額力根-Ⅱ號對肝纖維化大鼠肝臟組織形態學的影響

齊玉梅 呼和木仁

(1.內蒙古精神衛生中心，內蒙古 呼和浩特 010010；2.內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110)

額力根-Ⅱ號對肝纖維化大鼠肝臟組織形態學的影響

齊玉梅1呼和木仁2*

(1.內蒙古精神衛生中心，內蒙古 呼和浩特 010010；2.內蒙古醫科大學，內蒙古 呼和浩特 010110)

目的：實驗觀察蒙藥額力根-Ⅱ號對四氯化碳和乙醇符合因素所致肝纖維化模型大鼠肝臟組織形態學的影響，探討受試藥對肝纖維化的干預機制。方法：Wistar大鼠72只，隨機分成6組即對照組，模型組，額力根-Ⅱ號高、中、低劑量組，陽性對照組，每組12只。用四氯化碳(CCL4)和乙醇符合因素造成肝纖維化大鼠模型的同時給予額力根-Ⅱ號各劑量和護肝片，一定時間后將全部大鼠處死，留取肝組織行HE染色觀察肝臟組織的病理變化并進行肝組織纖維化分期評分。結果：額力根-Ⅱ號高、中劑量組和護肝片組纖維化評分顯著低于模型組(P<0.05)。額力根-Ⅱ號高、中劑量組和陽性對照組肝假小葉周圍纖維組織增生減少,部分區域纖維組織消失,肝細胞脂肪變性減少。結論：額力根-Ⅱ號對大鼠實驗性肝纖維化有防治作用。

額力根-Ⅱ號；肝纖維；組織形態學

蒙藥額力根-Ⅱ號( 加味石榴-11) 是多年臨床治療肝病有較好療效的蒙醫驗方,由石榴、訶子、桅子、砂仁、冬蟲夏草、藏紅花、扁蕾等18味藥物組成,有清肝火、解毒、調理三根、養胃和肝、增強體質之功效[1]。本研究通過實驗觀察蒙藥額力根-Ⅱ號對CCL4和乙醇復合因素所致肝纖維化模型大鼠肝臟組織形態學的影響，評價額力根-Ⅱ號抗肝纖維化作用。

1 實驗材料

1.1 實驗動物：Wistar大白鼠,體重200±20g,雌雄兼有,由內蒙古大學實驗動物研究中心提供，動物合格質量號：內實動管質(98)8號。

1.2 藥品及試劑:蒙藥額力根-Ⅱ號散(丸)，由阿拉善盟阿拉騰蒙醫?？漆t院提供；護肝片，吉林省羅邦藥業有限公司產，批號20080505；羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)，天津市福晨化學試劑廠，批號20070225；甲醛溶液，天津市化學試劑三廠，批號20070618；四氯化碳(CCl4)，天津市化學試劑第三廠，批號：061114。

1.3 實驗儀器：TL-820型切片機，湖北泰維科技實業有限公司；TEC-2602烘片儀，常州市郝思琳醫用儀器有限公司；TKD-BMB 型石蠟包埋機，湖北孝感市泰康達醫療設備有限公司；JA503型精密電子天平，上海?？惦娮觾x器廠產；ACS-H1型電子計重稱，浙江凱豐集團有限公司產。

2 實驗方法

2.1 動物模型制備及分組：取大白鼠72只，體重200±20g，雌雄各半，按性別、體重均衡隨機分成6組即對照組，模型組，額力根-Ⅱ號高、中、低劑量組，陽性對照組，每組12只。從實驗第1天開始除對照組(灌服等量花生油)外其它5組大鼠,以10%CCl4花生油溶液5mL/kg灌胃進行造模,每3天造1次模,并以5%乙醇代水任其飲用(除對照組),周期共8周。額力根-Ⅱ號高、中及低劑量組分別給予10.28%﹑5.14%﹑2.57%額力根-Ⅱ號散(丸)混懸液(1.03g/kg.d-1﹑0.51g/kg.d-1﹑0.26g/kg.d-1)10mL/Kg灌胃；陽性對照組給予2.32%護肝片混懸液(0.69g/Kg.d-1)，以10mL/kg灌胃，對照組和模型組給同量(10mL/kg)0.5%CMC-Na水溶液(即空白賦形劑)，均為實驗第一天開始每日1次，連續共8周[2-9]。

2.2 標本的收集與處理：末次給藥后禁食24h,斷頭處死剖取肝臟10%甲醛溶液固定作病理切片檢測待檢。

2.3 肝臟病理檢測：所有肝臟標本經10%甲醛固定，于同一部位肝組織取材 ,石蠟包埋、切片、HE染色、光鏡下觀察肝組織形態學改變，并參照 Scheuer纖維化評分系統進行評分，0分為無纖維化; 1分為匯管區擴大; 2分為匯管區纖維化，少量間隔形成; 3分為纖維間隔形成明顯伴小葉結構紊亂;4分為可能或肯定的肝硬化[10-12]。

2.4 統計學方法：統計學處理采用 SPSS17.0統計軟件。計量資料采用均值±標準差(±SD)表示，p<0.05表示差異具有顯著性。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠肝臟組織病理學改變：對照組肝細胞呈放射狀排列在中央靜脈周圍,肝小葉結構完整,無肝細胞脂肪變性、壞死，無炎性細胞浸潤及纖維組織增生(圖1)。模型組大鼠病理損害嚴重,肝小葉結構被破壞,肝細胞氣球樣變和脂肪變性,肝小葉周圍明顯壞死，纖維組織增生,包繞新生肝細胞形成小葉結構,小葉間匯管區內炎細胞浸潤,肝假小葉形成,匯管區內膽小管增生,肝竇擴張充血(圖2),提示有明顯的肝損傷及慢性肝纖維化表現。受試藥額力根-Ⅱ號高、中劑量組和陽性對照組肝假小葉周圍纖維組織增生減少,部分區域纖維組織消失,肝細胞脂肪變性減少,匯管區內仍可見炎細胞浸潤,假小葉內肝細胞體積有所縮小,單核細胞的肝細胞數量增多,肝小葉間匯管區及肝竇血管擴張充血減輕(圖3、圖4、圖6)，額力根-Ⅱ號低劑量組雖可見上述病理變化不如額力根-Ⅱ號高、中劑量組和陽性對照組但比模型組輕(圖5)，提示額力根-Ⅱ號和護肝片對CCl4和乙醇復合因素所致慢性肝纖維化模型大鼠的肝組織形態學指標有良性調整作用。

3.2 各組大鼠肝纖維化病理分期及評分：模型組纖維化評分顯著高于對照組(P<0.01)，提示CCL4和乙醇符合因素致Wistar大鼠肝纖維化模型造?；境晒?。蒙藥額力根-Ⅱ號高、中劑量組和護肝片組纖維化評分顯著低于模型組(P<0.05)。此外，額力根-Ⅱ號低劑量組纖維化評分低于模型組，但無顯著意義(P>0.05)。額力根-Ⅱ號各劑量組與陽性對照組比較纖維化評分無顯著意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組大鼠肝臟組織纖維化分期評分結果

注：與模型組比較*P<0.01；與模型組比較#P<0.05

4 結論

肝纖維化是指肝臟纖維性結締組織異常增生,是肝硬化早期階段, 而纖維化的發生與肝細胞壞死、間質炎性反應及肝細胞再生缺陷密切相關。因此, 抑制肝細胞變性壞死、減輕炎性反應, 促進肝細胞再生則可抑制肝纖維增生, 防止肝硬化的發生[13]。從病理組織學分析, 肝臟纖維組織異常增生是機體的一種自我保護機制, 即將不同程度變性壞死的肝實質進行分隔,一方面可以阻斷肝細胞毒性物質(病毒或細菌)的進一步侵襲, 另一方面可以保護功能相對較好的肝組織的功能。肝臟纖維細胞增生的同時, 變性壞損區域的肝臟細胞也異常增生[14]。CCL4在肝內經混合功能氧化酶作用形成三氯甲基自由基,啟動脂質過氧化作用損傷肝細胞。如長期反復多次給予CCL4，可至肝內纖維增生，并逐漸加重形成肝硬化。乙醇能促進CCL4吸收和細胞膜脂質過氧化[15]。

本實驗結果表明,蒙藥額力根-Ⅱ號高劑量和中劑量組大鼠肝組織假小葉周圍纖維組織增生減少,部分區域纖維組織消失,肝細胞脂肪變性減少,病理狀態明顯改善，與模型組相比，肝組織纖維化評分明顯降低，差異具有顯著性(P<0.05)。上述結果表明，額力根-Ⅱ號有一定的抗肝纖維化作用，且隨使用劑量的增加，其抗肝纖維化的作用也逐漸增強。其具體作用機制有待進一步研究。

[1]薩爾娜，阿拉騰圖稚.蒙藥額力根-Ⅱ號治療慢性乙型肝炎臨床研究 [J].中國民族醫藥雜志，2010，8(8)：11-14.

[2] 巴根那，白梅榮，王金花,等.蒙藥肝樂康膠囊抗肝纖維化的實驗研究[J].中國現代中藥雜志，2006，8(5)：16-18.

[3] 鄭敏，陳聰，趙雅萍,等.探討大鼠肝硬化動物模型的建立方法[J].肝膽外科雜志，2006，12(2)：136-137.

[4] 丁體龍，馬勇，嚴家春.“抗纖湯”治療四氯化碳致肝纖維化大鼠模型的實驗研究[J].東南國防醫藥雜志，2004，6(3)：175-176.

[5] 陳效鵬，吳同生，胡葉紅.大鼠持久性肝硬化動物模型的建立[J].實用肝臟病雜志，2006，9(4)：195-197.

[6] 王霞.肝纖維化相關血清標志物的聯合檢測與臨床應用研究[J].中國實驗診斷學，2006，10(11)：1339-1341.

[7] 陳波，何生.肝纖維化動物模型的建立[J].華西醫學雜志，2005，20(4)：796-797.

[8] 葉其馨，黎壯偉，鐘美香.當歸赤芍湯抗大鼠肝纖維化的實驗研究[J].海南醫學,2005,16(8):136-143.

[9] 李亮,繆英年,月辰,等.平肝湯抗大鼠肝纖維化的實驗研究[J].中國中醫藥信息雜志,2005,12(4):27-29.

[10] Scheuer.PJ.Classification of chronic viral hepatitis: a need for reassessment[J].J Hepatol，1991，13 (3):372-374.

[11] 楊莉,葉立紅,田岳飏,等. 軟肝化堅顆粒對小鼠肝纖維化模型組織病理的影響[J]. 河北中醫藥學報，2011,26(1):3-5.

[12] 孫俠,黃小瓊,鐘海潮,等.四氯化碳、酒精與四氯化碳聯合、膽管結扎致SD大鼠肝纖維化病理學比較[J].中國比較醫學雜志，2012,3(3):36 -39.

[13] 李立華,張國升,戴敏,等.蘆根多糖對四氯化碳致肝纖維化大鼠的保肝作用[J].安徽中醫學院學報,2005,4(2):24-26.

[14] 徐川,董云旭,單鴻.在CCl4誘導的大鼠肝臟纖維化模型中肝功、肝臟纖維化程度的監測[J].中國實驗診斷學雜志,2007，9(9):1137-1140.

[15] 徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實驗方法學[M].第三版.北京：北京人民衛生出,2003,1346.

2016年11月13日收稿

R291.2

A

1006-6810(2016)12-0032-03

*通訊作者：呼和木仁