沙利度胺對人結腸癌小鼠移植瘤放射敏感性的影響及其機制

沙利度胺對人結腸癌小鼠移植瘤放射敏感性的影響及其機制

王媛惠雙

(南陽市中心醫院，河南南陽473000)

摘要〔〕目的探討沙利度胺對人結腸癌小鼠移植瘤放射敏感性的影響及其協同作用的機制。方法建立Colon26腸癌小鼠移植瘤模型，將28只小鼠隨機分為對照組、單純放療組(R組)、單純沙利度胺組(T組)、放療聯合沙利度胺組(T+R組)。自治療當日起，次日測量腫瘤體積，計算腫瘤抑制率，并將小鼠斷髓處死后剝離瘤體，采用免疫組織化學法對各腫瘤組織中微血管密度(MVD)進行測量。結果治療前各組小鼠移植瘤體積之間差異均無統計學意義(P>0.05)；腫瘤體積隨治療時間的延長逐漸變大，對照組小鼠明顯大于另外三組(P<0.05)；其中T+R組小鼠移植瘤體積增長最慢，腫瘤生長曲線最為平緩。治療結束時，各實驗組小鼠移植瘤體積均明顯小于對照組(P<0.05)；與對照組相比，T組、R組、T+R組抑制率分別為42.1%、47.3%、62.0%。對照組MVD數量最多，分布密集度最高；T+R組MVD數量最少，壞死區域面積最大，移植瘤組織中的MVD表達明顯低于另外三組(P<0.05)。結論沙利度胺能夠有效增強結腸癌小鼠移植瘤的放射敏感性，其可能機制與抑制移植瘤血管的生成有關。

關鍵詞〔〕結腸癌；沙利度胺；放射敏感性；微血管密度；移植瘤

中圖分類號〔〕R735.3+5〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：惠雙(1976-)，男，副主任醫師，主要從事腫瘤靶向治療研究。

第一作者：王媛(1985-)，女，碩士，主要從事腫瘤治療研究。

目前臨床對結腸癌治療的主要手段包括手術、放療、化療，其中放療是不可或缺的輔助治療手段，但腫瘤細胞通常對放療的敏感性較低〔1，2〕。研究發現，沙利度胺可有效提升人食管癌細胞對放療的敏感性，且與血管內皮生長因子有關〔3〕。但關于沙利度胺在提升結腸癌放療敏感性的作用效果和機制的研究仍鮮有報道。本次研究采用Colon26腸癌小鼠移植瘤模型，從腫瘤組織血管形成的角度初步探討抗腫瘤機制，觀察沙利度胺的放射增敏效果。

1材料與方法

1.1試劑與儀器沙利度胺，美國Sigma公司產品，批號093K461；RPMI-1640培養基、胎牛血清、胰蛋白酶均為美國HyClone公司產品；大鼠抗小鼠CD34/IgG單克隆抗體購于北京翰譜醫藥生物研究所。放射治療設備采用Precise Clinac EX Primus型醫用電子直線加速器，德國西門子公司產品，TS100型倒置顯微鏡購于日本尼康公司。

1.2實驗動物和細胞株健康雄性BALB/C小鼠28只，6～8周齡，體質量(20±2)g，購于北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號：僦(京)2005-00130。小鼠結腸腺癌Colon26細胞系由鄭州大學提供。

1.3實驗方法①模型建立：將結腸腺癌Colon26細胞系體外培養到指數生長期，制成單細胞懸液，取0.3 ml懸液(約含腫瘤細胞1×106)，在小鼠前腿進行皮下注射，共接種28只，均成瘤，成功建立小鼠移植瘤模型。②分組：模型建立后1 w將28只小鼠隨機分對照組、單純放療組(R組)、單純沙利度胺組(T組)、放療聯合沙利度胺組(T+R組)，每組7只。對照組給予0.9%氧化鈉溶液灌胃，每次0.3 ml，1次/d；R組小鼠在清醒狀態下捆綁固定，用6 MVX射線照射，SSD為100 cm，照射劑量為8 Gy，輸出率300 mU/min；T組將沙利度胺用0.9%氧化鈉溶液溶解，按200 mg/kg劑量灌胃。③腫瘤生長曲線：治療后次日對腫瘤長徑(a)和與其垂直的短徑(b)進行測量，估算腫瘤體積，計算腫瘤生長抑制率；飼養第22天時斷髓處死小鼠，將腫瘤剝離后放入4%中性甲醛固定液中。④腫瘤生長延遲(TGD)時間和放射增敏比(SER)：各實驗組小鼠腫瘤體積增大到開始實驗時5倍需要的時間和對照組小鼠腫瘤用時得差值為TGD時間；T+R組TGD時間和R組TGD時間的比值為沙利度胺對照射的SER。

1.4腫瘤細胞壞死程度判斷首先在低倍鏡下對切片的整體染色情況進行觀察，然后在高倍鏡下對切片的10個視野進行觀察，在每個視野中計數100個重度壞死細胞，計算平均值反應腫瘤組織中的壞死水平。

1.5免疫組化檢測微血管密度(MVD)用CD34對血管內皮細胞進行染色標記，陽性細胞未呈淺黃色到深棕色顆粒；可被染色的內皮細胞，只要同周圍微血管、相連組織之間有明顯的分界線，則作為一個可計數的微血管。取5個高倍鏡視野下血管數目的均值。

1.6統計學方法應用SPSS18.0軟件行t檢驗及方差分析。

2結果

2.1各實驗組對結腸癌小鼠移植瘤生長的影響治療前各組小鼠移植瘤體積之間差異均無統計學意義(P>0.05)；腫瘤體積隨治療時間的延長逐漸變大，對照組小鼠明顯大于另外三組(P<0.05)；其中T+R組腫瘤體積上升最慢，生長曲線最平緩。與對照組小鼠相比，R組、T+R組小鼠腫瘤體積增加到治療前五倍時的TCD值分別為6.0、2.7 d，SER值2.32。治療第22天，各實驗組小鼠腫瘤體積均明顯小于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)；與對照組相比，T組、R組、T+R組抑制率分別為42.1%、47.3%、62.0%。

2.2腫瘤組織病理形態對照組小鼠腫瘤細胞成片狀分布，生長旺盛，腫瘤壞死區極少；T組小鼠腫瘤細胞核體積小，排布緊密，染色質濃縮邊集，少數細胞核斷裂表現出體積不等的細胞核小體；R組小鼠腫瘤細胞可見少量的組織濃染區和較多的腫瘤壞死區，組織中存在有少數異常腫瘤細胞，呈巢狀分布于正常腫瘤細胞間，細胞核濃染、固縮、壞死；T+R組小鼠腫瘤細胞中可見大面積壞死區域，極少數正常腫瘤細胞。見圖1。

2.3對MVD表達的影響對照組MVD數量最多，分布密集度最高；T+R組MVD數量最少，壞死區域面積最大，移植瘤組織中的MVD表達明顯低于另外三組(P<0.05)。見圖2，表1。

圖1　光鏡下各組小鼠腫瘤組織病理形態(×100)

圖2　光鏡下各組小鼠腫瘤組織中MVD的表達(×100)

分組MVD壞死細胞對照組37.68±11.3547.89±10.55T組23.87±11.8260.77±7.92R組22.78±10.4161.81±6.37T+R組20.58±11.7064.52±7.35

3討論

近年來研究顯示，沙利度胺能夠通過抑制腫瘤血管內皮生長因子及堿性成纖維細胞生長因子的分泌，發揮抗血管生成的作用；通過升高自然殺傷(NK)細胞活性和調節T淋巴細胞功能，增強機體的免疫功能，起到良好的抗腫瘤效果〔4〕?？鼓[瘤血管生成已經逐漸成為臨床中腫瘤治療新的方案，與放療相互結合，能夠取得較好的治療效果。臨床治療中選用的特異性抗血管生成藥包括恩度、貝伐單抗等，由于價格較高，阻礙了其在經濟條件不理想的癌癥患者中的推廣〔5〕。沙利度胺作為一種成本和售價較低的抗血管生成藥，逐漸得到了關注。高MVD者放射敏感性好〔6〕。本次研究顯示，沙利度胺與放療聯合使用能夠明顯抑制結腸癌小鼠移植瘤的生長，抑制效果明顯好于沙利度胺與放療單獨使用。本次研究中還發現T+R組小鼠腫瘤生長抑制的程度明顯優于T組、R組，而僅僅是兩個單獨治療方案相關療效的簡單加和，其原因主要為腫瘤病灶的生成是一個復雜的過程，通過多種因素的共同作用，需進一步深入研究。本次研究中T+R組的MVD明顯低于另外三組，說明聯合治療能對結腸癌小鼠移植瘤的血管生成起到明顯的抑制作用。其原因除去放射治療能夠將部分腫瘤細胞直接殺死，使腫瘤組織中MVD的表達降低之外，還可能因為沙利度胺能夠對腫瘤組織中紊亂的血管網起到較好的改善作用，促使其功能和結構正?；?，進而使組織微循環得到改善，提升血液灌注和氧分壓，進而提高了放療的效果。

4參考文獻

1劉志巖，趙航.老年結腸癌致腸梗阻103例臨床分析〔J〕.中國老年學雜志，2011；31(10)：1877-8.

2田青山.老年結腸癌23例治療體會〔J〕.中國老年學雜志，2011；31(18)：3592-3.

3于靜萍，孫志強，倪新初，等.沙利度胺聯合放療治療食管癌的臨床觀察〔J〕.中華放射醫學與防護雜志，2012；32(4)：369-73.

4趙變鋒.沙利度胺抗腫瘤機制及臨床研究進展〔J〕.內科急危重癥雜志，2011；17(1)：50-1.

5徐玲玲.抗腫瘤血管生成靶向藥物的不良反應、發生機制及處理〔J〕.國際腫瘤學雜志，2010；37(3)：196-9.

6張蓓，魏冉，胡文娟，等.乳腺癌新輔助化療MR灌注成像與微血管密度的相關性研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2011；18(17)：1387-91.

〔2015-01-12修回〕

(編輯袁左鳴)