++” 紅細胞在孔底形成薄膜凝集，邊緣松散或呈鋸齒狀。

“+” 紅細胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圓點。

“±” 紅細胞沉于孔底，但周圍不光滑或中心有空斑。

“-” 紅細胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點。

當陽性血清抗體效價≥1：256、陰性血清抗體效價≤1：16、稀釋液對照孔無自凝現象時，實驗成立。接種口蹄疫O型疫苗的豬免疫抗體效價≥1：128為免疫合格，牛羊免疫抗體效價≥1：256為免疫合格。

3 結果與分析

（1）2014年每季度采集貴南縣塔秀鄉、過馬營鎮的牧戶飼養的牦牛和綿羊以及縣城屠宰場屠宰的牛、羊血清各90份進行了監測，通過監測發現第一季度散養戶飼養的牛、羊抗體合格率分別為82.5%和57.5%；屠宰場屠宰的牛羊抗體合格率分別為75%和40%。第二季度散養戶飼養的牛、羊抗體合格率分別為85.6%和88.3%；屠宰場屠宰的牛羊抗體合格率分別為78%和80%。第三季度散養戶飼養的牛、羊抗體合格率分別為91.4%和77%；屠宰場屠宰的牛羊抗體合格率分別為80%和65%。第四季度散養戶飼養的牛、羊抗體合格率分別為77.1%和74.3%；屠宰場屠宰的牛羊抗體合格率分別為95%和85%，詳見附表。

附表 O型口蹄疫免疫抗體合格率統計表

（2）通過實驗發現貴南縣飼養的牛 “O型”口蹄疫免疫合格率較高，且6、9月份比3、12月份高。這與該縣免疫接種時間有關，該縣?？谔阋呙缑庖邥r間為4月底和9月初，這兩個季度的抗體效價高于其他季度。

（3）羊口蹄疫免疫合格率較高，且6、12月份比3、9月份高。這與該縣綿羊免疫接種時間有關，該縣春季羊口蹄疫苗免疫時間為5月份，秋季羊免疫接種時間為10月份，這兩個季度的抗體效價高于其他季度。

（4）通過檢測說明，該縣的口蹄疫免疫接種工作扎實有效，確保了免疫密度和質量。

旦正措 （1979-），女，藏，本科，助理獸醫師，主要從事動物疫病實驗室檢測工作。