慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴細胞亞群表達及意義分析

張愛妹 萬引

慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴細胞亞群表達及意義分析

張愛妹 萬引

目的 研究慢性阻塞性肺疾?。–OPD）患者T淋巴細胞亞群的表達及意義。方法 隨機收集COPD患者30例及健康對照組20例，分別檢測兩組T淋巴細胞亞群表達水平。結果 COPD患者患者CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均低于健康對照組，CD8+高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 COPD患者存在細胞免疫功能紊亂，患者細胞免疫功能下降。T淋巴細胞亞群表達失衡在COPD發病中起著重要的作用。

慢性阻塞性肺疾??；T淋巴細胞亞群；細胞檢測

我國即將步入老年社會，慢性阻塞性肺疾病是危害老年人健康的常見病、多發病，由于其緩慢進行性發展，嚴重影響患者的勞動能力和生活質量。COPD的發病機制尚未完全明了，隨著研究的深入，近年來對COPD的發病機制有了進一步的加深，其中T淋巴細胞亞群表達失衡在其發病中起著重要的作用[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料 觀察本院2013年9月～2014年10月住院的COPD患者30例，所選病例符合《慢性阻塞性肺疾病診治指南》的診斷標準，并排除伴有免疫功能嚴重疾病、近半月內未使用糖皮質激素、免疫抑制劑及免疫調節劑。其中男25例，女5例，年齡60～70歲患者15例，70～80歲患者12例，＞80歲患者3例。健康對照組20例，其中男16例，女4例，年齡60～70歲患者12例，70～80歲患者8例。健康對照組與慢性阻塞性肺疾病患者組（COPD組）在一般資料上差異無統計學意義。

1.2 實驗儀器 上海匯中細胞生物科技有限公司的CytoCounter全自動可視化細胞檢測儀。SEMIBLO玻片干燥儀。

1.3 操作準備 （1）配制磷酸鹽緩沖液：將1包磷酸鹽緩沖液粉劑倒入SemiBio?專用缸中，加水至400 mL刻度線，完全溶解后混勻即可。（2）配制過氧化酶染色液：將1包過氧化酶染色粉倒入SemiBio?專用缸中，再加95%乙醇至500 mL刻度線，充分攪拌至少5分鐘。（3）配制復染液：將1包復染粉倒入SemiBio?專用缸中，再加75%乙醇至500 mL刻度線，充分攪拌至溶解。

1.4 操作方法 （1）靜脈血標本：吸取20?L搖勻K2 EDTA抗凝全血加于相對應編號的380?L磷酸鹽緩沖液中，即刻混勻。（2）將濕盒置于水平工作臺，加室溫水至濕盒底部被完全覆蓋。注意濕盒支架處應保持干燥。（3）取出玻片，將包被面朝上，按序將標簽貼于玻片一端，后將玻片置于濕盒支架上(勿使玻片接觸到水)。（4）吸取5?L稀釋血樣，滴入玻片方框區域中央。確認沒有血樣流出，且框內無氣泡，蓋緊盒蓋，室溫（20℃～30℃）孵育40 min。（5）孵育40 min后，將玻片按序插入玻片架。（6）將玻片架即刻放入磷酸鹽緩沖液中，旋轉提拉直至玻片呈無色透明。（7）將玻片架即刻放入過氧化酶染色液中，靜置1 min。（8）在步驟7計時1 min內，將1 mL 2.5%～3.5%過氧化氫溶液加入預先盛有水（至400 mL刻度線）專用缸中，攪拌均勻后制成新鮮工作溶液。（9）將稍加瀝干的玻片架轉入新鮮過氧化氫工作溶液中，靜置4 min。（10）將玻片架轉入75%乙醇（400 mL）專用缸中，旋轉提拉至干凈，提出后振去多余乙醇。（11）打開玻片架搭扣，將其置于SemiBio?自動玻片干燥儀下干燥6 min，確保黑框內干燥。（12）將玻片架放入復染液中，靜置1 min。（13）將玻片架轉入純水（500 mL）專用缸中，靜置30秒，其后根據玻片數量不等提拉相應次數，提出后振去多余水分。注意：玻片數＜15片，提拉3次；玻片數≥15片，提拉5次。（14）打開玻片架搭扣，將其置于

SemiBio?自動玻片干燥儀下吹干。注意：為縮短干燥時間，待玻片黑框內吹干后，可用紙擦干周圍水分。（15）通過SemiBio?

全自動可視化細胞檢測儀，現場或異地，隨時進行細胞自動計數、分析。注意：若細胞顏色淡而影響軟件識別，請重復步驟

12～14。

1.5 觀察指標 檢測COPD患者及健康對照組外周血中

T淋巴細胞亞群表達水平。

1.6 統計學方法 利用SPSS 17.0統計軟件，計量資料采用“x±s”表示，組間比較采用t檢驗，計數資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

COPD患者CD3+、CD4+水平、CD4+／CD8+比值均低于健康對照組，CD8+高于健康對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2組患者CD3+、CD4+水平、CD4+／CD8+比值比較（x±s）

3 討論

慢性阻塞性肺疾病是一種破壞性的肺部疾病，是以不完全可逆的氣流受限為特征的疾病,氣流受限通常呈進行性發展并與肺對有害顆?；驓怏w的異常炎癥反應有關。COPD是一種可以預防和治療的慢性氣道炎癥性疾病。該病患病人數眾多，是目前全球第四大死因，且發病率仍不斷上升[2]。除目前公認的發病機制外，近年來越來越多的研究顯示自身免疫可能是COPD發病的關鍵機制。T淋巴細胞是人體內主要的免疫功能細胞，主要分為CD4、CD8兩個亞群。本資料顯示COPD患者CD3+、CD4+水平、CD4+／CD8+比值均低于健康對照組，CD8+高于健康對照組,與早期研究報告一致[3-6]。CD3+是人體總的T淋巴細胞，CD4+為輔助性T淋巴細胞，調控免疫反應，直接反應人體的免疫狀況，CD4+／CD8+比值降低是機體免疫功能下降的重要標志，可反應疾病的嚴重程度[7]。本資料中，COPD患者CD3+、CD4+下降，CD8+增高，說明CD3+下降主要由CD4+下降所致，外周血中成熟T淋巴細胞總數下降。CD4+下降及CD4+／CD8+比值降低，說明COPD患者免疫功能下降，繼發感染風險性增加。故臨床上可將CD4+／CD8+比值測定來反應COPD患者的嚴重程度及預后。目前COPD治療主要以抗感染、解痙平喘等傳統治療為主，隨著患者年齡增大及人體免疫力持續下降，更易反復感染導致發作加重，而COPD反復急性加重將導致患者免疫力進一步下降，形成惡性循環，增加患者痛苦及經濟負擔。因此，提高人體自身免疫，預防COPD發生及進展引起了眾多研究者的重視，我們期待越來越多的研究者投入到此項研究中來，為我們廣大的COPD患者帶來新的希望。

[1] BarceloB,Pons J,Ferrer JM,et al.Phenotypic characterisati-on of T-lymphocytes in COPD： abnormal CD4+CD25+regula-tory T-lymphocyte response to tobacco smoking[J].EuropeanRespiratory Journal,2008,31(3)： 555-562.

[2] Anna M.Stefanska,Patrick T.Walsh.Chronic Obstructive Pulmonary Disease：Evide-nce for an Autoimmune Component[J].Cellular & Molecular Immunology,2009,6(2)：81-86.

[3] kemeny DM,Vyas B,Vukmanovic-stejic M,et al.CD8+T cell subsets and chronic obstructive pulmonary disease.AMJ Respir Crit care Med,1999, 160：33-37.

[4] 黃美建，冷報浪，梁斌，等.慢性阻塞性肺疾病不同病期細胞免疫功能德國臨床研究[J].浙江臨床醫學，2004（8）：664-665．

[5] 趙寅瀅，惠復新．慢性阻塞性肺疾病患者T淋巴細胞亞群變化[J].中國現代藥物運用，2008（2）：69-70．

[6] Davidson WJ,Verity WS,Traves SL,et al.Effect of incre-mental exercise on airway and systemic inflammation inpatients with COPD[J].J Appl Physiol,2012,112(12)：2049-2056．

[7] Synala H，Surcel HM，Honen J．Low CD4／CD8 lymphocyte ratio in acute myo-cardial infarction[J]．Clin Exp Immunol，1991，83：326．

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.34.034

江西 330006 江西省胸科醫院呼吸二科（張愛妹 萬引）