珠三角地區兒童外陰陰道炎病原菌分布及藥物敏感性分析

鐘華敏,謝永強,關小珊,黃蓮芬,吳曉明

(廣州市婦女兒童醫療中心 檢驗科,廣東 廣州 510120)

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珠三角地區兒童外陰陰道炎病原菌分布及藥物敏感性分析

鐘華敏,謝永強,關小珊,黃蓮芬,吳曉明

(廣州市婦女兒童醫療中心 檢驗科,廣東 廣州 510120)

(ChinJLabDiagn,2016,20:0107)

近年來，兒童外陰陰道炎的發病率呈上升趨勢，成為小兒婦科門診中的主要疾病之一。由于小兒的解剖、生理和行為等特點，其陰道炎在病因、臨床表現、治療和愈后等方面均與成人不同。小兒外陰炎是一個連續的過程，其發生與季節及年齡也有一定的關聯性，不同地域的氣候、不同年齡段人群的病原菌分布也存在一定的差異。近年來隨著對兒童外陰陰道炎的廣泛抗生素治療，耐藥性也發生了變化。因此，對兒童陰道炎進行地域性病原學分析及耐藥性研究，了解不同年齡段、不同氣候類型的陰道炎病原學分析和細菌耐藥情況，可以為臨床疾病預防、診斷、合理選擇抗生素進行有效治療，減少耐藥菌株的發生提供依據。

1材料與方法

1.1研究對象

隨機選擇2013年1月-2014年12月在本院女性?？浦委煹呐R床診斷為外陰陰道炎的患兒，患兒均以外陰痛癢、陰道分泌物增多為主訴就診。為對季節性因素進行研究，所有入選對象均為發病前已在珠三角地區連續居住3個月以上者。對已接受抗生素治療的患兒及伴有其他部位感染或免疫缺陷者等均排除。經統計符合入選標準并且臨床資料完整的共683例，年齡<14歲。

1.2分組情況

683例患兒按年齡分為0-3歲組(109例)，3-7歲組(307例)，>7歲組(267例)；按首次就診時間(季節)分為：1-3月份組(86例)，4-6月份組(166例)，7-9月份組(234例)，10-12月份組(197例)。

法國梅里埃公司VITEK 2 Compact細菌鑒定儀及藥敏系統。接種、分離及鑒定培養基購自廣州迪景微生物科技有限公司，藥敏紙片、M-H藥敏培養基，購自英國OXOID公司。

1.3儀器與試劑

1.4測試方法

自我效能感具有普遍性和具體性這兩種性質。自我效能感被認為是在某一特定行為、情境或任務中，人們經由這些行為、情景對自我目標達成能力的信念。自我效能感在人格特質中并不穩定，他經常受一些行為、活動、情景影響。但是 又由于各項活動任務多領域的較差，自我效能感又具有了相對普遍的性質。

學生畢業和取得專業學位的描述清楚,符合學校制度和工作規范;對2016屆應屆畢業生進行了學生的“社會能力”“專業水平”和“專業能力”的達成評估,評估方法正確、結論可信,實現了對學生在整個學習過程中的表現進行跟蹤與評估;以流程圖形式說明了學業預警和畢業審核流程,以及對受到學業預警學生的幫扶措施,跟蹤、評估措施到位,評估結論可信。通過對近三年本專業畢業生的就業統計分析,本專業畢業生的就業或升學情況優良。

細菌培養鑒定：標本接種普通血平板和流感嗜血桿菌選擇性巧克力平板，5%CO2培養箱35℃培養18-24 h，按照全國臨床檢驗操作規程進行分離鑒定。

1.2.1 外周血基因組DNA提取 抽取受試者外周血5 mL，-80℃保存。應用PAXgene Blood DNA kit試劑盒（QIAGEN，德國），并按照試劑盒中提供的“操作說明”中的標準操作步驟提取外周血基因組DNA。

一些大學生雖進行過規劃，但是規劃內容、方式等不夠科學，使得后續無法執行，規劃因可操作性不強成為一紙空文，從而無法發揮效用。進行專業培訓可以從兩方面著手：一方面對指導教師進行培訓，提高其專業知識掌握度和指導能力；另一方面可對學生進行具有針對性的培訓。對學生的培訓可以分兩個階段進行，第一個階段為大學生入學初期的培訓，主要為了讓學生更好的在本科期間完成學習目標，提高能力；第二個階段為大學生畢業前的培訓，主要針對就業選擇，筆者認為這個階段在本科三年級進行的話，更有利于后期進行調整。

支原體培養和結果判斷：標本接種支原體(含解脲支原體和人型支原體)液體培養基培養。試劑用珠海銀科公司產品，按操作說明書操作。

683例患兒中472例培養分離出病原菌，陽性率69.1%，共檢出病原菌498株，即其中26例為同時感染兩種病原菌。細菌培養以流感嗜血桿菌(24.9%)、大腸埃希菌(16.9%)和金黃色葡萄球菌(12.0%)為主。主要病原菌分布見表1。

1.5統計學分析

“國資委”的全稱是國務院國有資產監督管理委員會，從行政上看，國資委的領導層包括一個主任、七個副主任以及千余名公務員。

百余年來中國的現代化進程中，“三農問題”一直困擾著中國人。其中，鄉村教育的困窘，從一個側面折射了近代中國農業、農村、農民的困苦和無奈。近年來，中國近代教育史研究專著和論文頗多，但相對而言，對近代中國鄉村教育實際狀況的探討仍顯薄弱，本文擬作補充。①

結果統計使用WHONET5.4和SPSS13.0軟件包進行數據分析與處理。

標本采集：取樣前用0.9%無菌生理鹽水充分沖洗幼女外陰部，避免受體表常在菌污染，然后以專用無菌女性拭子擦取陰道分泌物立即送細菌室培養，并涂片做革蘭染色鏡檢。整個過程均嚴格遵循無菌操作。

2結果

2.1病原菌總體分布情況

藥敏試驗：流感嗜血桿菌藥敏采用K-B法，其余細菌經VITEK 2系統藥敏卡做藥敏試驗，根據美國2014年NCCLS標準進行藥敏判定。質控標準使用衛生部臨檢中心提供的標準菌株：金黃色葡萄球菌ATCC25923，大腸埃希菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853進行質控。

真菌培養鑒定：所有標本同時接種沙保弱培養基，30℃真菌培養箱培養，采用全自動微生物鑒定系統VITEK 2 Compact進行鑒定。

表1　498株患兒陰道分泌物病原菌檢出情況

472例感染患兒中，0-3歲組89例(18.9%)，3-7歲組205例(43.4%)，>7歲組178例(37.7%)。病原菌分布數據顯示，金黃色葡萄球菌有隨年齡增大而分布增大的趨勢，是7-12歲組兒童外陰炎的主要病原菌，與其他兩組比較均有統計學意義(P<0.05)。而流感嗜血桿菌和大腸埃希菌則集中分布在3-7歲組，具體見表2。

2.2不同年齡段兒童病原菌分布情況

表2　不同年齡段兒童外陰炎患者3種主要病原菌

2.3不同季節兒童細菌性陰道炎病原菌分布及藥物敏感性情況

正調侃著，高潮的手機突然飛進來一條短信：沒良心的負心郎，妾出門在外好幾天，也不來關心關心我，我在線，快上來跟妾溫存一下子。高潮回復：我在開會，散會后到辦公室，再上線交公糧，做人民公社的好社員。

472例感染患兒中按季節分組中，1-3月份組，4-6月份組，7-9月份組，10-12月份組病原菌檢出患兒分別為37例(7.8%)，106例(22.5%)，174例(36.9%)，155例(32.8%)，顯示兒童外陰炎的發病呈現明顯季節性，在1-3月份組發病數較其他3個組明顯偏低。在病原菌分布上，流感嗜血桿菌仍為各組中主要病原菌，均是7-9月份組、10-12月份組的主要病原菌。3種主要病原菌的藥物敏感性情況見表4。

相較于GPR、TDR數據，土樣數據的變化范圍更大，一方面是由于5 cm的采樣深度較淺所致，在本實驗中同時還采集了20 cm深度(17～23 cm范圍)的土樣，考慮到GPR是在一定深度范圍的表層土體平均土壤水分，而不是某一深度附近的土壤水分，因此，對5 cm和20 cm深度的土樣數據求平均，近似看作是0～20 cm深度的平均土樣，并分別對GPR數據和5、20、0～20 cm深度的土樣數據作對比，如圖4。

表3　不同季節兒童外陰炎患者3種主要病原菌分布情況(構成比)　株(%)

表4　兒童外陰炎3種主要病原菌抗生素耐藥率　株(%)

3討論

外陰陰道炎是兒童常見疾病之一，不同國家、地域、時期及年齡段患者的病原菌分布及耐藥性存在一定差異[1]。本研究范圍為廣東省東部沿海的珠江三角洲地區，屬亞熱帶氣候，多雨及高溫時間持續較長，兒童外陰陰道炎尤為多見，因此探討本地區不同氣候環境、不同年齡結構下兒童外陰陰道炎病原菌譜及細菌耐藥情況的特點，進而篩選出治療兒童外陰炎的有效藥物，有重要的臨床意義。

兒童外陰炎與年齡有密切關系，大多發生于3-7歲。從病程長短也可看出，大部分患兒以急性感染為主，且普通細菌培養的陽性率較成人陽性率高，與這一年齡段的兒童陰道自然防御功能較差，活動范圍相對較廣，獨立行動機會較多，但在生活上還沒有養成良好的衛生習慣，環境中的條件致病菌較易侵襲。國內外對兒童陰道炎的相關病原菌分布及藥敏情況進行了較多的研究，但對不同年齡年齡段及不同季節的菌群分布研究不多。有報道顯示兒童陰道炎主要病原菌為表皮葡萄球菌，比例可達20%-40%[2]。本研究顯示流感嗜血桿菌(24.9%)，大腸埃希菌(16.9%)，金黃色葡萄球菌(12.0%)為兒童陰道炎主要病原菌。但其分布比例存在一定的差異，這可能與不同病原菌的不同培養方法、不同年齡分布或不同地域環境有關。本研究發現，菌群分布在不同年齡段嬰幼兒中的確可有一定變換，在0-3歲組和3-7歲組，流感嗜血桿菌和大腸埃希菌是兒童外陰炎的主要病原菌，而金黃色葡萄球菌則是>7歲組的主要病原菌。發病年齡統計顯示，3-7歲組和>7歲組的發病人數均高于0-3歲組，此研究結果與文獻報道相符。

兒童外陰炎也是一種典型的季節性疾病，國外報道多發生于冬季，春季和秋季也是高發季節[3]。本研究顯示，7-9月份發病人數較其他3組較高，原因可能是珠三角地區夏季較長，溫度較高，兒童穿著較少，衛生意識較差，且尤其暑假期間可能與到公共泳池游泳有關；而1-3月份氣溫下降而發病人數明顯降低，說明不同氣候對兒童外陰炎的發病率的確存在一定影響，高溫潮濕的環境下更有利于一些條件致病菌的生長。

流感嗜血桿菌是兒童感染性疾病中的一種重要病原菌，可通過污染的手傳播到兒童陰道中。該菌毒力較強，通常有莢膜，國外文獻報道流感嗜血桿菌的生物型Ⅳ型和Ⅶ型是引起青春期前女孩外陰陰道炎的常見病原菌，考慮與該菌的定植特點有關，帶莢膜的流感嗜血桿菌定植率很低[4-6]。而該菌營養要求較高，需要Ⅴ、Ⅹ因子，如無合適的培養基，實驗室很難分離出此菌。本研究顯示，兒童外陰分泌物中流感嗜血桿菌的檢出率居于首位，達到24.9%，β-內酰胺酶的檢出率達到35%，對β-內酰胺類抗生素耐藥，高于2012年中國CHINET細菌耐藥性監測兒童28.5%的檢出率，嗜血桿菌屬在不同地區產β-內酰胺酶各有不同[7]。藥敏試驗顯示，該菌對喹諾酮類、阿奇霉素、加酶抑制劑復合物(如阿莫西林/棒酸)、二代及三代頭孢菌素類均十分敏感，敏感率可達80%-100%。復方新諾明耐藥率較高，不推薦使用。而氟喹諾酮類藥物由于對嬰幼兒關節軟骨等有損害，四環素類藥物可能影響幼兒牙齒、骨骼的發育，故臨床醫生使用時應謹慎。

本文顯示大腸埃希菌對碳青霉烯類、丁胺卡那、喹諾酮類的耐藥率較低，但丁胺卡那由于其耳毒性，兒科已少用。本院產超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)的大腸埃希菌檢出率高達50%左右，藥敏提示可供選擇的有效抗生素及其有限，僅對美洛培南等碳青霉烯類敏感，本組資料顯示對化學結構不同的3種或以上抗菌藥物同時呈現耐藥的多重耐藥大腸埃希菌有增多趨勢。與各地報道數據比較，兒童患者分離菌中ESBL檢出率高于成人患者[8]，此現象是否與兒童患者臨床用藥的局限性(以青霉素和頭孢菌素類為主)以及臨床上大量使用廣譜抗菌藥物有關，值得進一步研究。故在使用抗生素治療時應嚴格掌握用藥指征，盡可能在用藥前行病原學檢查和藥敏試驗。該菌對青霉素類的耐藥率最高。腸桿菌科細菌廣泛分布于植物、土壤、水及人和動物的腸道內，是人類腸道的正常菌群，但如出現在其他部位則為條件致病菌。由于兒童生殖系統特點及生長期生長發育及撫育等特點，在夏秋季節要注意結合臨床，關注一些消化道病原菌的檢出。

本研究檢出的金黃色葡萄球菌對青霉素類、大環內酯類抗生素有十分高的耐藥率，達到80-90%，提示對金葡菌感染的治療，青霉素類及大環內酯類已基本無效。此次檢出14株耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)，檢出率較以前也有所升高。金黃色葡萄球菌對丁胺卡那較敏感，耐藥率僅1.7%，未發現耐萬古霉素株，所以對金黃色葡萄球菌感染、特別是MRSA的治療可采用丁胺卡那、萬古霉素，但由于丁胺卡那對兒童的副作用，萬古霉素不失為治療兒童MRSA感染的較好選擇。

引起小兒外陰炎的病原微生物除了細菌外，還有一定的真菌及支原體，本文中真菌感染病例19例，以白色念珠菌為主，解脲/人型支原體5例，占1.0%。兒童真菌感染一般多發生于青春前期及青春期，此菌常潛伏于人體的口腔、皮膚內，作為寄生菌不引起癥狀，但當宿主內環境失調，特別是免疫功能低下或抗生素干擾時，可轉化為致病菌。而支原體感染往往為幼托或家屬間接傳播。

總之，本研究發現不同年齡段及不同季節兒童外陰炎致病性病原菌分布存在一定的差異。各地應結合當地環境、氣候特點、準確掌握本地區兒童外陰炎菌群分布資料，為本地區兒童外陰炎的合理用藥及治療提供理論依據。

參考文獻：

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[2]李進喜,劉志偉,郝衛華.小兒生殖道感染的預防及治療[J].中國婦幼保健,2006,21(18):2608.

[3]Cuadros J,Martinez R,et al.The aetiology of paediatric inflammatory vulvovaginitis[J].Eur J Pediatr,2004,163(2):105.

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[7]楊小娟,倪語星.嗜血桿菌屬耐藥性研究[J].醫學檢驗進修雜志,1999,19:1.

[8]孫秀靜,王丹華.產超廣譜β-內酰胺酶的研究進展[J].國外醫學兒科分冊,2000,27(6):305.

摘要：目的掌握不同年齡段及不同季節珠三角地區兒童外陰陰道炎的病原菌分布及藥敏情況。方法683例經臨床確診為外陰陰道炎并且臨床資料完整的患兒按年齡分為0-3歲組，3-7歲組及>7歲組，同時按就診時間分為1-3月份、4-6月份、7-9月份、10-12月份4個組。無菌操作方法取患兒陰道分泌物，行細菌、真菌、支原體培養并進行藥敏實驗。結果①683例患兒中，472例培養陽性，陽性率69.1%，病原菌以流感嗜血桿菌(24.9%)，大腸埃希菌(16.9%)和金黃色葡萄球菌(12.0%)為主； ②流感嗜血桿菌和大腸埃希菌是3-7歲組的主要病原菌。>7歲組的病原菌以金黃色葡萄球菌為主(58.3%)，與其他2組比較均差異有統計學意義(均P<0.05)；③按時間分組中，7-9月份組陰道炎患兒數明顯升高；④藥物敏感試驗顯示，阿奇霉素、二、三代頭孢菌素類對流感嗜血桿菌較敏感，大腸埃希菌50%可檢出超廣譜β-內酰胺酶，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的檢出率為23%。結論不同年齡及不同季節珠三角地區兒童外陰陰道炎的致病性病原菌分布均存在一定的差異。各地應結合當地的環境、氣候等特點，準確掌握本地區陰道炎的菌群分布，根據實驗室藥敏結果進行合理治療。

關鍵詞：陰道炎;兒童;年齡;季節；藥敏

Pathogenic bacteria distribution and drug susceptibility in children with vulvovaginitis in Pearl River DeltaZHONGHua-min,XIEYong-qiang,GUANXiao-shan,etal.(GuangzhouWomenandChildren’sMedicalCenter,Guangzhou,Guangdong510120,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the pathogenic bacteria distribution and drug susceptibility in children with vulvovaginitis in different age and different season in the Pearl River Delta region.Methods683 children diagnosed as vulvovaginitis were divided into three groups by age and four groups by seasons.Vaginal secretions collecting and culturing were used for bacteria and antimicrobial susceptibility test.Results①Strains of bacteria were isolated from 472 children with the positive rate of 69.1%.Haemophilus influenzae(24.9%),escherichia coli(16.9%) and staphylococcus aureus(12.0%) were the most frequently isolated pathogen; ②Haemophilus influenzae and escherichia coli were the main pathogen bacteria in 3-7 year group,staphylococcus aureus was the most frequently isolated pathogen in <7 yesrs group(P<0.05).③In the season groups,the number of children with vulvovaginitis increased significantly in July-September group.④Drug sensitivity showed that Azithromycin ,Second and third generation cephalosporins were sensitive to haemophilus influenzae.Escherichia coli can be detected 50% of extended-spectrum β-lactamase.Methicillin-resistant Staphylococcus aureus detection rate was 23%.ConclusionThe pathogens distribution and drug susceptibility in children with vulvovaginitis were varies in different age and different season.As a result,a treatment should be done based on the climate,environment,and pathogens distribution of a region.

Key words:Vulvovaginitis；children；age；season；drug susceptibility

(收稿日期：2015-06-10)

作者簡介：鐘華敏(1978-)，女，副主任技師，碩士研究生，主要從事微生物檢驗方面的工作

中圖分類號：R711.73

文獻標識碼：A

文章編號：1007-4287(2016)01-0107-04

基金項目：廣東省科技廳社會發展領域科技計劃項目(No:粵科社字[2011]106號)