無水?；顥l件下團頭魴生理應激及魚肉品質的變化

劉　驍，謝　晶，楊　茜，董韓博，張新林

（上海水產品加工及貯藏工程技術研究中心，上海海洋大學食品學院，上海201306）

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無水?；顥l件下團頭魴生理應激及魚肉品質的變化

劉驍，謝晶※，楊茜，董韓博，張新林

（上海水產品加工及貯藏工程技術研究中心，上海海洋大學食品學院，上海201306）

摘要：為探討無水?；顚F頭魴生理應激和肌肉品質的影響，該文研究了團頭魴無水?；钏璧妮^佳條件，測定了未處理（對照）、無水和恢復3種狀態下團頭魴的血液生化以及魚肉成分、持水力、新鮮度、質構和游離氨基酸等品質指標。結果表明：團頭魴無水?；畹妮^佳生活水溫為(14.8±0.2)℃（冬季），以2℃ /h降至休眠溫度2℃，充氧包裝后在2℃無水?；?4 h，在當季暫養水溫中（(14.8±0.2)℃）恢復24 h后存活率為100%；無水?；?4 h后，血液中皮質醇和乳酸濃度、谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活力顯著高于未處理（對照）（P<0.05），血糖濃度和堿性磷酸酶活性明顯低于未處理值（P<0.05），當季暫養水溫恢復24 h后，基本都恢復至未處理組值，但谷草轉氨酶仍明顯高于未處理組值（P<0.05）；低溫無水環境對團頭魴魚肉中蛋白質和脂肪含量、新鮮度和持水力無影響，但魚肉的硬度和咀嚼性明顯下降（P<0.05），魚肉游離氨基酸中絲氨酸（Ser）、谷氨酸（Glu）、甘氨酸（Gly）、纈氨酸（Val）和精氨酸（Arg）等含量顯著升高（P<0.05），異亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe）在無水?；钸^程中無明顯變化，當季暫養水溫恢復后卻顯著高于未處理組水平（P<0.05）。因此，團頭魴無水?；钪挟a生的應激反應在恢復24 h后基本消除，且無水?；顚︳~肉的食用品質影響較小。該研究結果為無水?；钤诘~活魚運輸中的應用提供參考。

關鍵詞：品質控制；溫度；魚；團頭魴；無水?；?；生理應激

劉驍，謝晶，楊茜，董韓博，張新林.無水?；顥l件下團頭魴生理應激及魚肉品質的變化[J]. 農業工程學報，2016，32（3）：295－300.doi：10.11975/j.issn.1002-6819.2016.03.042http://www.tcsae.org

Liu Xiao, Xie Jing, Yang Xi, Dong Hanbo, Zhang Xinlin. Change of physiological stress and flesh quality of Megalobrama amblycephala during suitable waterless keep alive conditions[J]. Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering (Transactions of the CSAE), 2016, 32(3): 295－300. (in Chinese with English abstract)doi：10.11975/j.issn.1002-6819.2016.03.042 http://www.tcsae.org

0　引　言

團頭魴（Megalobrama amblycephala）屬鯉形目，鯉科中的魴屬，俗稱武昌魚。該魚食性廣、飼養周期短且肉質鮮美、營養豐富，被作為優良的草食性魚類品種在全國普遍推廣，是中國最主要的淡水養殖品種之一。筆者對上海地區的調研結果表明，團頭魴進入市場的方式以鮮活為主，死后其經濟價值喪失過半，因此團頭魴的?；钸\輸尤為重要。

目前淡水活魚流通方式以有水運輸為主，運輸過程中可根據季節、生長階段和距離的長短，采用改善水質[1]、增加溶氧量[2]、適當降低水溫[3]和改變鹽度[4]等方法提高運輸質量。應激是生命體為適應生存環境所出現的全身性非特異性反應，但由于商業成本以及流通環節（捕撈、暫養、運輸、裝卸、分銷）等會導致魚體在流通過程中出現有害應激，對機體造成損傷甚至死亡，變相增加成本[5]。相關調研分析表明，中國大宗淡水魚在流通過程中的損耗成本約占總成本的10%，為發達國家的20倍[6]。近年來，根據水產品變溫的生理特性，衍生出的無水?；?，因其具有運輸量大、物理損傷小等優點成為研究熱點。

無水?；钍峭ㄟ^生態冰溫或麻醉劑使水產品進入休眠狀態，然后在無水或霧態的低溫狀態下進行活體貯存。Zeng等[7]研究表明鯽魚以1℃/h速率降溫至0℃無水?；?，時間可達24 h，并且發現低溫馴化過程可以促進鯽魚在無水低氧環境下厭氧代謝，從而減小血液中的氧化反應以達到無水?；畹哪康?。Jamie等[8]通過檢測不同暫養環境、降溫速率、麻醉劑和包裝方式下南美白對蝦的血液生理變化及存活率，優化出最佳條件使南美白對蝦在無水狀態下存活36 h，恢復24 h后的存活率可以達到96%。白艷龍等[9]將黃顙魚生存溫度以3～4℃/h降至2℃休眠后，用濕透的紗布包裹裝入純氧的包裝袋中可無水?；?4 h。然而，不同水產品休眠溫度不同，即使相同品種在不同季節無水?；顥l件也存在差異，而且目前常用的麻醉劑存在安全隱患。因此，本文探索了團頭魴無水?；钏璧妮^佳條件，并分析了無水?；顚F頭魴應激指標和魚肉品質的影響，為研究淡水魚的無水?；钐峁├碚摶A。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

材料：團頭魴購自上海果園農貿市場，選取大小規格相近的團頭魴為試驗對象，平均體質量為（548.15±46.26）g，體長（32.46±1.89）cm，為消除運輸應激在實驗室蓄養池中暫養10d，試驗前禁食1 d。

試劑：輕質氧化鎂，鹽酸，硼酸，溴甲酚綠-甲基紅，三氯乙酸，硫代巴比妥酸（TBA）溶液，硫酸銅，硫酸鉀，濃硫酸，氫氧化鈉。所用試劑均為分析純，并購自國藥集團化學試劑有限公司。

1.2儀器與設備

邁瑞BS-200全自動生化分析儀，深圳邁瑞生物醫療有限股份有限公司；SH-1000Lab-全波長酶標儀，北京宏昌信科技有限公司；5810R高速冷凍離心機，上海艾測電子科技有限公司；Kjeltec8400型全自動凱氏定氮儀，丹麥FOSS公司；Soxtec2050型全自動索氏抽提系統，丹麥FOSS公司；TA.XT Plus 型質構儀，英國SMS公司；全自動循環冷水機廣東海利集團；HITACHI8800型氨基酸自動分析儀，日本日立公司。F2640 型多點溫度采集儀，美國Fluke公司。

1.3試驗方法

1.3.1團頭魴無水?；钶^佳條件的確定

本試驗是通過物理降溫的方式誘導團頭魴休眠，以達到無水?；畹哪康?。試驗共分為4批，分別在2014年11月，2015年1月、5月和8月即秋冬春夏4個季節進行。每批試驗分3組，2組重復，1組驗證（100%存活率的條件），每組10條魚。試驗當天，將10條團頭魴放于裝有100L水的塑料箱中，使用循環冷水機以2℃/h降溫（3℃以下使用?20℃的蓄冷劑），當溫度降低到某一點時所有樣品出現呼吸緩慢（≤12次/min）、側翻或靜止不動、刺激后基本不動或非常遲緩等現象，此時溫度為休眠溫度[9-10]，然后裝入木屑（休眠溫度下浸泡1 h后瀝干）鋪墊的塑料袋（長×寬，120 cm×90 cm）中充氧（80%）包裝放于休眠溫度下無水?；?，一段時間后將休眠中的團頭魴先轉移至10℃水中恢復1 h蘇醒后，再轉移至當季暫養水溫中，觀察隨時間延長其在當季暫養水溫恢復24 h后的存活率變化，從而確定團頭魴無水?；畹淖罴鸭竟?、?；顪囟群蜁r間。本試驗所測水溫均使用多點溫度采集儀進行測量，數據采集間隔為2h。

1.3.2取樣方法

本試驗以較佳季節的最長無水?；顣r間和此季節暫養水溫中恢復24 h后的團頭魴為試驗組，此季節未處理暫養狀態下的團頭魴為對照組，每組10條。每條經200 mg/L MS-222的麻醉液致死麻醉后，用注射器尾部靜脈取血，血液在4℃下靜置2 h后，以4℃、4 000 r/min離心10 min制備血清，?80℃凍存備用。魚體采血后，取背部肌肉（去魚皮）用于魚肉品質分析。

1.4指標測定

1.4.1血液指標

皮質醇（cortisol，COR）濃度測定，采用酶聯免疫法[11]，試劑盒購自上海邦奕生物科技公司；乳酸采用比色法進行測定[7]，試劑盒購自南京建成生物工程研究所；谷丙轉氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉氨酶（aspartate transaminase，AST）、堿性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、葡萄糖（glucose，Glu）等酶活力和濃度測定[12]，在BS-200全自動生化分析儀使用對應試劑盒進行檢測。

1.4.2魚肉品質指標

持水力：參考李念文等[13]方法進行測定；取5 g魚肉塊（M），用濾紙包裹后放于離心管中，在5 000 r/min下離心6 min，瀝干表面水分稱量（m，g），重復3次，取平均值。

總蛋白：按照GB/T 5009.5-2010[14]中的凱氏定氮法進行測定；準確稱取2 g樣品移入消化管中，加入0.2 g硫酸銅、6 g硫酸鉀及20 mL濃硫酸后加熱直至液體呈藍綠色并澄清透明后，再繼續加熱0.5～1 h。取下放冷后上機操作。

粗脂肪：根據GB/T 14772-2008[15]中的索氏抽提法進行測定；準確稱取5 g樣品（M1）和底瓶質量（m1），將樣品用濾紙包裹裝入底瓶中上機提取，提取后將底瓶在103℃干燥箱中干燥1 h，取出置于干燥器內冷卻至室溫，稱量（m2）。

揮發性鹽基氮（TVB-N）：參照SC/T 3032-2007[16]進行測定；將2 g魚肉放于消化管中，加入0.5 g MgO后上機操作，其中用0.1 mol/L的HCl滴定，吸收液為40 g/L 的H3BO3。

硫代巴比妥酸值（TBA）：根據Li等[17]TBA測定方法；準確稱取5 g碎肉置于燒杯中，加入25 mL 20%三氯乙酸溶液和10 mL蒸餾水后勻漿60s，再靜置1 h后過濾，濾液用蒸餾水定容至50 mL，取其中5 mL加入5 mL 0.02 mol/L硫代巴比妥酸溶液，沸水浴20 min，取出冷卻5 min后在532 nm處測吸光度值A，標準曲線所測常數為7.8。

質構：參照方靜等[18]方法略作修改，將魚肉切成1.5 cm×1.5 cm×1 cm規格，探頭類型為P50，測試前速度為2 mm/s，測試速度為1 mm/s，測試后速度為5 mm/s，測定間隔時間為5 s，壓縮比為50%；每組每條魚取背部肌肉3塊，每塊重復測量3次，取平均值。

游離氨基酸：參照鄧捷春等[19]方法略作改動，準確稱取樣品5.00 g，加入15 mL蒸餾水后均質，以10 000 r/min離心10 min，取9 mL上清液，加入1 mL 50%三氯乙酸，用0.5 mol/L NaOH調pH值至 2.0，0.45 μm微孔過濾后氨基酸自動析儀檢測。

1.5數據統計分析

數據使用Excel軟件進行整理，使用SPSS17.0軟件進行差異性分析，同一系列不同字母表示差異顯著（P<0.05）。

2　結果與分析

2.1團頭魴無水?；钶^佳條件的確定

不同季節的團頭魴無水條件下存活所需要的溫度、?；顣r間與存活率見表1。本試驗發現，夏季的團頭魴不適宜無水?；?，無水?；?h存活率僅為70%，這可能是因為夏季溫度偏高，團頭魴對低溫的耐受程度較低；由于春秋季節暫養水溫和休眠溫度相近，團頭魴低溫馴化過程也相近，因此無水?；钚Ч蚕嘟?，無水?；? h，存活率可達100%，可適宜較短距離的?；钸\輸；由于冬季溫度較低，團頭魴更能適應低溫環境，因此冬季是團頭魴無水?；畹淖罴鸭竟?，而且無水?；顣r間可延長至14 h，存活率可達100%。

表1　團頭魴在不同季節下無水?；畹臏囟?、時間與存活率Table 1　Temperature, time and survival rate of Megalobrama amblycephaladuring waterless keep alive under the different season

2.2無水?；顚F頭魴血液生化指標的影響

魚類生理和病理的變化通常引起血液成分的改變，因此血液生化指標是反映動物應激程度的重要指標[16]。無水?；顚F頭魴血液生化指標的影響見表2。

表2　無水?；顚F頭魴血液生化指標的影響（冬季）Table 2　Effect of waterless keep alive on blood biochemical parameters of Megalobrama amblycephala (winter)

動物受到應激源刺激后，首先是產生由神經內分泌系統介導的初級反應，下丘腦-垂體-腎上腺軸迅速被激活，促使腎上腺皮質激素COR的合成和釋放增加，從而造成血液中COR濃度升高，因此血液中COR的濃度是衡量動物應激程度的首選指標[20]。本研究中團頭魴經過無水?；?4 h后，血液中COR濃度與未處理狀態下相比顯著升高（P<0.05），經過24 h當季暫養水溫（14.8±0.2℃）恢復后皮質醇濃度明顯下降（P<0.05），這表明團頭魴在低溫無水?；钸^程中做出了應激響應，促使機體應對環境變化以免受傷害，到當季暫養水溫中恢復后應激反應有所緩解，Mi[21]研究發現鯽魚經丁香酚麻醉無水?；詈?，血液中COR濃度明顯增加，這與本試驗結果相一致。但恢復后的團頭魴體內COR濃度明顯高于對照狀態（P<0.05），表明應激反應沒有完全恢復，這可能是因為恢復24 h不能使團頭魴在休眠過程中產生的應激響應完全解除，需更長恢復時間。

血糖和乳酸是反映生物體能量代謝的重要指標。本試驗中團頭魴無水?；詈笃咸烟菨舛蕊@著低于未處理狀態（P<0.05），原因可能是魚類適應低溫環境初期，體內糖原轉化為葡萄糖，產生能量以抵御寒冷，但隨著脅迫時間延長，血糖會繼續分解為三磷酸腺苷（ATP），為機體提供能量，從而導致血糖降低[22]，也可能是團頭魴在無水?；钪刑幱谛菝郀顟B，體內新陳代謝速率降低，能量消耗較少；恢復后魚體血糖濃度與對照并無差異（P>0.05），表明團頭魴經過24 h的恢復可以使血糖回復到未處理組水平。本研究發現團頭魴在低溫無水狀態下，血液中乳酸含量明顯高于未處理狀態（P<0.05），表明此時機體內無氧代謝升高，當季暫養水溫恢復后回到未處理水平，有研究表明[23]，低溫馴化或冷應激會使魚類血液中乳酸含量升高。因此表明團頭魴在無水?；钸^程中有氧代謝逐漸降低，而隨著?；顣r間的延長無氧呼吸不斷增加。

AST、ALT是魚類重要的轉氨酶，主要存在于肝臟中，當肝細胞受損時，AST和ALT會被釋放到血液中，因此血清中AST和ALT活力的增加被認為是肝功能損傷最具特異性和廣泛使用的指標[24]。由表2可知，團頭魴休眠14 h后，AST和ALT的活性顯著升高（P<0.05），表明低溫無水環境對團頭魴的肝臟造成損傷，恢復后血液中AST和ALT的活性明顯下降（P<0.05），經過當季暫養水溫中恢復24 h后得到一定修復；但恢復后的AST活性明顯高于未處理水平（P<0.05），這可能是由于長時間的低溫無水環境，機體代謝逐漸以無氧呼吸為主，體內抗氧化系統出現問題，導致團頭魴肝臟造成不可修復的損傷，這可能也是團頭魴不能長時間無水?；畹闹饕蛑?，具體原因需進一步研究。王美垚等[25]研究發現吉富羅非魚30 min內將水溫從25℃將至9℃，在9℃冷應激12 h后，魚體血液中的AST和ALT急劇上升，當季暫養水溫中恢復24 h后ALT回復至未處理組水平，但AST仍顯著高于未處理組值，這與本試驗結果相一致。

ALP可直接參與魚體中磷酸基團的轉移及鈣磷代謝，還能夠改變病原體的表面結構以增強機體對病原體的識別和吞噬能力，因而在魚體內的物質代謝和免疫防護中起重要作用[26]。本研究發現團頭魴無水?；詈笱褐蠥LP活力明顯下降（P<0.05），表明低溫無水環境會導致魚類機體代謝活動下降或免疫能力降低；24 h當季暫養水溫恢復后，血液ALP活性回升到未處理組水平，表明魚體恢復了正常的代謝和免疫能力。

2.3無水?；顚F頭魴魚肉品質的影響

表3為無水?；顚F頭魴肌肉粗脂肪和總蛋白含量、保水性、新鮮度和質構的影響。團頭魴經過無水?；詈蠹∪庵械目偟鞍缀椭竞坎o明顯化（P>0.05），表明團頭魴在低溫無水狀態下肌肉主要成分不會發生改變；團頭魴在未處理、無水和恢復狀態下的肌肉持水力無明顯變化（P>0.05），持水力是指肌肉保持水的能力，主要與蛋白質三位網狀結構和變性程度相關[27]，表明低溫無水狀態不會破環團頭魴肌肉中蛋白質網狀結構，同時不會使蛋白降解。

TVB-N是評價魚類新鮮度的重要指標，而TBA是評價魚類脂肪氧化程度的指標。本試驗中未處理、無水和當季暫養水溫中恢復狀態下TVB-N和TBA并無明顯變化（P>0.05），說明在低溫無水環境對團頭魴肌肉鮮度無影響，且不會導致魚肉中的脂肪氧化，表明3種狀態下的魚類新鮮程度相一致，均可以安全食用；Mi等[21]研究發現鯽魚在丁香酚麻醉后低溫無水?；?8 h會導致肌肉中TVB-N和TBA值明顯升高，這可能是由于使用麻醉劑休眠后長時間無水?；钏?。

質構是衡量魚肉組織特性變化的一項重要指標，是體現魚肉質量的重要指標[28]。本試驗主要考察的質構參數為硬度、咀嚼性和彈性。由表3可知團頭魴無水?；詈篝~肉的硬度和咀嚼性明顯下降（P>0.05），口感有所下降，當季暫養水溫中恢復后不能回到未處理組水平，這可能是由于魚體溫度降低，肌肉活動受到限制所致，也可能是因為團頭魴低溫馴化初期需要大量的能量，肌肉中糖原分解為葡萄糖，葡萄糖繼續分解為水和二氧化碳，使得肌肉中水分增加，而有研究發現[29]魚肉中含水率越高，魚肉的硬度和咀嚼性越低；此外有研究表明[30]冬季的團頭魴肌肉硬度和咀嚼性明顯低于春季。

表3　無水?；顚F頭魴魚肉品質的影響（冬季）Table 3　Effect of waterless keep alive on fish quality of Megalobrama amblycephala (winter)

無水?；顚F頭魴游離氨基酸的影響見表4。本研究發現團頭魴在無水?；钸^程中肌肉中的Ser、Glu、Gly、 Val和Arg等含量顯著升高（P<0.05），除Glu外其他含量當季暫養水溫中恢復后基本都回到未處理組水平；Lys在無水?；钸^程中顯著下降（P<0.05），當季暫養水溫中恢復又明顯升高（P<0.05），顯著高于未處理組水平（P<0.05），而His與之剛好相反，當季暫養水溫中恢復后顯著低于未處理組水平（P<0.05）；Ile、Leu、Tyr和Phe在無水?；钸^程中無明顯變化，當季暫養水溫中恢復后明顯升高（P<0.05）。Zeng等[7]研究發現鯽魚在低溫無水?；钸^程肌肉中Val、Leu和His含量明顯升高，Lys明顯下降。Driedzic等[31]研究發現香魚體內會通過積累甘油以抵御冷應激，游離氨基酸會作為甘油合成的碳源之一。因此，團頭魴在無水?；詈彤敿緯吼B水溫中恢復過程中肌肉游離氨基酸的變化，可能是魚體為抵御低溫和重新適應正常環境體內的正常代謝活動所致，此推測需進一步證實。此外，由于Glu和Gly等呈味氨基酸的增加，無水?；?4 h后團頭魴魚肉口味可能會更加美味；恢復24 h后由于Leu、Ile和Phe等必需氨基酸的增加，可能會使氨基酸配比合理，營養價值更好。

表4　無水?；顚F頭魴魚肉中游離氨基酸含量的影響（冬季）Table 4　Effect of waterless keep alive on fish free amino acid of Megalobrama amblycephala (winter) mmol·g-1

3　結　論

冬季的團頭魴最適宜無水?；?，將團頭魴暫養水溫以2℃/h降至2℃休眠后，裝入木屑鋪墊的袋中充氧包裝，無水?；?4 h后，將團頭魴先移入10℃的水中恢復蘇醒1 h后，再轉入當季暫養水溫中（14.8±0.2℃）恢復24 h后存活率可達100%。

在低溫無水環境中，團頭魴血液中皮質醇和乳酸濃度、谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活力與對照組相比明顯升高（P<0.05），而葡萄糖濃度和堿性磷酸酶活力明顯下降（P<0.05），當季暫養水溫中恢復后基本都回到未處理組狀態，但谷草轉氨酶（AST）活性依然顯著高于未處理組水平（P<0.05），表明無水?；顣F頭魴肝臟造成永久性損傷；無水?；?4 h后魚肉的肌肉組分和新鮮程度并無明顯變化（P>0.05），但魚肉的硬度和咀嚼性明顯下降（P<0.05）。此外魚肉中一些游離氨基酸含量產生明顯變化，如無水?；?4 h后絲氨酸、谷氨酸、甘氨酸、纈氨酸和精氨酸等含量與對照組相比顯著升高（P<0.05），賴氨酸在無水?；钸^程中顯著下降（P<0.05），而當季暫養水溫中恢復24 h后，谷氨酸、賴氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸以及苯丙氨酸含量明顯高于對照組（P<0.05），組氨酸（His）卻顯著低于對照組（P<0.05）。

魚類在無水?；钸^程中的應激反應是系統的、復雜的，可通過研究魚類在此過程中體內抗氧化系統和免疫功能的變化，更加深入地了解無水?；顚︳~類健康狀況的影響，并進一步闡釋魚體的死亡原因。

[參考文獻]

[1] Iwama G W, Pickering A D, Sumpter J P, et al. Fish Stress and Health in Aquaculture[M]. Cambridge University Press, 2011: 35－72.

[2] Heery K. Fish transport in the aquaculture sector: An overview of the road transport of Atlantic salmon in Tasmania[J]. Journal of Veterinary Behavior: Clinical Applications and Research, 2009, 4(4): 163－168.

[3] Golombieski J I, Silva L V F, Baldisserotto B, et al. Transport of silver catfish (Rhamdiaquelen) fingerlings at different times, load densities, and temperatures[J]. Aquaculture, 2003, 216(1): 95－102.

[4] Islam M N, Hossain M A. Mortality rate of fish seeds (Labeorohita) during traditional transportation system in the northwest bangladesh[J]. Journal of Scientific Research, 2013, 5(2): 383－392.

[5] Harmon T S. Methods for reducing stressors and maintaining water quality associated with live fish transport in tanks:a review of the basics[J]. Reviews in Aquaculture, 2009, 1(1): 58－66.

[6] 吳慧曼. 淡水活魚現代流通的裝備技術集成與模式優化研究[D]. 北京：中國農業大學，2014：1－2. Wu Huiman. Research on Equipment and Technology Integrating and Mode Optimizting of the Freshwater-Fish Modern Circulation[D]. Beijing: China agricultural university, 2014: 1－2. (in Chinese with English abstract)

[7] Zeng P, Chen T, Shen J. Effects of cold acclimation and storage temperature on crucian carp (Carassiusauratusgibelio) in a waterless preservation[J]. Fish physiology and biochemistry, 2014, 40(3): 973－982.

[8] Jamie G, Skudlarek S D, Coyle L B. Effect of holding and packing conditions on hemolymph parameters of freshwater prawns, macrobrachiumrosenbergii, during simulated waterless transport[J]. Journal of the world aquaculture society, 2011, 42(5): 603－617.

[9] 白艷龍，譚昭儀，邸向乾，等. 黃顙魚無水?；罴夹g研究[J].食品工業科技，2013，34(1)：334－337. Bai Yanlong, Tan Zaoyi, Di Xiangqian, et al. Research of the keep-alive technology without water of yellow catfish[J]. Science and technology of food industry, 2013, 34(1): 334－337. (in Chinese with English abstract)

[10] 劉偉東，薛長湖，殷邦忠，等. 低溫下大菱鲆有水和無水?；钸^程中生理生化變化的研究[J]. 漁業科學進展，2009，30(5)：69－74. Liu Weidong, Xue Changhu, Yin Bangzhong, et al. Physiological and biochemical change of Scophthalmus maximus kept alive at low temperature with or without water[J]. Progress in Fishery Science, 2009, 30(5): 69－74. (in Chinese with English abstract)

[11] Wysocki L E, Dittami J P, Ladich F. Ship noise and cortisol secretion in European freshwater fishes[J]. Biological Conservation, 2006, 128(4): 501－508.

[12] 劉波. 高溫應激與大黃蒽醌提取物對團頭魴生理反應及相關熱應激蛋白表達的影響[D]. 南京：南京農業大學，2012：90－91. Liu Bo. Effects of high temperature stress and anthraquinone extract form Rheum officinale Bail on the physiological response and gene expression of heat shock protein of Megalobrama amblycephala[D]. Nanjing: Nanjing Agricultural University, 2012: 90－91. (in Chinese with English abstract)

[13] 李念文，湯元睿，謝晶，等. 物流過程中大眼金槍魚(Thunnusobesus) 的品質變化[J]. 食品科學，2013，34(14)：319－323. Li Nianwen, Tang Yuanrui, Xie Jing, et al. Physicochemical quality properties of Thunnusobesus during logistical process[J]. Food Science, 2013, 34(14): 319－323. (in Chinese with English abstract)

[14] GB/T 5009.5-2010, 食品中蛋白質的測定[S].

[15] GB/T 14772-2008, 食品中粗脂肪的測定[S].

[16] SC/T 3032-2007, 水產品中揮發性鹽基氮的測定[S].

[17] Li J K, Hui T, Wang F L, et al. Chinese red pepper (Zanthoxylum bungeanum Maxim.) leaf extract as natural antioxidants in salted silver carp (Hypophthal michthysmolitrix) in dorsal and ventral muscles during processing[J]. Food Control, 2015, 56(10): 9－17.

[18] 方靜，黃卉，李來好，等.不同致死方式對羅非魚魚片品質的影響[J]. 南方水產科學，2013，9(5)：13－18. Fang Jing, Huang Hui , Li Laihao, et al. Effect of different slaughter methods on quality of oreochromissp Fillets [J]. South China Fisheries Science, 2013, 9(5): 13－18. (in Chinese with English abstract)

[19] 鄧捷春，王錫昌，劉源. 暗紋東方鲀與紅鰭東方鲀滋味成分差異研究[J]. 食品工業技，2010，31(3)：106－108. Dong Jiechun, Wang Xichang, Liu Yuan. Study on difference of taste compounds between Fugu obscurus and Fugu rubripes[J]. Science and Technology of Food Industry, 2010, 31(3): 106－108. (in Chinese with English abstract)

[20] Anusha K D, Jorge M F, Viswanath K. Acclimation of Zebrafish to Transport Stress[J]. Zebrafish, 2013, 10(1): 87－98.

[21] Mi H, Qian C, Mao L. Quality and biochemical properties of artificially hibernated crucian carp for waterless preservation[J]. Fish physiology and biochemistry, 2012, 38(6): 1721－1728.

[22] 常玉梅，曹鼎臣，孫效文，等. 低溫脅迫對鯉血清生化指標的影響[J]. 水產學雜志，2006，19(2)：71－75. Chang Yumei, Cao Dingchen, Sun Xiaowen, et al. Changes of serum biochemical indices of cpmmon carp affected bycold temperatures[J]. Chinese Journal of Fisheries, 2006, 19(2): 71－75. (in Chinese with English abstract)

[23] Donaldson M R,Cooke S J, Patterson D A, et al.Cold shock and fish[J]. Journal of Fish Biology, 2008, 73(7): 1491－1530.

[24] 杜浩，危起偉，甘芳，等. 美洲鰣應激后皮質醇激素和血液生化指標的變化[J]. 動物學雜志，2006，41(3)：80－84. Du Hao, Wei Qiwei, Gan Fang, et al. Changes in serum cortisol and blood biochemical parameters after stresses in American shad[J]. Chinese Journal of Zodogy, 2006, 41(3): 80－84. (in Chinese with English abstract)

[25] 王美垚. 急性低溫脅迫及恢復對吉富羅非魚血清生化、免疫以及應激蛋白基因表達的影響[D]. 南京：南京農業大學，2009：23－30. Wang Meiyao. The Effect of Acute Cold Stress and Recovery on the Serum Biochemical, Immune Indices and HSP70 GeneExpression in the Tissues of Gift Strain Nile Tilapia[D]. Nanjing: Nanjing Agricultural University, 2009: 23－30. (in Chinese with English abstract)

[26] 明建華，謝駿，徐跑，等. 大黃素、維生素C及其配伍對團頭魴生長、生理生化指標、抗病原感染以及兩種HSP70s mRNA表達的影響[J]. 水產學報，2010，34(9)：1447－1459. Ming Jianhua, Xie Jun, Xu Pao, et al. Effects of emodin, vitamin C and their combination on growth, physiological and biochemical parameters, disease resistance and two HSP70s mRNA expression of Wuchang bream (Megalobrama amblycephala)[J]. Journal of Fisheries of China, 2010, 34(9): 1447－1459. (in Chinese with English abstract)

[27] Jo Y J, Jung K H, Lee M Y, et al. Effect of high-pressure short-time processing on the physicochemical properties of abalone (Haliotis discus hannai) during refrigerated storage[J]. Innovative Food science & Emerging Technologies, 2014, 23: 33－38.

[28] 湯元睿，謝晶，李念文，等. 不同冷鏈物流過程對金槍魚品質及組織形態的影響[J]. 農業工程學報，2014，30(5)：285－292. Tang Yuanrui, Xie Jing, Li Nianwen, et al. Effects of different cold chain logistics situations on quality and microstructure of tuna (Thunnus obesus) fillets[J]. Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering (Transactions of the CSAE), 2014, 30(5): 285－292. (in Chinese with English abstract)

[29] 林婉玲，關熔，曾慶孝，等. 影響脆肉鯇魚背肌質構特性的因素[J]. 華南理工大學學報：自然科學版，2009，37(4)：135－137. Lin Wanling, Guan Rong, Zeng Qingxiao, et al. Factors Affecting Textural Characteristics of Dorsal Muscle of Crisp Grass Carp[J]. Journal of south china university of technology (Natural science edition), 2009, 37(4): 135－137. (in Chinese with English abstract)

[30] 胡芬，李小定，熊善柏，等. 5種淡水魚肉的質構特性及與營養成分的相關性分析[J]. 食品科學，2011，32(11)：69－73. Hu Fen, Li Xiaoding, Xiong Shanbai, et al. Texture properties of freshwater fish and their correlation with nutritional components[J]. Food Science, 2011, 32(11): 69－73. (in Chinese with English abstract)

[31] Driedzic W R, Ewart K V. Control of glycerol production by rainbow smelt (Osmerusmordax) to provide freeze resistance and allow foraging at low winter temperatures[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry & Molecular Biology, 2004, 139(3): 347－357.

Change of physiological stress and flesh quality of Megalobrama amblycephala during suitable waterless keep alive conditions

Liu Xiao, Xie Jing※, Yang Xi, Dong Hanbo, Zhang Xinlin
(Shanghai Engineering Research Center of Aquatic Product Processing & Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)

Abstract:Currently circulation mode of freshwater fish was water transport. Commercial cost and several transportation procedures, including catch, temporary culture, transport shake, loading, unloading and distribution, induced harmful stress in fish, caused injury and even death. Related research showed the loss cost accounted for about 10% of the total cost in China, which was 20 times that in developed countries. Therefore, waterless keep alive transport of freshwater fish was more and more taken seriously. Hibernated temperature, packing method, survival time and survival rate of four seasons fish live in waterless environment were researched in order to investigate the effects of physiological stress and flesh quality of Megalobrama amblycephala during suitable waterless keep alive condition.Fish were examined at different time points: living in normal temperature (control), waterlessly keeping alive for 14 h (waterless) and then recovering in normal temperature for 24 h (recover). Blood biochemical items including cortisol (COR), glucose (GLU) and lactic acid (LAC) concentration, aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT) and alkaline phosphatase (ALP) activity were determinated and flesh quality indicators such as water holding capacity, total volatile basic nitrogen (TVB-N), thiobarbituric acid (TBA), texture and free amino acids were studied. The results showed: suitable living temperature of Megalobrama amblycephala for waterless keep alive was (14.8±0.2)℃ (at winter), and then dropped (2℃/h) living temperature to 2℃ (hibernated temperature). The hibernated fish were packaged in moist wood-shavings but without added water by plastic bag (120 cm×90 cm) and oxygen-rich atmosphere (80% O2), finally plastic bag was sealed and placed at 2℃ for 14h, survival rate reached 100% after (14.8±0.2)℃ (normal temperature)recovery 24 h. Blood COR and LAC concentration, AST and ALT activity of fish keep alive 14h in waterless were significantly higher than normal level (control) (P<0.05), while blood GLU concentration and ALP activity were significantly lower than normal level (P<0.05). After recovery 24 h, most blood biochemical values returned to normal level, except for blood AST activity was still significantly higher than normal value. Protein and fat content, TVB-N, TBA and the water holding capacity of fish flesh were not influenced in low temperature waterless environment, but the fish flesh hardness and chewiness were significantly decreased (P<0.05). Free amino acids Ser, Glu, Gly, Val and Arg of fish flesh at waterless were significantly higher than normal value (P<0.05), concentrations of Ile, Leu, Tyr, Phe at waterless were not significantly change with normal , however, after recovery 24 h, them were significantly higher than normal (P<0.05). In conclusion, the stress induced by the cold and waterless condition in fish can be eliminated 24 h after recovery, and the changes of fish tasting quality are not significant. The results provide a reference for the application of waterlessly keeping alive in transportation of live freshwater fish.

Keywords:quality control; temperature; fish; Megalobrama amblycephala; waterless keep alive; physiological stress

通信作者：※謝晶，女，上海海洋大學食品學院，教授，博士生導師。上海上海水產品加工及貯藏工程技術研究中心，上海海洋大學食品學院，201306。Email：jxie@shou.edu.cn

作者簡介：劉驍，男，山東省安丘市，博士生，研究方向：食品工程。上海上海水產品加工及貯藏工程技術研究中心，上海海洋大學食品學院，201306。Email：lliuxiao0515@aliyun.com

基金項目：“十二五”國家支撐計劃項目（2012BAD38B04），2013年上海市科技興農重點攻關項目[滬農科攻字（2013）第3－4字]

收稿日期：2015-09-04

修訂日期：2015-11-30

中圖分類號：TS254.1

文獻標志碼：A

文章編號：1002-6819(2016)-03-0295-06

doi：10.11975/j.issn.1002-6819.2016.03.042