2012-2013年北京市密云縣流感病原學分布分析

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2012-2013年北京市密云縣流感病原學分布分析

張巍巍1，高雷1，馮寶立1，鄭蘭紫1，張麗榮2*

(1.北京市密云縣疾病預防控制中心，北京101500；2.吉林大學中日聯誼醫院 病理科)

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道傳染病，對其進行監測可以及時掌握流感病毒流行株的活動情況，并及早發現變異株，為防控政策的制定提供參考依據。2013年，全球首次發現新亞型H7N9型禽流感病毒[1-2]，針對人感染H7N9禽流感疫情防控工作，北京市衛生局組織制定了《人感染H7N9禽流感疫情防控方案》。密云縣作為北京市流感監測網絡成員之一，2012年在北京市流感監測方案基礎上，繼續開展流感監測工作，同時從2013年4月11日開始注重人感染H7N9禽流感的檢測，旨在掌握密云縣流感病毒流行規律及其流行病學特征，以保護人民群眾的身體健康和生命安全?，F將監測結果初步分析如下。

1材料與方法

1.1監測病例來源

依據流感樣病例定義，于密云縣醫院門診每周采集10-20件流感樣病例患者的咽拭子。于24 h內冷藏送至本實驗室，24 h內未能檢測的-80℃保存。具體采集方法參照文獻[3]。

1.2試劑

MDCK細胞由北京市疾病預防控制中心提供；抗 A(H1N1)亞型血清,抗 A(H3N2)亞型血清,抗 B型 Yamagata系病毒血清,抗B型Victoria系病毒血清,由國家疾病預防控制中心提供；豚鼠血球由蘭伯瑞公司提供；RNA 提取試劑盒(QIAGEN RNeasy Mini Kit) 由QIAGEN公司提供；Real-Time PCR體系試劑盒(Taqman One step RT-PCR Kit)由美國ABI公司提供。

1.3病毒分離與鑒定

咽拭子標本完全混勻后，接種到生長成片的 MDCK 細胞，34℃ 5% CO2培養箱內吸附2 h， 37℃ 5%CO2培養箱中培養,每日觀察細胞病變(CPE)。培養3-4 d后,用1%豚鼠血球進行微量血凝試驗 (HA) 檢測病毒的存在及滴度。將 HA≥1∶8的培養液用血凝抑制試驗 (HI) 進行流感病毒滴度和型別鑒定。HA<1∶8的培養物繼續細胞傳代培養,直至HA≥1∶8 時再進行病毒的鑒定，連續傳代2次以上，HA仍<1∶8的細胞份禮物，可以采用Real-Time PCR 方法進行核酸檢測。具體方法詳見文獻[3]。4月11日開始，若鑒定病毒為甲型流感病毒，要采用Real-Time PCR方法對其進行人感染H7N9禽流感的檢測。

Real-Time PCR方法的反應體系總體積為25 μl：引物(40 μM)0.5 μl；探針(10 μM)0.5 μl；酶 1.0 μl；2×Master Mix 12.5 μl；Rnase Free H2O 5.375 μl；40× MultiScribe and RNAase Inhibitor Mix 0.625 μl；RNA 模板5 μl。反應條件:50℃反轉錄30 min；95℃預熱15 min；95℃變性15 sec；55℃擴增45 sec；在45℃進行單點熒光檢測，共45個循環。實時熒光檢測有標準的S型擴增曲線，并且Ct值<30可以判斷樣本為陽性。

1.4統計學處理

數據采用SPSS 13.0 進行數據統計處理，比較組間陽性率差異，P<0.05具有統計學意義。

2結果

2.1流感病毒分離陽性率變化趨勢

2012年10月至2013年5月用MDCK細胞分離培養流感病毒，共檢測樣本618件，分離毒株121株，分離陽性率為19.6%。經血凝抑制試驗和Real-Time PCR方法鑒定其型別分布為甲型H3N2亞型陽性68件(占56.2%)，甲型H1N1亞型陽性53件(占43.8%)，乙型流感陽性0件(占0%)，人感染H7N9流感陽性0件(占0%)。

本研究為了解病毒變化趨勢，對監測樣本不同型別的病毒分離陽性率按照不同月份進行分析，結果顯示2012年12月份陽性率最高，為37.7%，其次為2013年1月份，陽性率為32.1%，2013年5月份陽性率最低，為0%。進一步分析所分離的流感病毒陽性分布情況，結果顯示監測期間以甲型流感流行為主，同時存在甲型H3N2亞型和甲型H1N1亞型流感病毒，但不同亞型流行時間有所不同。10月至次年3月主要以甲型H3N2亞型流感病毒為主，并于2012年12月達到高峰。而甲型H1N1流感病毒主要集中在2012年12月至次年4月，于2013年1月達到高峰。乙型流感病毒和人感染H7N9流感病毒均未檢出。監測期間各種流感病毒亞型在不同月份中的分布趨勢見圖1。

圖1　不同月份流感病毒分離陽性率

2.2流感樣病例的性別分布

在所監測的618例病例中，女性患者293例，自其咽拭子樣本中分離病毒67株，分離陽性率為22.9%；男性患者325例，自其咽拭子樣本中分離病毒54株，分離陽性率為16.6%；經χ2檢驗，男女性別之間的陽性率差異無統計學意義(P>0.05)。

2.3流感病毒的年齡分布

不同年齡組的流感病毒陽性率不同：0-5歲年齡組分離陽性率最低，為6.9%(2/29)，6-15歲年齡組分離陽性率為10%(3/30)，16-25歲年齡組病毒分離陽性率為15.0%(41/273)，26-55歲年齡組病毒分離陽性率為27.9%(60/215)，≥56歲年齡組分離陽性率為21.1%(15/71)。各年齡組病毒陽性率無統計學差異(P>0.05)。

3討論

本文針對2012年10月至2013年5月冬春季密云縣醫院門診流感樣病例的監測結果進行分析，可反映本地區流感病毒的流行特征。研究表明，在監測期間以甲型流感病毒流行為主，主要為甲型

H3N2亞型和甲型H1N1亞型流感病毒，而與去年同期相比，流感病毒的主要毒株為乙型流感病毒，包括B型Victoria系和B型 Yamagata系。兩個年度的5月份均未檢出流感病毒。本研究發現2009年甲型H1N1病毒已經作為季節性的流感病毒在今年傳播。同時研究發現，密云縣去年的流感病毒高峰期在次年的2月份，而本次監測在12月份，高峰期略有提前[4]。

對流感病毒感染者的性別比例進行分析，男女性別之間的陽性率無統計學意義(P>0.05)。本監測結果同時表明， 26-55年齡組流感病毒感染率最高，占總陽性數目的49.6%，提示中青年對流感病毒易感，需特別加強防護，這于相關文獻報導一致[5]。

本監測主要采用細胞培養法分離鑒定流感病毒，該方法是流感病毒病原學檢測的金標準，對于連續傳代2次，血凝滴度仍小于8的細胞培養物，本監測采用Real-TimePCR方法對樣本中病毒進行核酸檢測。這樣可以提高病毒含量低樣本的檢測率[6]。

本文對密云縣醫院2011年10月至2012年5月門診流感患者病毒檢出情況及相關特征做出簡要分析，3月，我國開始出現人感染H7N9禽流感疫情，經過兩個月的主動監測和采取一系列的防控措施，我縣沒有人感染H7N9禽流感病例。

參考文獻：

[1]權菊香，牛楊洋，董奇文，等.2013年我國H7N9型禽病毒流感分析.中國臨床藥理學雜志，2013,29(6):426-428.

[2]郭湖潭.人感染H7N9禽流感的流行、治療及防控.國際流行病學傳染學雜志，2013,40(3):145-146.

[3]中華人民共和國衛生行業標準 流感性感冒診斷標準.

[4]張巍巍.北京市密云縣2011年10月-2012年5月流感監測結果分析.中國衛生檢驗雜志.2013,23(2)：453-454.

[5]黃芳，石偉先，崔淑娟，等．北京地區2010年10月至2011年4月急性呼吸道感染病毒流行特征分析．國際病毒學雜志，2011，18(4)：97-100．

[6]石偉先，黃芳，崔淑娟，等.實時熒光PCR法、膠體金快速檢測法及病毒分離培養法在甲型流感病毒檢測中的臨床應用分析.中國衛生檢驗雜志.2011,21(11).

(收稿日期：2014-12-22)

作者簡介：張巍巍(1983-)，女，碩士，主管檢驗師，工作于北京市密云縣疾病預防控制中心檢驗科

文章編號：1007-4287(2016)01-0126-02 1007-4287(2016)01-0128-03

*通訊作者