牛結核病PPD皮內變態反應和ELISA檢測方法對比分析

于青海 李玉杰 孔祥華 姜秀云 陳靜 馬慧玲 藺曉月 劉麗平 徐鴻 孫圣福 田夫林

（山東省動物疫病預防與控制中心 250022）

牛結核病PPD皮內變態反應和ELISA檢測方法對比分析

于青海 李玉杰 孔祥華 姜秀云 陳靜 馬慧玲 藺曉月 劉麗平 徐鴻 孫圣福*田夫林*

（山東省動物疫病預防與控制中心 250022）

本試驗采集了2個牛場的10頭疑似結核病的血清，采用ELISA方法進行牛結核病抗體檢測，同時對該10份樣品進行了PPD皮內變態反應，通過兩種檢測方法的比較，以期篩選出切實可行牛結核病的檢測方法，為牛結核病的凈化提供基礎。

牛；結核??；PD皮內變態反應；ELIS；檢測方法

牛結核病 （Bovine tuberculosis）是由牛結核分支桿菌（Mycobacterium bovis） 和結核分支桿菌 （Mycobacterium tuberculosis）所引起的一種人畜共患的傳染病，主要引起組織器官的肉芽腫性結核結節和化膿性或干酪樣或鈣化的壞死病灶為特征，牛結核病在世界各國均有發生，在我國是常見的多發性疫病，牛結核病的流行嚴重影響畜牧業的健康發展，更嚴重威脅著人身安全。世界衛生組織 （OIE）將其列為必須通報疫病，農業部將其列為二類動物傳染病，列為檢疫撲殺對象[1]。

目前，結核病的監測主要采取PPD皮內變態反應試驗進行，PPD皮內變態反應需要現場操作，操作過程繁瑣，通量小，需要有人保定、剪毛、測皮厚，操作者有一定的風險，時間長，需要120h才能完成。因此亟需一種簡便易操作的方法替代該方法，我們引入了IDEXX的結核桿菌ELISA檢測試劑盒，采集牛血清進行抗體檢測，同時進行PPD皮內變態反應，比較兩種方法的一致性、敏感性和特異性。

1 材料和方法

1.1 被檢血清及被檢牛

2014年秋季山東省2個養牛場的疑似結核牛血清樣品10份。

1.2 試劑

牛結核菌素由黑龍江生物制品一廠提供；牛結核分支桿菌抗體ELISA檢測試劑盒由IDEXX公司提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 ELISA

按照IDEXX牛分支桿菌抗體檢測試劑盒操作說明書進行。

1.3.2 PPD皮內變態反應

將牛只頸側中部上三分之一處剪毛，直徑約10cm，用游標卡尺測量中央皮皺厚度，記錄；測量完畢，用75%酒精消毒術部，皮內注射0.1m l提純結核菌素；觀察反應：皮內注射72h后判定，觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應，并用游標卡尺測量皮皺厚度，做好記錄，疑似牛和陰性牛，96h和120h再分別觀察一次，并記錄皮厚。

2 結果

2.1 牛結核病不同檢測方法結果

2.1.1 ELISA監測結果

對2個養牛場的10頭牛采集血清進行抗體檢測，根據IDEXX的試劑盒說明書的結果判定標準，S/P值≥0.3判定為陽性，10份樣品全部為陽性。

表1 ELISA監測結果

2.1.2 PPD皮內變態反應結果

對2個養牛場的10頭牛進行PPD皮內變態反應試驗，每頭牛頸部注射0.1ml結核菌素，72h后觀察結果，有3頭牛皮厚差≥4mm，96h后觀察結果，有6頭牛皮厚差≥4mm，120h后觀察結果，有6頭牛皮厚差≥4mm。

3 結論

（1）通過采用IDEXX的牛分支桿菌抗體檢測試劑盒與傳統PPD皮內變態反應兩種結核病的監測方法的比較，發現兩種方法存在一定的差異，本試驗采用ELISA方法篩選的陽性樣品進行PPD皮內變態反應，10份樣品中PPD皮內變態反應有6份樣品為陽性，陽性符合率為60%。

表2 PPD皮內變態反應結果

（2）ELISA方法試驗操作簡單，進行94份樣品的檢測，只需要不到3h的時間即可檢出結果，而PPD皮內變態反應需要120h才可出具結果，而且操作復雜，需要輔助人員保定，剪毛、測量皮厚等過程。從檢測方法的便捷程度以及通量來看，ELISA方法較PPD皮內變態反應有很大的可操作性。

（3）從兩種方法的檢測結果來看，ELISA方法可以用來結核病的篩查，而篩查的陽性樣品可以用PPD皮內變態反應來確診。兩種方法相結合，對于牛場的結核病的凈化消除具有較高的可操作性。楊顯超等人建議采用變態反應PPD皮內結合ELISA方法進行牛結核病的監測凈化[2]。李金嶺等采用PPD皮內變態反應和ELISA結合的方式進行牛結核病的監測，建議ELISA監測陽性的進行撲殺，監測陰性而PPD皮內變態反應陽性的觀察，隔離、淘汰[3]。

[1]王曲直,劉佩紅,沈素芳,等.牛結核病診斷方法研究進展[J].中國獸醫雜志,2015,51(2)：56-59.

[2]楊顯超,吳秀娟,李凱航,等.皮試法與ELISA法結核病檢測中的對比試驗[J].上海畜牧獸醫通訊,2015(2)：10-12.

[3]李金嶺,郭宏軍,高明輝,等.歐盟皮內變態反應比較試驗法結合ELISA檢測牛結核病的研究[J].中國動物檢疫,2007,24(7)：28-29.

山東省動物疫病監測防治項目。

于青海 （1957-），男，山東省濟南市人，助理獸醫師，主要從事動物疫病監測與工作。*

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