脂蛋白(a)-P研究進展*

付曉艷，李　莉 綜述，朱槿宏,何津春△ 審校

( 1.蘭州大學第一臨床醫學院，蘭州 730000；2.蘭州大學第一醫院醫學檢驗中心，蘭州 730000)

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·綜述·

脂蛋白(a)-P研究進展*

付曉艷1，李莉2綜述，朱槿宏2,何津春2△審校

( 1.蘭州大學第一臨床醫學院，蘭州 730000；2.蘭州大學第一醫院醫學檢驗中心，蘭州 730000)

關鍵詞:脂蛋白(a)；脂蛋白(a)顆粒；免疫固定電泳；核磁共振光譜法

脂蛋白(a)[Lp(a)]是人體內一種特殊的大分子脂蛋白，血漿中Lp(a)水平升高可增加患動脈粥樣硬化(AS)的風險。長期以來，臨床已經習慣使用Lp(a)-C或Lp(a)-M預測Lp(a)相關AS風險的高低[1-5]。但值得注意的是，致AS因子是Lp(a)-P而不是Lp(a)-C或Lp(a)-M。最新研究表明，Lp(a)-P最能代表Lp(a)的真實水平，對AS的預測價值較Lp(a)-C或Lp(a)-M高。下面本文就Lp(a)-P的研究進展做一綜述。

1Lp(a)的結構

Lp(a)主要由低密度脂蛋白顆粒(由載脂蛋白B100和脂質組成)與載脂蛋白(a) [Apo(a)]通過二硫鍵連接組成[4]。Apo(a)是高度糖基化的蛋白質，含有1個蛋白酶樣結構域和1個kringle結構域,kringle結構域中有1個K5和若干個K4。Apo(a)中的K4有10種不同亞型(T1～T10),除T2的拷貝數從3～43個不等,其他9型均含有1個拷貝，所以K4-2型的重復數決定了Apo(a)分子的大小，它是導致Lp(a)相對分子質量個體間差異較大[(180～800)×103不等]的主要原因。此外不同個體間乃至同一個體不同Lp(a)-P中所含膽固醇量的差異也是導致Lp(a)分子量個體間差異的原因之一[4-5]。

23種Lp(a)相關生物標志物

不同研究者發現，對AS預測價值較高的Lp(a)相關生物標志物有Lp(a)-M、Lp(a)-C和Lp(a)-P 3種。其中Lp(a)-M是用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定載脂蛋白(a)質量[Apo(a)-mass]表示的，測定結果用mg/L表示；Lp(a)-C是通過電泳法測定Lp(a)-P所攜帶的膽固醇，測定結果用mmol/L表示，也有文獻將測定結果用mg/L表示[6]； Lp(a)-P是近年提出的較新的生物標志物，Lp(a)-P是通過免疫固定電泳法(IFE)或核磁共振波譜(NMRs)直接測定其在血漿中的濃度，測定結果用nmol/L表示[4-6]。

3Lp(a)顆粒測定研究進展

3.1Lp(a)顆粒測定背景Lp(a)-M測定是最早使用的Lp(a)動脈粥樣硬化生物標志物，但早期免疫分析所用的抗體主要是針對Apo(a)K4-2型抗原表位，但該區域分子大小不一且抗體親和力強弱不一導致Lp(a)-M測定準確性受到質疑。美國西雅圖的華盛頓大學西北脂類研究實驗室提出針對Apo(a)K4-9型抗原表位的ELISA，雖然不受Apo(a)分子大小異質性的影響，但只適用 ELISA,不適用于全自動生化分析儀的免疫比濁法[7]。由于免疫學方法測定Lp(a)-M存在的困難，故研究者提出用測定Lp(a)-C代替Lp(a)-M[3,8]，然而隨著肥胖及代謝綜合征發病率的上升，使得Lp(a)-C這一標志物相對其他標志物而言預測價值降低[9]。

鑒于Lp(a)-M或Lp(a)-C測定存在缺陷，以及大量薈萃分析發現低密度脂蛋白顆粒(LDL-P)較低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)是更好地預測AS發生的生物標志物[10-14]。研究者推斷Lp(a)-P在預測 AS發生的風險上優于 Lp(a)-M或Lp(a)-C[2-6,8]。此后，研究發現，Lp(a)-P測定不受其分子大小及其他脂蛋白的影響，可以代表Lp(a)濃度的唯一特征，成為研究熱點[2,15-18]。

3.2Lp(a)顆粒測定方法關于脂蛋白顆粒的測定，研究較多的是高密度脂蛋白顆粒和LDL-P，測定方法及應用日漸成熟。目前測定方法常用的有3種：超速離心法、IFE、NMRs[10]。文獻中報道較多的是后兩種[4,11]，現分別介紹如下。

3.2.1IFEIFE是一種用于分析樣品中特異性抗原的技術，首先將蛋白質混合物在固相載體上進行區帶電泳，再與特異性抗體反應，從而檢出與抗體結合的相應抗原。Philip等[4]通過實驗研究，建立了一種適用于臨床常規檢測Lp(a)-P的[Lp(a)]，此方法準確度高(CV<10%)、線性范圍為50～800 nmol/L、精密度較好且不受Apo(a)分子大小的影響。該法首先將血清中的脂蛋白經瓊脂糖凝膠電泳分離成不同區帶,其次在含Apo(a)的脂蛋白區帶中Apo(a)可與抗Apo(a)抗體結合，用酸性紫染色可見到脂蛋白固定條帶，清洗后使用比濁法測定Apo(a)的總量[包括Lp(a)、VLDL、IDL和LDL中的Apo(a)]，根據公式[4]可通過Lp(a)中Apo(a)濃度計算出Lp(a)-P的濃度。計算公式如下：Lp(a)-P(nmol/L)=Apo(a)總量×Lp(a)條帶占總面積百分比×18.52，其中18.52=Lp(a)中Apo(a)濃度×10/(apo-B相對分子質量×106)。

3.2.2NMRsNMRs是基于電磁波照射待測物質，使原子核發生能級躍遷，產生一定核磁共振信號，進而得到NMRs。NMRs之所以可應用于Lp(a)-P測定，主要是利用了不同大小的Lp(a)-P甲基基團天然質子NMR特征。Lp(a)的磁學特性使不同大小顆粒中的脂質發出不同的頻率和形狀信號[11]。對照已知的每一類顆粒的甲基信號頻率和特征，記錄血漿中待測脂蛋白顆粒所產生的信號，可以通過數學計算的方法計算出不同脂蛋白的數目和脂蛋白顆粒的大小。NMRs測定脂蛋白的最大優勢是該法測定整個顆粒而不僅是某一化學成分的濃度。由于每個Lp(a)-P中的Lp(a)-C不是恒量，個體間差異較大，因此Lp(a)-C不能反映相應冠心病危險等級[12]。而NMRs不受個體間差異的影響，即一定濃度的脂蛋白亞類總是產生同等大小的甲基化信號。但大小接近的脂蛋白顆粒，其甲基信號頻率和特征的變化在波譜上不易顯現出來，因此這些脂蛋白顆粒仍是代表一組脂蛋白，這點值得注意。

3.3Lp(a)-P與Lp(a)-M、Lp(a)-C相比的優勢多項研究表明，LDL-P濃度在預測AS危險性方面比LDL-C更敏感，因此理論上推測Lp(a)-P預測AS的靈敏度比Lp(a)-C更高[10-14]。目前這一推測已經得到證實[2,16-18]。早期Sniderman等[19]通過Meta分析顯示,當Lp(a)-M處于臨界值時，不同Lp(a)-P濃度的患者發生心腦血管事件的風險不同；2012年Matthew等通過對144例AS一級、二級預防者研究發現，Lp(a)-P與Lp(a)-C的不一致性高達23%，近年來該結論也被其他研究者證實[13-15]；2014年Hopwell等[15]通過對995例冠心病患者研究發現， Lp(a)-P比Lp(a)-M和Lp(a)-C測定更能預測冠心病的風險；研究還發現小分子Apo(a)患者具有更高的Lp(a)-P濃度，更易導致AS。

4結語與展望

Lp(a)作為AS的獨立危險因素已得到公認，但目前關于Lp(a)仍有許多未解決的問題，例如，其代謝機制尚不清楚，其測定單位和度量標準在不同的實驗室之間不一致等。一些研究者?；煜齃p(a)的3種生物標志物，因此有必要使更多臨床醫生了解Lp(a)測定的意義[5,16]。未來需要確定一種能夠真實反映Lp(a)水平且易于檢測的生物標志物，目前最新研究認為LP(a)-P就是這樣一種生物標志物。學者們一致認為，現在及未來就是要通過國際間的合作在不同人群中研究 LP(a)-P引起的 AS風險，從而為Lp(a)-P是目前發現的最好的AS風險標志物這一觀點提供支持。

今后Lp(a)-P研究方向可能出自以下幾方面：(1)選擇Lp(a)-P正常，但Lp(a)-M和Lp(a)-C升高或降低的，或Lp(a)-P升高或降低而Lp(a)-M和Lp(a)-C在正常參考范圍內的標本來比較3種生物標記，證實三者在預測AS發生的優缺點；(2)應用高場多維NMRs優化LP(a)-P測定方法，使其更加適合常規臨床檢測；(3)對于高Lp(a)-P的動物模型，尋找新型的治療手段降低血漿Lp(a)-P；(3)在臨床上驗證Lp(a)-P預測AS發病率的臨床價值及治療手段，確定AS的醫學決定水平，以便制訂干預人群和治療目標，在一級、二級預防中都有重要意義。

綜上所述，Lp(a)-P對AS的發生具有良好的預測價值，相信今后在基礎和臨床的不同層面上會有更廣泛的研究和應用。

參考文獻

[1]Malaguarnera M,Vacante M,Russo C,et al.Lipoprotein(a) in cardiovascular diseases[J].Biomed Res Int,2012,2013(1):650989.

[2]Kiechl S,Willeit J.The mysteries of lipoprotein(a) and cardiovascular disease revisited[J].J Am Coll Cardiol,2010,55(19):2168-2170.

[3]Brown WV,Ballantyne CM,Jones PH,et al.Management of Lp(a)[J].J Clin Lipidol,2010,4(4):240-247.

[4]Philip A,Erin G,William S,et al.Validation of a lipoprotein (a) particle concentration assay by quantitative lipoprotein immunofixation electrophoresis[J].Clinica Chimica Acta,2015,15(439):219-224.

[5]Joseph P,Philip A,Guadagno MS,et al.Lipoprotein(a)mass:A massively misunderstood metric[J].J Clin Lipidol,2014,13(8):550-553.

[6]Konerman M,Kulkarni K,Toth PP,et al.Lipoprotein(a) particle concentration and lipoprotein(a) cholesterol assays yield discordant classification of patients into four physiologically discrete groups[J].J Clin Lipidol,2012,6(4):368-373.

[7]Lamon-Fava S,Marcovina SM,Albers JJ,et al.Lipoprotein(a) levels,apo(a) isoform size,and coronary heart disease risk in the Framingham Offspring Study[J].J Lipid Res,2011,52(6):1181-1187.

[8]Mcconnell JP,Guadagno PA,Dayspring TD,et al.Lipoprotein(a) mass:a massively misunderstood metric[J].J Clin Lipidol,2014,8(6):550-553.

[9]Davidson MH,Ballantyne CM,Jacobson TA,et al.Clinical utility of inflammatory markers and advanced lipoprotein testing:advice from an expert panel of lipid specialists[J].J Clin Lipidol,2011,5(5):338-367.

[10]Paul N,James V.A comparative study of four independent methods to measure LDL particle concentration[J].Atherosclerosis,2015(243):99-106.

[11]Otvos JD,Mora S,Shalaurova I,et al.Clinical implications of discordance between low-density lipoprotein cholesterol and particle number[J].J Clin Lipidol,2011,5(2):105-113.

[12]Stephen A,Thomas D.Low-density lipoprotein particle number is associated with insulin resistance in clinical practice[J].J Clin Lipidol,2015(9):247-255.

[13]Mora S,Buring JE,Ridker PM.Discordance of low-density lipoprotein (LDL) cholesterol with alternative LDL-related measures and future coronary events[J].Circulation,2014,129(5):553-561.

[14]Master SR,Rader DJ.Beyond LDL cholesterol in assessing cardiovascular risk:apo B or LDL-P[J].Clin Chem,2013,59(5):723-725.

[15]Hopewell JC,Seedorf U,Farrall M,et al.Impact of lipoprotein(a) levels and apolipoprotein(a) isoform size on risk of coronary heart disease[J].J Intern Med,2014,276(3):260-268.

[16]Jacobson TL,Cardiovascular D.And contemporary management[J].Mayo Clinic Proceedings,2013,88(11):1294-1311.

[17]Nordestgaard BG,Chapman MJ,Ray K,et al.Lipoprotein(a) as a cardiovascular risk factor:current status[J].Eur Heart J,2010,31(23):2844-2853.

[18]Erqou S,Thompson A,Di Angelantonio E,et al.Apolipoprotein(a) isoforms and the risk of vascular disease:systematic review of 40 studies involving 58,000 participants[J].J Am Coll Cardiol,2010,55(19):2160-2167.

[19]Sniderman AD,Williams K,Contois JH,et al.A meta-analysis of low-density lipoprotein cholesterol,non-high-density lipoprotein cholesterol,and apolipoprotein B as markers of cardiovascular risk[J].Circ Cardiovasc Qual Outcomes,2011,4(3):337-345.

*基金項目：國家“十五”重大科技專項(2002BA711A08-17)；教育部科技基礎平臺建設(505015)；甘肅省自然科學研究基金(1308RJZA218，1302FKDA034)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.029

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1822-03

(收稿日期：2016-03-05修回日期：2016-05-15)

△通訊作者，E-mail：jinchunhe@163.com。