痰熱清對產超廣譜β-內酰胺酶肺炎克雷伯菌的體外抑制作用研究

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痰熱清對產超廣譜β-內酰胺酶肺炎克雷伯菌的體外抑制作用研究

宋遠瑛

(湖北中醫藥大學臨床醫學院 中醫內科,湖北 武漢430065)

呼吸道感染是臨床常見疾病，致病菌包括肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌(Kpn)等[1]。近年來，關于Kpn導致的院內感染的報道越來越多，β-內酰胺酶類廣譜抗生素在臨床的廣泛應用使Kpn的耐藥也在增加，會使Kpn產生ESBLs，限制了青霉素及頭孢類抗生素的臨床應用，使病情遷延不愈，并使患者的治療成本增加，因而尋找抗產ESBLs肺炎克雷伯菌的有效方案，臨床意義重大。而隨著對祖國醫學的研究逐步深入，在臨床治療上有許多優勢等待發現。痰熱清為中藥制劑，有清熱解毒之效，使患者的機體免疫力得到提高，在呼吸道感染的治療上有著很好的效果[2，3]。本次研究中，根據CLSI(美國臨床與實驗室標準化機構)介紹使用的肉湯稀釋法，在體外對產ESBLs肺炎克雷伯菌行抑菌試驗，觀察單用痰熱清及特治星(哌拉西林/他唑巴坦)聯合痰熱清兩者的抑制效果，予以報道。

1資料和方法

1.1一般資料

送檢標本來源于在2014年1月-2014年8月期間，取自我院患者送至檢驗科進行檢驗的痰標本。分離出產ESBLS肺炎克雷伯菌株，質控菌購買自上海復祥生物公司，為Kpn ATCC 700603；特治星注射液購買自美國惠氏制藥有限公司(批準文號 H20030315，規格：哌拉西林4 000 mg與三唑巴坦500 mg)；痰熱清購買自上海凱寶藥業公司(國藥準字Z20030054，規格：每支裝10 ml)；BPX-162型電熱恒溫培養箱(上海博訊實業公司)；生物安全柜(上海中庸檢驗設備公司)；Vitek 2 Compact 全自動微生物分析系統(上海歡奧科技公司生產)。

1.2方法

1.2.1分離和鑒定產ESBLs肺炎克雷伯菌嚴格遵守《全國臨床檢驗規程》的要求及標準對痰標本進行培養、分離。應用Vitek 2 Compact 全自動微生物分析系統鑒定和篩選菌株，確認時根據CLSI(美國臨床與實驗室標準化機構)指導的紙片擴散法。

1.2.2試驗分組分為5個處理組，A組為痰熱清濃度對倍稀釋；B組為痰熱清濃度遞減；C組為特治星用藥組；D組為痰熱清與特治星聯合應用組，各自分為10小組，使用對倍稀釋法，間隔8 h后應用特治星；E組為痰熱清與特治星聯合應用組，各自分為10小組，使用濃度遞減法，間隔8 h后應用特治星。

1.2.3試驗方法上述各組均在35℃溫箱培養，在24 h后測定各組痰熱清及特治星的MIC值(最小抑菌濃度)。不同處理組痰熱清濃度與特治星濃度，詳見表1、表2。

2結果

2.1各處理組的試驗表現

在A組中，第1管未生長出細菌，第2-10管表現均渾濁；B組中，第1-4管未生長出細菌，第5-10管表現均渾濁；C組中，第1-6管未生長出細菌，第7-10管表現均渾濁；D組中，1小組中第1-2管未生長出細菌，第3-10管表現均渾濁,2-10小組中第1管均未生長出細菌，后9管表現渾濁；E組中，1小組中第1-6管未生長出細菌，第7-10管表現均渾濁,2-4小組中第1-5管未生長出細菌，第6-10管表現均渾濁,5小組中第1-3管未生長出細菌，第4-10管表現均渾濁，6-10組中第1-2管未生長出細菌，第3-10管表現均渾濁。

表1　不同處理組痰熱清的濃度情況(μl/ml)

表2　不同處理組特治星的濃度情況(μg/ml)

2.2抑制試驗結果

對產ESBLs肺炎克雷伯桿菌的最小抑菌濃度上，痰熱清為750 μl/ml，特治星為28.125 μg/ml，在應用痰熱清8 h后，痰熱清濃度達到450 μl/ml以上，特治星的用藥劑量可以下降至5.625以下，詳見圖1。

3討論

痰熱清為中藥制劑，內含金銀花、熊膽粉、連翹、黃芪等中藥材。因其具有鎮靜止咳、解除痙攣、解毒清熱、平喘祛痰之效，并具有調節免疫力及抵抗致病菌入侵的作用，廣泛應用于小兒支氣管肺炎、老年COPD等常見呼吸內科疾病的治療[4]。對于鮑曼不動桿菌、銅綠假單胞菌等引起的肺炎，在給予常規西藥抗生素治療的基礎上，聯合應用痰熱清能夠起到更好的療效，縮短患者的住院時間[5,6]。該方中金銀花具有清血解毒、宣肺解表之效，山羊角、熊膽粉具有明目平肝、解熱抗菌之效，連翹能夠起到散結疏風，解毒清熱的效果，黃芪能夠涼血解毒、散熱除濕?，F代藥理表明，痰熱清的抗菌、解熱和抗炎效果顯著，對多種呼吸道病毒株培養細胞病變，能產生較好的抑制作用[7,8]；對多種細菌菌株成長有抑制作用，減少耐藥菌的生成[9]。在對于耐藥菌的治療上，痰熱清具有許多藥理作用等待一線研究人員發現。

圖1　聯合應用痰熱清與特治星后的抑菌曲線效果圖

在本次研究中，對產ESBLs肺炎克雷伯桿菌的最小抑菌弄濃度上，痰熱清為750 μl/ml，特治星為28.125 μg/ml，在應用痰熱清8 h后，痰熱清濃度達到450 μl/ml以上，特治星的用藥劑量可以下降至5.625以下。并且我們發現，與痰熱清與特治星同時應用比較，在兩者間隔8 h先后給藥可以顯著使用藥量減少，并且顯著的升高抑菌療效。據曹小利等[10]報道，痰熱清能夠對細菌間傳播R質粒有效的進行阻斷，減少因R質粒所引起的細菌耐藥。痰熱清還能夠對細菌的外排泵起到抑制作用，減少耐藥基因的擴增及表達，并能夠影響耐藥菌的代謝，另外痰熱清對機體免疫力的調節，可以顯著減少耐藥菌的生成和繁殖[11]。因而對ESBLs肺炎克雷伯桿菌具有極佳的抑菌效果。

參考文獻：

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[9]裴學勇,劉晶晶.肺炎克雷伯桿菌所致社區獲得性肺炎死亡1例[J].中國危重病急救醫學,2012,24(10):623.

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[11]Li W,Xing L,Fang L et al.Application of near infrared spectroscopy for rapid analysis of intermediates of Tanreqing injection.[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2010,53(3):350.

文章編號：1007-4287(2016)01-0087-03

(收稿日期：2015-02-22)