白頭翁總皂苷結腸定位固體分散體制備

田 力， 劉紅寧， 管詠梅， 朱衛豐， 金 晨， 陳麗華， 楊 明，*

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川成都611137；2.江西中醫藥大學 現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西南昌330004）

［制 劑］

白頭翁總皂苷結腸定位固體分散體制備

田 力1， 劉紅寧2， 管詠梅2， 朱衛豐2， 金 晨2， 陳麗華2， 楊 明1，2*

（1.成都中醫藥大學藥學院，四川成都611137；2.江西中醫藥大學 現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西南昌330004）

目的 制備白頭翁總皂苷結腸定位固體分散體。方法 采用溶劑法制備白頭翁總皂苷固體分散體，以體外累計釋放度為評價指標，采用單因素方法篩選制備工藝及處方，并采用電子掃描顯微鏡 （SEM）、紅外光譜 （IR）對制備的固體分散體進行分析。結果 SEM和IR分析結果顯示白頭翁總皂苷和Eudragit S100形成了固體分散體。體外釋放度結果顯示載藥量在20%時指標成分在pH 1.0溶液中2 h基本不釋放，在pH 6.8溶液中4 h累積釋放度小于16%，在pH 7.8溶液中2 h累積釋放大于86%。結論 所制備的固體分散體達到了結腸定位的效果。

白頭翁總皂苷；結腸靶向；固體分散體；體外釋放度；電子掃描顯微鏡 （SEM）；IR

白頭翁為毛莨科植物白頭翁Pulsatilla chinensis（Bunge）Regel的干燥根，始載于《本經》。功擅清熱解毒、涼血止痢，尤善清大腸濕熱及血分熱毒，為治療熱毒血痢之良藥，是臨床治療潰瘍性結腸炎的常用藥物［1-2］。近年來，對白頭翁的藥理學研究證實，白頭翁提取物具有顯著的抗炎、抗氧化以及增強免疫的作用，具備良好的新藥開發前景［3-5］。臨床上多采用灌腸的方法治療潰瘍性結腸炎，但患者順應性差。白頭翁總皂苷是從中藥白頭翁中提取分離得到的有效部位，但由于水溶性

差［6］，難以溶出，生物利用度低［7］，采用普通制劑白頭翁總皂苷在到達結腸前已經大部分被吸收破壞，使得病變部位濃度較低，影響了藥效的發揮。采用結腸靶向給藥系統可以使藥物達到結腸后再釋放，增加結腸部位藥物的濃度，從而提高白頭翁總皂苷治療潰瘍性結腸炎的療效。本研究采用結腸靶向給藥，擬以EudragitS100為載體，將白頭翁總皂苷制備成固體分散體，利用EudragitS100在pH大于7的條件下才溶解的特性達到結腸定位作用，同時白頭翁總皂苷被高度的分散，進入結腸后隨著EudragitS100的溶解而迅速溶出。通過提高結腸部位藥物的濃度，達到提高藥效的目的。

1 材料

TG328 A型分析天平（德國Sartoius公司）；DZF-6050型真空干燥箱 （上海新苗醫療器械制造有限公司）；6390LV-掃描電鏡 （日本電子公司）；HH-8型數顯恒溫水浴鍋 （江蘇金壇市榮華儀器制造有限公司）；Agilent1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；ZRS-8G型智能溶出儀（天津天大天發科技有限公司）；470-傅立葉紅外光譜儀（美國Nicolet公司）；MS2000型激光粒度儀（美國馬爾文公司）；四兩裝高速中藥粉碎機 （瑞安市永歷制藥機械有限公司）；白頭翁總皂苷 （中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，批號1306171）；常春藤皂苷元3-0-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-［β-D-吡喃葡萄-（1→4）］-L-吡喃阿拉伯糖苷對照品 （代號B3，中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心，純度≥95%，批號20141208）；Eudragit S100（贏創德固賽公司）；甲醇、乙腈為色譜級；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、鹽酸均為分析純；雙蒸水為實驗室自制。

2 方法與結果

2.1 體外溶出實驗

2.1.1 供試品溶液制備 取物理混合物適量，置100 mL錐形瓶中，分別加入pH 1.0、pH 6.8、pH 7.8的溶液20 mL，旋渦10 min，離心，取上清液，0.45μm微孔濾膜過濾，備用。

2.1.2 色譜條件 phenomenex C18色譜柱（250 mm×4.60 mm，5μm）；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液 （39∶61）；檢測波長203 nm；柱溫30℃；體積流量1.0 mL/min；進樣量20μL；理論塔板數以常春藤皂苷元3-0-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-［β-D-吡喃葡萄-（1→4）］-L-吡喃阿拉伯糖苷計不低于5 000。

2.1.3 線性關系考察 精密稱取常春藤皂苷元3-0-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-［β-D-吡喃葡萄-（1→4）］-L-吡喃阿拉伯糖苷對照品 （B3）5.00 mg，置于10 mL量瓶中，甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，得500.0μg/m L對照品貯備液。分別精密吸取該貯備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 m L分別置于5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按“2.1.2”項條件進樣，記錄峰面積 （A），以質量濃度 （C）為橫坐標，峰面積 （A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A=5.021 2C+12.587；r= 0.999 5。結果表明對照品在10.0～200.0μg/mL范圍內線性關系良好。

2.1.4 精密度試驗 取質量濃度為30.5μg/mL對照品溶液，于同一天不同時間測定6次并連續測定3 d。計算日內與日間精密度RSD分別為0.89%、0.73%。表明儀器精密度良好。

2.1.5 加樣回收率試驗 取已知含有量供試品溶液10 m L，加入B3對照品5 mg，旋渦使其溶解，加入相應溶液稀釋，混勻。平行3份。按“2.1.2”項色譜方法進樣測定，計算加樣回收率。結果在pH1.0、pH6.8、pH7.8的溶液中指標性成分 B3的回收率分別為 98.7%、101.3%、100.7%，RSD分別為1.2%、0.89%、0.56%表明方法回收率良好。

2.1.6 穩定性試驗 按 “2.1.1”項制備供試品，按照 “2.1.2”項色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24、48 h進樣，記錄色譜峰峰面積，計算RSD，結果在pH 1.0、pH 6.8、pH 7.8的溶液中指標性成分B3的峰面積RSD分別為1.64%、0.45%、0.53%，表明供試品溶液在48 h內穩定性良好。

2.1.7 藥物的溶出度測定 精密稱取白頭翁總皂苷固體分散體及原料藥，采用 《中國藥典》2010年版二部附錄XC溶出度測定法中第二法，即槳法測定。轉速50 r/min，溫度（37±0.5）℃，溶出介質參照 《中國藥典》2010年版二部附錄XD及XIXD規定，選擇pH 1.0的稀鹽酸，pH 6.8、7.8的磷酸緩沖液 （PBS），根據食物在體內的轉運過程和時間，將白頭翁總皂苷固體分散體及原料藥于pH 1.0的稀鹽酸2 h，pH 6.8的PBS 4 h，并分別于1、2、4 h取樣2 mL，pH 7.8的PBS 2 h，取樣2 m L（同時補加同溫度等量溶出介質），以0.45 μm微孔濾膜過濾，取續濾液得各供試品溶液。按

“2.1.2”項色譜條件下測定溶出介質中指標性成分常春藤皂苷元3-0-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-［β-D-吡喃葡萄-（1→4）］-L-吡喃阿拉伯糖苷峰面積，用外標一點法計算濃度，并換算成累積溶出度。累100%其中Cn為各時間點的取樣濃度，V1為各時間點固定取樣體積，V2為溶出介質體積，m為溶出杯中指標性成分B3的量。

2.2 白頭翁總皂苷固體分散體制備工藝考察

2.2.1 樣品制備 按處方分別稱取白頭翁總皂苷、EudragitS100，分別加入適量溶劑溶解后混勻，45℃減壓蒸發除去溶劑，真空干燥，粉碎過6號篩，即得。置干燥器內備用。

2.2.2 溶劑的考察 白頭翁總皂苷溶解性較差，為了使藥物和輔料達到分子水平的混合，必須將它們完全溶解后再混合。乙醇為制劑中常用的溶劑，對人體無害，對不同體積分數的乙醇進行考察。以將1 g藥物完全溶解所需最小體積的乙醇來考察藥物在50%、70%、90%乙醇中的溶解性。稱取適量白頭翁總皂苷于燒杯中，加入適量乙醇，攪拌，觀察是否溶解，若未完全溶解則繼續加入乙醇，直至完全溶解，記錄加入乙醇的量。結果1 g白頭翁總皂苷溶解所需50%、70%、90%乙醇的量分別為73、40、58 m L，顯示藥物在70%乙醇中溶解性最好。

2.2.3 溶解溫度考察 考察白頭翁總皂苷在40℃、60℃、80℃在70%乙醇中的溶解性。結果顯示溫度對白頭翁總皂苷的影響較大，隨著溫度的升高溶解度提高。40、60、80℃時所需70%乙醇的量分別為79、47、40 mL。精密稱取適量白頭翁總皂苷于10 m L量瓶中，加入9 mL 70%乙醇，密封，平行3份。置于80℃水浴中分別于0、0.5、1、2 h取出，氮氣吹干溶劑后，加入甲醇超聲溶解，定容，混勻。過0.22μm微孔濾頭，取續濾液。按照 “2.1.2”色譜條件進樣，計算指標性成分常春藤皂苷元3-0-α-L-吡喃鼠李糖-（1→2）-［β-D-吡喃葡萄-（1→4）］-L-吡喃阿拉伯糖苷含有量。含量測定結果RSD為1.9%，表明在80℃水浴中白頭翁總皂苷在2 h內穩定性較好，因此選擇80℃為溶解溫度。

2.2.4 載藥量考察 分別考察載藥量為10%、20%、30%時固體分散體體外累積釋放度。結果見表1，結果顯示隨著載藥量的提高，藥物在pH 6.80溶液中累計釋放度增加。載藥量30%時在人工小腸液中釋放較多，達到了20.9%。載藥量為20%時在人工小腸液中釋放較少，小于15%。因此確定載藥量為20%。體外溶出結果見表1。

表1 白頭翁總皂苷固體分散體中指標性成分 （B3）累積溶出度 （%，，n=6）Tab.1 Results of indicator com ponents（B3）in vitro release from total saponins from Pu lsatilla solid dispersion（%，，n=6）

表1 白頭翁總皂苷固體分散體中指標性成分 （B3）累積溶出度 （%，，n=6）Tab.1 Results of indicator com ponents（B3）in vitro release from total saponins from Pu lsatilla solid dispersion（%，，n=6）

原料藥pH 1.0（2 h）釋放介質 載藥量10% 載藥量20% 載藥量30% 0±0 0±0 0±0 2.1±0.19 pH 6.8（1 h） 8.2±0.32 9.4±0.44 15.3±0.31 80.7±3.6 pH 6.8（2 h） 9.5±0.41 10.3±0.36 17.5±0.45 80.2±4.3 pH 6.8（4 h）10.3±0.68 12.6±0.65 20.9±0.73 81.2±4.6 pH 7.8（2 h）86.6±0.68 86.2±1.8 88.1±1.2 81.0±3.7

2.2.5 粉碎時間考察 取干燥的白頭翁總皂苷固體分散體于粉碎機中，粉碎一定時間，取出過6號篩。稱定質量計算得率 ［得率=（通過6號篩粉末的量/固體分散體總量） ×100%］。粉碎1、2、3、4、5 min時得率分別為 54.0%、83.8%、91.1%、95.5%、95.6%，結果顯示在4 min內隨著時間的增加，得率增加，4 min時達到95.5%，4 min后繼續增加粉碎時間，得率基本不變。因此選擇將干燥的固體分散體粉碎4 min。

根據以上單因素考察結果，確定采用Eudragit S100為輔料，載藥量為20%。EudrgitS100以乙醇溶解，備用，白頭翁總皂苷以70%乙醇水浴80℃加熱溶解，倒入EudragitS100溶液中混勻，45℃減壓蒸發除去溶劑，真空干燥，粉碎4 min過6號篩，既得。

2.3 固體分散體的評價

2.3.1 粒徑測定 馬爾文粒徑測定儀干法測定，樣品測定時間12 s，背景時間8 s，普通模式，遮光度0.5～6；分散進樣控制：分散氣壓1.5 bar；進樣速度60%；依上述條件建立測量程序SOP，實驗結果見表2。

表2 粒徑分布（，n=3）Tab.2 Partical size in distribution（，n=3）

表2 粒徑分布（，n=3）Tab.2 Partical size in distribution（，n=3）

注：d（0.5）為中位粒徑，表示所測樣品中50%小于該值；d（0.9）為眾位粒徑表示所測樣品中90%小于該值。

d（0.1）/μm d（0.5）/μm d（0.9）/μm 9.703±0.202 62.981±0.925 158.794±1.257

2.3.2 電子掃描顯微鏡（SEM） 真空鍍金70 s，用掃描電鏡觀察白頭翁總皂苷、Eudragit S100，白頭翁總皂苷與EudragitS100的物理混合物及其固體分散體的表面結構，見圖1。Eudragit S100為球形

或類球形顆粒，白頭翁總皂苷為卷曲的片狀，物理混合物中可見白頭翁總皂苷特征和Eudragit S100的特征，固體分散體為塊狀物，白頭翁總皂苷和Eudragit S100的特征均消失。

圖1 Eudragit S100（A）、白頭翁總皂苷（B）、白頭翁總皂苷固體分散體 （C）、物理混合物 （D）的掃描電鏡圖Fig.1 SEM images of Eud ragit S100（A），total saponins from Pulsatilla（B），total saponins from Pulsatilla solid dispersion（C），and physical m ixture（D）

2.2.3 傅利葉變換紅外光譜測定 采用KBr壓片法測定紅外光譜，分辨率4 cm-1，掃描范圍4 000～400 cm-1全譜掃描，結果見圖2。白頭翁總皂苷在782、815、882、914、1 387、1 695、2 941 cm-1存在特征吸收，Eudragit S100在752、842、1 388、1 449、1 729 cm-1存在特征吸收，固體分散體中白頭翁總皂苷的特征吸收峰782、815、882、2 941 cm-1消失，1 695 cm-1的特征吸收峰強度減弱。物理混合物的特征表現為白頭翁總皂苷和Eudragit S100特征峰的疊加。表明所制備的分散體并不是簡單的物理混合。

3 工藝重復性

按 “2.2”項確定的處方及方法制備3批白頭翁總皂苷固體分散體，按 “2.1.7”項下方法對其體外釋藥性能進行評價，結果在pH 1.0的溶液中2 h累積溶出度均為0，在pH 6.8的溶液中4 h的累積溶出度分別為15.3%、15.0%、13.6%，在pH 7.8溶液中2 h累積溶出度分別為86.6%、 89.8%、87.0%。表明工藝重復性好。

圖2 白頭翁總皂苷（A）、Eudragit S100（B）、白頭翁總皂苷固體分散體 （C）、物理混合物 （D）紅外光譜圖Fig.2 IR images of total saponins from Pulsatilla（A），Eudragit S100（B），total saponins from Pulsatilla solid dispersion（C），and physicalm ixture（D）

4 討論

結腸靶向給藥系統主要分為時滯型、酶控型、pH依賴型、壓力依賴型等，其中pH依賴型經多年臨床研究證實具有結腸靶向制劑的治療特點和優勢，是當前開發結腸靶向制劑最有效的方法［8］，目前已經有pH依賴型、時滯型產品上市，如丹麥Ferring公司的Pentasa（時滯型）、英國Tillotts公司的Ascol（pH依賴型）［9］。制備方法上主要采用包衣/制備骨架片等方法。白頭翁總皂苷水溶性較差，直接將其制備成微丸，藥物難以釋放，陳振華等［10］將其制備成環糊精包合物后，其體外溶出明顯增加，環糊精的加入降低了微丸載藥量。中藥腸溶粉體、緩釋粉體已經有較多報道［11-14］，本實驗以pH依賴型輔料EudragitS100為輔料，利用其pH大于7時才溶解的特性，采用溶劑法，制備白頭翁總皂苷固體分散體，使藥物在上消化道不釋放，達到結腸后再釋放，提高了藥物在結腸部位的濃度，以期達到提高白頭翁總皂苷治療潰瘍性結腸炎的療效。電掃描鏡及紅外光譜分析結果均顯示制備的固體分散體并不是簡單的物理混合。當載藥量為20%時，體外溶出度實驗結果顯示在pH 6.8的溶液中累積溶出度較小，而在pH 7.8的溶液中釋放較快，達到了結腸定位效果。其體內靶向性及在提高白頭翁總皂苷治療潰瘍性結腸炎療效方面將進一步驗證。

由于白頭翁總皂苷固體分散體在pH 1.0、pH 6.8的溶液中難以溶出，因此在制備供試品時，采用的是物理混合物，并通過旋渦混合促進藥物的溶出。固體分散體為多元分散體系，進行溶出實驗不

容易更換溶液，因此分別取藥物在pH 1.0、pH 6.8、pH 7.8的溶液中考察其溶出度。

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Preparation of colon-specific solid dispersion of total saponins from Pulsatilla

TIAN Li1， LIU Hong-ning2， GUAN Yong-mei2， ZHU Wei-feng2， JIN Chen2， CHEN Li-hua2，YANG Ming1，2*

（1.College of Pharmacy，Chengdu University of TCM，Chengdu 611137，China；2.Key Laboratory for Modern TCM Preparations，Ministry of Education；Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 33OOO4，China）

AIM To prepare a colon-targeted solid dispersion of total saponins from Pulsatilla chinensis.

total saponins from Pulsatilla chinensis；colon-specific；solid dispersion；in vitro release；scanning electron microscopy（SEM）；Fourier transform infrared spectroscopy（FTIR）

R944

A

1001-1528（2015）12-2619-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.12.010

2015-04-27

十二五重大新藥創制項目 （2013ZX09103002-001）；江西省落地計劃項目 （贛財教 ［2011］243號）；江西省衛生廳項目（2012A036）.

田 力 （1987—），男 （土家族），碩士，從事中藥新劑型與新技術研究。Tel：13477985346，E-mail：461264789@qq.com

*通信作者：楊 明，男，博士，教授，研究方向為中藥新劑型與新技術。Tel：（0791）87118658，E-mail：yangming16@126.com

M ETHODS Total saponins from Pulsatilla solid dispersion prepared by solvents，took its in vitro cumulative release rate as the sole evaluation index for screening of optimal preparation and prescriptions analyzed by SEM and FTIR.RESULTS SEM and FTIR analysesmanifested that thewell-formed solid dispersion of total saponins from P.chinensis and Eudragit S100，when loaded with 20%drug，there was no in vitro release of indicator component in 2 h at pH 1.0；the 4h cumulative release rate was less than 16%when pH adjusted to 6.8；the 2 h cumulative release rate surpassed 86%at pH 7.8.CONCLUSION The prepared solid dispersion can be expected to be a colon-specific agent.